趙永德，田洪根，丁長(zhǎng)玲，丁召興，崔光懷，劉呈華（.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濱州56603；.濱州市藥品檢驗(yàn)所，山東濱州 5668）

復(fù)方磺胺嘧啶銀混懸液是濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院研制的一種治療燒傷、燙傷用特色藥物。其中的組分磺胺嘧啶銀保持了磺胺嘧啶及銀離子兩者的抗菌作用，除能控制創(chuàng)面感染外，還可促使創(chuàng)面干燥、結(jié)痂和促進(jìn)愈合；另一種組分醋酸氯己定對(duì)易造成創(chuàng)面感染的革蘭陽(yáng)性球菌和革蘭陰性桿菌也有較強(qiáng)的抑制和殺滅作用，二者合用具有協(xié)同抗菌作用[1]。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，有采用永停滴定法[2]和紫外分光光度法[3]測(cè)定磺胺嘧啶銀含量的報(bào)道，但是經(jīng)筆者試驗(yàn)，這2種方法均不能有效分離2種組分，因此不能消除本品中磺胺嘧啶與醋酸氯己定之間的相互干擾。為進(jìn)一步完善該品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證檢驗(yàn)質(zhì)量，筆者參照《美國(guó)藥典》中磺胺嘧啶銀原料藥及其制劑的含量測(cè)定方法[4]，建立了以高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定該制劑中的2種組分含量的方法，并取得了滿意的效果。

1 材料

LC-20A HPLC儀、LC-20AT紫外檢測(cè)器（日本島津公司）。

磺胺嘧啶銀混懸液（濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，批號(hào)：20110503、20110602、20110626，規(guī)格：磺胺嘧啶銀5 g∶100 ml、醋酸氯己定0.1 g∶100 ml）；磺胺嘧啶銀對(duì)照品（湖南化學(xué)試劑總廠，批號(hào)：20060101，純度：99.2%）；醋酸氯己定對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：130183-200101，純度：99.0%）；乙腈為色譜純，水為純凈水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相A：0.8%三乙胺（冰醋酸調(diào)pH至4.9），流動(dòng)相B：甲醇[先以流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（90∶10）進(jìn)行洗脫，磺胺嘧啶出峰時(shí)間約為10 min；待磺胺嘧啶出峰后，立即改以流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（60∶40）洗脫10 min，檢測(cè)醋酸氯己定]，流速：1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量：20 μl。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

2.2.1 磺胺嘧啶銀對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)定磺胺嘧啶銀對(duì)照品51.00 mg，置于50 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為磺胺嘧啶銀對(duì)照品貯備液（1.02 mg/ml）；精密量取對(duì)照品貯備液5 ml，置于50 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.2 醋酸氯己定對(duì)照品溶液。精密稱(chēng)取醋酸氯己定對(duì)照品20.32 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為醋酸氯己定對(duì)照品貯備液（0.4064 mg/ml）；精密量取對(duì)照品貯備液5 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 供試品溶液（測(cè)定磺胺嘧啶銀）。精密量取本品2 ml，置于50 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液5 ml，置于100 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3.2 供試品溶液（測(cè)定醋酸氯己定）。精密量取本品2 ml，置于50 ml量瓶中，加甲醇適量，超聲3～5 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，即得。

分別取2種組分的對(duì)照品和供試品溶液進(jìn)樣，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1 磺胺嘧啶銀。分別精密量取磺胺嘧啶銀對(duì)照品貯備液（1.02 mg/ml）2.50、3.75、5.00、6.25、7.50 ml，置于 50 ml量瓶中，用0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度。精密吸取上述對(duì)照品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程為y＝18092412c－47970（r＝0.9999），表明磺胺嘧啶銀檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.051～0.153 mg/ml。

2.4.2 醋酸氯己定。分別精密量取醋酸氯己定對(duì)照品貯備液（0.4064 mg/ml）2.50、3.75、5.00、6.25、7.50 ml，置于50 ml量瓶中，用甲醇溶液稀釋至刻度；精密吸取上述溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定。以峰面積（y）為縱坐標(biāo)，濃度（c）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得方程為y＝1084787c－42561（r＝0.9999），表明醋酸氯己定檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為20.32～60.96μg/ml。

2.5 精密度試驗(yàn)

分別精密吸取2種供試品溶液各20μl，各重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算RSD，結(jié)果磺胺嘧啶和醋酸氯己定峰面積的RSD分別為1.3%、0.76%，符合規(guī)定，表明該方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取2種供試品溶液各20 μl，分別在0、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定2種組分的峰面積，結(jié)果磺胺嘧啶和醋酸氯己定峰面積的RSD分別為0.72%、0.99%，符合規(guī)定，表明2種供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均較好。

2.7 加樣回收率試驗(yàn)

2.7.1 磺胺嘧啶銀。精密量取已知磺胺嘧啶銀含量的樣品（批號(hào)：20110503，磺胺嘧啶銀為標(biāo)示量的98.1%）1 ml，置于50 ml量瓶中，加磺胺嘧啶銀對(duì)照品貯備液0.5 ml，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)。精密量取續(xù)濾液5 ml，置于100 ml量瓶中，加0.03 mol/L的鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液。取樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為99.3%，RSD＝0.75%，詳見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝6）Tab 1 Result of recovery test（n＝6）

2.7.2 醋酸氯己定。精密量取已知醋酸氯己定含量的樣品（批號(hào)：20110602，醋酸氯己定為標(biāo)示量的99.4%）1 ml，置于50 ml量瓶中，加醋酸氯己定對(duì)照品貯備液2.5 ml，加甲醇適量，超聲3～5 min，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，得供試品溶液。取樣測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均回收率為98.0%，RSD＝0.90%，詳見(jiàn)表1。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：20110503）6份，制備成供試品溶液并測(cè)定，計(jì)算供試品中磺胺嘧啶銀及醋酸氯己定的含量和RSD。結(jié)果，磺胺嘧啶銀和醋酸氯己定含量分別為標(biāo)示量的98.1%和99.4%，RSD分別為0.90%、0.61%，表明該方法具有良好的重復(fù)性。

2.9 含量測(cè)定結(jié)果

取3批樣品，按“2.3”項(xiàng)下方法制備成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3批樣品含量測(cè)定結(jié)果Tab 2 Result of content determination of 3 batches of samples

3 討論

3.1 溶劑的選擇

筆者根據(jù)磺胺嘧啶銀和醋酸氯己定的溶解性差異選擇了不同的溶劑制備相關(guān)的供試品溶液：以0.03 mol/L的鹽酸溶液作溶劑可使磺胺嘧啶銀完全溶解，而醋酸氯己定幾乎不溶于鹽酸溶液；而采用甲醇作溶劑，可使醋酸氯己定完全溶解，而磺胺嘧啶銀幾乎不溶于甲醇，從而避免了兩者的相互干擾[5]。

3.2 流動(dòng)相及洗脫方法的選擇

筆者嘗試使用能同時(shí)測(cè)定2種組分的流動(dòng)相，雖經(jīng)多次試驗(yàn)但均未找到合適的流動(dòng)相。因此，最終通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相各組分的比例對(duì)2種組分分別進(jìn)行測(cè)定。

3.3 流動(dòng)相比例的選擇

由于本品中2種組分的極性相差較大，二者在色譜柱上的保留時(shí)間差別也較大，如果僅采用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（90∶10）進(jìn)行洗脫，磺胺嘧啶大約在10 min左右出峰，而醋酸氯己定60 min后也未見(jiàn)其出峰；如果僅采用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（60∶40）進(jìn)行洗脫，醋酸氯己定大約在7 min出峰，而磺胺嘧啶在色譜柱上幾乎無(wú)保留，2 min內(nèi)就出峰。為了保證檢測(cè)方法的實(shí)用性和結(jié)果的準(zhǔn)確性，筆者最終采用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（90∶10）的比例測(cè)定磺胺嘧啶，采用流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（60∶40）的比例測(cè)定醋酸氯己定，結(jié)果表明方法可行。

試驗(yàn)中磺胺嘧啶測(cè)定時(shí)采用了“立即改以流動(dòng)相A-流動(dòng)相B（60∶40）洗脫10 min”的操作，是為了將供試品溶液中可能存在的極微量的醋酸氯己定快速?gòu)纳V柱上洗脫下來(lái)，避免醋酸氯己定的強(qiáng)保留性對(duì)磺胺嘧啶測(cè)定產(chǎn)生影響。

綜上，采用本文建立的HPLC法可使磺胺嘧啶銀和醋酸氯己定完全分離，避免了相互干擾，且方法簡(jiǎn)便、靈敏，能有效控制該制劑質(zhì)量。

[1]中國(guó)藥品生物制品檢定所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2005：313-318.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1145-1146.

[3]黎月玲，古淑儀，謝紹婷，等.磺胺嘧啶銀貼劑的制備及質(zhì)量控制[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2009，29（4）：326.

[4]United States Pharmacopeial Convention.USP：24[S].Washington DC：Pharmacopeial Convention，Inc.，2000：1566.

[5]李小榮.高效液相色譜法測(cè)定醋酸氯己定緩釋凝膠中醋酸氯己定的含量[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2008，28（19）：1727.