劉 祥，歐陽明安

(福建農(nóng)林大學生物農(nóng)藥與化學生物學教育部重點實驗室，福建福州350002)

菟絲子在我國分布非常廣泛，主產(chǎn)山東、陜西、吉林、河北、山西、江蘇、黑龍江、新疆等。全國形成商品的主要來源于4類:菟絲子(Cuscuta．chinensis Lam．)、歐洲菟絲子(C．europaea L．)、南方菟絲子(C．a(chǎn)ustralis R．Br．)、金燈藤(C．japonica Choisy)，根據(jù)藥材商品調(diào)查結(jié)果，南方菟絲子是近年來的主流商品。大菟絲子的性狀與菟絲子相似，較大;海濱菟絲子(C．maritima Mak．)在少數(shù)地區(qū)亦作為菟絲子入藥。2000年版《中國藥典》收載為旋花科植物菟絲子(C．chinensis Lam．)的干燥成熟種子。菟絲子已知含有一些抗菌，抗病毒和抗增殖的物質(zhì)(Khan et al．，2010;Patel et al．，2012;Suresh et al．，2011)，其化學成分主要包括甾醇類、黃酮、多糖、蛋白質(zhì)、淀粉、香豆精、蒲公英黃質(zhì)、胡蘿卜素類、有機酸、脂肪酸、氨基酸、淀粉酶等。黃酮類化合物:黃酮類物質(zhì)是菟絲子的主要活性成分，黃酮可用于鑒別南方菟絲子和菟絲子(郭洪祝，1997)。郭澄等(1997)首次從南方菟絲子中分離鑒定出山萘酚、紫云英苷、槲皮素。郭洪祝等研究發(fā)現(xiàn)南方菟絲子中所含的黃酮主要為槲皮素及其糖苷。甾類化合物:從3種菟絲子中分離鑒定出 -谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇、膽固醇、-谷甾醇-3-O-β-D吡喃木糖苷、豆甾烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、豆甾-5-稀基-3-乙酸、豆甾-5-烯-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷四乙酸、燕麥甾醇、胡蘿卜苷、-谷甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(郭澄等，1997;Kwon，2000;Anis，1999)。萜類化合物:二萜糖苷類化合物南方菟絲子苷A(australiside A)從南方菟絲子中分離鑒定出(郭洪祝，2000)。揮發(fā)油成分:候冬巖等(2003)分離鑒定出金燈藤中的揮發(fā)油成分包括:3-乙基-2-己烯、葵烷、2-環(huán)己烯-1-酮、3-乙烯-2-酮、2，6-二甲基十一烷、2-戊基呋喃、E-2-己烯-1-醇、2-庚酮、2，3，3-三甲基1-丁烯、十一烷、十二烷、十三烷。而在菟絲子成分中相同的只有2-戊基呋喃和十二烷，其它的成分還有糠醛、庚醛、3-丁烯-2-醇、2-呋喃甲醇、冰片、3，7-二甲基-1，6-辛二烯-3-醇、石竹烯、α-萜品醇，α-石竹烯。生物堿類化合物:從菟絲子分離鑒定了色氨酸衍生物生物堿菟絲子胺、甲基金雀花堿、7＇-(3＇，4＇-二羥基苯)-N-(4-丙烯胺)、sophoranol、matrine、7＇-(4＇-羥基-3＇-甲氧基苯)-N-［(4-丁基苯)乙基］丙烯胺(Ruben，1995;Anis et al．，2002)。木脂素類化合物:從菟絲子中分離到菟絲子苷A、B(cuscutoside A，B)和新菟絲子苷A，B，C(neocuscutosside A，B，C)(Yahara，1994;Xiang，2001)。多糖類化合物:從菟絲子中分離出酸性多分支的雜多糖 H3，CHC-1，CS-A，CS-B，CS-C(Wang et al．，2001;Bao et al．，2002)。氨基酸及微量元素:菟絲子中含有16種氨基酸，氨基酸的總含量為75．59 mg/100g，其中含有必需氨基酸(葉萍，1992)。林慧彬等(2001)用氨基酸分析儀測定了山東4種菟絲子16種氨基酸的含量，發(fā)現(xiàn)南方菟絲子Cuscuta australis R．Br．中的含量最高。此外，喬智勝(1992)和汪學昭(1995)分別測定出菟絲子中含有鈣、鎂、鐵、銅、錳、鋅等微量元素。

在藥理活性研究方面，人們發(fā)現(xiàn)菟絲子種子中所含化合物具有抗骨質(zhì)疏松作用(Yang et al．，2011)，南方菟絲子具有免疫增強作用，此外菟絲子可明顯增強衰老模型小鼠的紅細胞免疫功能，具有延緩衰老作用;郭軍等用菟絲子進行抗衰老作用實驗，結(jié)果表明，菟絲子可使老齡小鼠血清脂肪過氧化脂質(zhì)水平以及腦脂褐素含量顯著降低，紅細胞膜SOD活性增高，而對血硒水平無影響(郭軍等，1996)，也能使糖尿病患者SOD活性增強，LPO水平下降(郭軍等，1997)。郭氏等以血液乳酸、血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、腎上腺抗壞血酸、丙酮酸和肝糖原水平為指標，報道了3種菟絲子的水煎劑對小鼠CCl4肝損傷的保護作用，發(fā)現(xiàn)中國菟絲子的活性優(yōu)于另兩種(郭澄等，1992)，半乳糖可致大鼠晶狀體混濁，灌胃菟絲子水煎劑可以減輕混濁程度，半乳糖停止注射后則又可促進晶狀體轉(zhuǎn)為透明．表明菟絲子對大鼠半乳糖性白內(nèi)障具有治療和延緩作用(楊濤等，1991);吳美娟和王明艷(1999)以小鼠骨髓細胞核為指標，發(fā)現(xiàn)菟絲子對環(huán)磷酰胺誘發(fā)的微核有明顯的抑制作用。福建地區(qū)用菟絲子治療急性黃疸型傳染性肝炎、腎炎、遺精、視力減退等疾病，本實驗通過研究菟絲子的水溶性成分，為進一步探究其藥物作用奠定基礎(chǔ)，對藥物的開發(fā)利用做出貢獻。

1 材料與方法

1．1 實驗儀器和藥品

1H-NMR、13C-NMR及2D NMR用Bruker AM-400型和DRX-500型核磁共振儀測定，內(nèi)標為TMS。

高效液相色譜儀(HPLC):P230型高壓恒流泵，UV230型紫外-可見檢測器，Schambeck SFD GmbH RI 2000型示差折射檢測器;SinoChrom ODS-BP 5 μm 250×10 mm柱，SinoChrom ODS-BP 5 μm 250 ×20 mm 柱，Hypersil SiO25 μm 250 ×10 mm 柱。

層析材料:RP-8(40-60 μm，Merck)，硅膠(160-200 mesh and 10-40 μm，青島海洋化工廠)，大孔樹脂 D101(天津樹脂廠)，Sephadex LH-20(25-100 μm，Pharmacia Fine Chemical Co．，Ltd．)和 MCI-gel CHP20P(75-150 μm，Mitsubishi Chemical Industries，Ltd．);薄層層析顯色用5%H2SO4(溶劑為體積比1:1的乙醇水溶液)加熱顯色。

1．2 試驗方法

1．2．1 材料準備 全草2006年9月采自福建泉州清源山上，為南方菟絲子(Cuscuta australis R．Br．)，干重3．6 kg，用甲醇45 L在室溫下浸泡兩次，每次一個月。將提取液過慮后合并，過慮、經(jīng)過減壓濃縮后得到浸膏，然后將此浸膏加入1 L水，分出水溶性和脂溶性成分共約45．0 g浸膏。

1．2．2 初步分離 該水溶性樣品首先經(jīng)過Sephadex系列凝膠樹脂，使用甲醇-水(0%-60%)梯度洗脫;RP-18反相柱，使用甲醇-水(0-80%)梯度洗脫，進行初步分離。

圖1 試驗流程Figure 1 Test process

1．2．3 分離純化 將經(jīng)過RP-18柱初步分離的樣品再使用MCI-gel柱流動相甲醇-水(5%-80%)梯度洗脫，之后將分離得到的樣品，使用正相硅膠柱流動相氯仿-甲醇-水(120:10:水飽和-70:30:水飽和)分離純化得到化合物純品。若經(jīng)過硅膠柱還不能純化的樣品，再通過RP-18柱，MCI-gel柱反復純化，直到得到純化合物。分離純化的過程中，收集的樣品使用薄層層析法檢視，合并類似的樣品，最后得到純品化合物。流程如圖1所示。

2 結(jié)果與分析

2．1 化合物的核磁數(shù)據(jù)

本試驗從菟絲子提取物中分離出純品10個。運用一維和二維核磁共振譜鑒定了3個化合物，表1是這3個化合物的結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)。

2．2 化合物1的結(jié)構(gòu)及鑒定

化合物1為淡黃色粉末(25 mg)，化學式為C15H14O6，分子量為290。在碳譜和DEPT譜中共有15個碳信號，推測為黃酮的骨架。其中1個亞甲基，7個次甲基和7個季碳原子，而48-50 ppm的信號為溶劑峰。在氫譜中存在一組ABX體系自旋特征吸收峰δH6．75(d，J=8．1 Hz，H-5＇)，6．71(dd，J=8．1，2．0 Hz，H-6＇)，6．83(d，J=2．0 Hz，H-2＇)，故此可以推斷 B苯環(huán)為 1＇，3＇，4＇取代。上述波譜學和文獻中報道的數(shù)據(jù)一致，2，4，9-α，3＇，4＇-Pentahydroxyflavanol(于德泉和楊峻山，2005)。

2．3 化合物2的結(jié)構(gòu)及鑒定

化合物2為乳白色粉末(27 mg)，化學式為C17H24O9，分子量為372．。從碳譜的DEPT上可以看出，在δ=120 ppm以上有五個峰，三個季碳兩個叔碳，說明有對稱峰，而在氫譜上δ=6．0-6．8 ppm處分別有三組峰，且δ=6．75 ppm處的單峰很強更證實了有對稱峰存在，而且可能是一個苯環(huán)可能是苯環(huán)。其中1個非常強的甲基信號，一組糖的信號。在C=105．4(C-1＇)處有一個糖端基信號，氫譜中對應的質(zhì)子信號為4．59(d，J=7．6 Hz)，由此可知該糖均為β型;在δ=57．0 ppm的強信號說明有兩個對稱的甲氧基。另外，在δ=6．33 ppm和6．54 ppm處的兩組峰結(jié)合碳譜可知是一個雙鍵，從耦合常數(shù)(d，J=15．8 Hz)上可以判斷是反式構(gòu)型。

表1 化合物的NMR數(shù)據(jù)(溶劑:CD3OD，δ:ppm)Table 1 NMR data for the three compounds(Solvent:CD3OD，δ:ppm)

圖2 化合物1:表兒茶素Figure 2 Compound 1:Epicatechin

圖3 化合物2:刺五加-O-β-D-葡萄糖甙Figure 3 Compound 2:1-(4-hydroxy-3，5-dimethoxyphenyl)propene-9-O-β-D-glucopyranoside

2．4 化合物3的結(jié)構(gòu)及鑒定

化合物3為黃色粉末(38 mg)，化學式為C19H30O8，分子量為386。在碳譜和DEPT譜中共有19個碳信號，其中4個甲基，2個亞甲基，9個次甲基和4個季碳原子。最低場的碳信號C 201．2(C-4)為羰基。在C 102．7(C-1＇)處有一個糖端基信號;通過HSQC譜，在氫譜中可找到該原子的質(zhì)子信號 H 4．26(d，J=9．8 Hz，H-1＇)，故此可推斷該糖為β型。酸水解該化合物，將水解液使用HPTLC(高效薄層色譜法)檢視并和標準糖比較，可知該糖為葡萄糖。

圖4 化合物3:Roseoside IFigure 4 Compound 3:Roseoside I

在COSY譜中，H-9和 H-10相關(guān)，H-1＇和 H-2＇相關(guān)，說明了C-9和C-10相連，C-1＇和C-2＇相連。

在遠程HMBC譜中，H-11和C-1，C-2，C-3相關(guān)，表明C-11連接于C-2上。H-12和C-1，C-5，C-6，C-13相關(guān)，H-13和C-1，C-5，C-6，C-12相關(guān)，說明C-12和C-13共同連接于C-6之上。H-3和C-1，C-5，C-11相關(guān)，H-5和C-1，C-3，C-4，C-6，C-12，C-13相關(guān)，說明C-1，C-2，C-3，C-4，C-5，C-6共同組成一個六元環(huán)。H-7和C-1，C-8，C-9相關(guān)，H-8和C-7，C-8，C-9相關(guān)，H-9和C-7，C-8相關(guān)，H-10和C-8，C-9相關(guān)，結(jié)合COSY譜中提供的證據(jù)，共同說明了C-7，C-8，C-9，C-10的依次連接關(guān)系，并且C-7連接于C-1上。此外，H-1＇和C-9相關(guān)，表明葡萄糖連接于C-9上。

在ROESY譜中，H-3和H-11，H-5a相關(guān)，H-7和H-9，H-10，H-12相關(guān)，H-8和H-13，H-1＇相關(guān)。此外還有，H-1＇和 H-3＇，H-4＇，H-5＇相關(guān)，H-4＇和 H-6 的相關(guān)。

3 結(jié)果與分析

本文應用各種液相色譜技術(shù)，從菟絲子中共分離出10個化合物。運用1H-1H COSY，HSQC，HMBC和ROESY的一維和二維核磁共振技術(shù)，鑒定出3個化合物的結(jié)構(gòu)。本文所從事的研究只是水溶性萃取物的部分化學成分，其它部位的成分以及生物活性的研究還需進一步完善。

致謝:

中科院昆明植物所代測1H-NMR、13C-NMR及2D NMR，特此致謝。

郭澄，韓公羽，蘇中武．1997．南方菟絲子化學成分的研究．中國藥學雜志，32(1):8-11．

郭澄，蘇中武，李乘祜，張芝玉，鄭漢臣．1992．中藥菟絲子保肝活性的研究．時珍國藥研究，3(2):62-64．

郭洪祝．1997．南方菟絲子黃酮類成分的研究．中國中藥雜志，22(1):39．

郭洪祝．2000．南方菟絲子的化學成分研究．北京中醫(yī)藥大學學報，23(2):36-37．

郭軍，白書閣，王玉民，李世莉，劉恩茹，白晶．1996．菟絲子抗衰老作用的實驗研究．中國老年學雜志，16(1):37-38．

郭軍，馬宏巖，王建軍．1997．菟絲子對糖尿病患者抗氧化能力的影響．佳木斯醫(yī)學院學報，20(1):39-41．

候冬巖，李鐵純，于冰．2003．兩種菟絲子揮發(fā)性成分的比較研究．質(zhì)譜學報，24(2):344-346．

林慧彬，林建強，林建群．2001．山東4種菟絲子氨基酸比較研究．時珍國醫(yī)國藥，12(3):195．

喬智勝．1992．三種菟絲子的微量元素和氨基酸的含量測定．中國中藥雜志，17(1):12．

汪學昭．1995．大小菟絲子的微量元素含量測定．第二軍醫(yī)大學學報，16(5):835．

吳美娟，王明艷．1999．菟絲子對環(huán)磷酰胺誘發(fā)的MN的抑制作用．天津中醫(yī)學院學報，18(4):41-42．

葉萍．1992．大菟絲子與菟絲子化學成分的比較研究．中成藥，19(6):65．

楊濤，梁康，張昌穎．1991．四種中草藥對大鼠半乳糖性白內(nèi)障防治效用的研究．北京醫(yī)科大學學報，23(2):97-99．

于德泉，楊峻山．2005．分析化學手冊．北京:化學工業(yè)出版社:828．

Anis E．1999．The chemical constituents in the seeds of Cuscuta australis．Nat Prod Sci，5(3):124-126．

Anis E，Anis I，Ahmed S，Mustafa G，Malik A，Afza N，Hai SM，Shahzad-ul-hussan．2002．Alpha-glucosidase inhibitory constituents from Cuscuta．Chem Pharm Bull，50(1):112-115．

Bao XF．Wang Z，F(xiàn)ang JN，Liu XY．2002．Structural features of an immunostimulating and antioxidant acidic polysaccharide from the seeds of Cuscuta chinensis．Planta Med，68(3):237-239．

Khan S，Mirza KJ，Abdin MZ．2010．Development of RAPD markers for authentication of medicinal plant Cuscuta reflexa．EurAsian Journal of Biosciences，4(1):1-7．

Kwon YS．2000．Steroids constituents from Cuscuta chinensis．Nat Prod Sci，6(3):135-138．

Patel S，Sharma V，Chauhan NS，Dixit VK．2012．An updated review on the parasitic herb of Cuscuta reflexa Roxb．Journal of Chinese Integrative Medicine，100(3):249-255．

Ruben GM．1995．The novel alkaline compounds from Cuscuta japonica．Biochem Syst Ecol，23(5):20-22．

Suresh V，Sruthi V，Padmaaj B，Asha VV．2011．In vitro anti-inflammatory and anti-cancer activities of Cuscuta reflexa Roxb．Journal of Ethnopharmacology，134:872-887．

Wang Z，Liu C，F(xiàn)ang J．2001．H3，an acid polysaccharide from Cuscuta chinensis．J Chinese Pharm Sci，10(2):57-59．

Xiang SX．2001．The chemical constitucnts from the seeds of Cuscuta japonica．Chin J Chem，19(3):282-285．

Yahara S．1994．The ligneous compounds from Cuscuta chinensis．Phytochemistry，37(6):1755-1758．

Yang LJ，Chen QF，Wang F，Zhang GL．2011．Antiosteoporotic compounds from seeds of Cuscuta chinensis．Journal of Ethnopharmacology，135(2):553-560．