劉艷芹，段彥蒼，杜惠蘭

(河北醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，石家莊 050091)

虛寒證在人群中患病率為9.95%，而女性(13.21%)明顯高于男性(5.56%)［1］。虛寒型月經(jīng)病為女性常見(jiàn)病，故擬以月經(jīng)病虛寒證患者為研究對(duì)象，研究正常人、虛寒型月經(jīng)病患者T細(xì)胞亞群與生殖激素的相關(guān)關(guān)系，初步探討月經(jīng)病虛寒證的部分發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 研究對(duì)象

1.1 一般資料

2006年10月至2007年9月在河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院門診部、河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院生殖中心就診，符合月經(jīng)病虛寒證納入與排除標(biāo)準(zhǔn)的患者30例，為月經(jīng)病虛寒證組(簡(jiǎn)稱“虛寒組”)，其中痛經(jīng)10例，月經(jīng)后期12例，月經(jīng)過(guò)少8例;年齡最大44歲，最小22歲，平均年齡(29.77±5.75)歲。選取正常健康女性志愿者30例為正常組，年齡最大40歲，最小20歲，平均年齡(28.57±6.02)歲，2組之間年齡分布均衡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 月經(jīng)病虛寒證診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照《虛寒證辨證因子等級(jí)量化標(biāo)準(zhǔn)的研究》［2］、《典型虛寒證的辨證統(tǒng)計(jì)分析》［3］、《中醫(yī)證候辨治規(guī)范》［4］和《中醫(yī)婦科學(xué)》［5］制定。

1.2.1 虛寒證診斷標(biāo)準(zhǔn) 主證:四肢發(fā)冷、畏寒怕冷、身體蜷臥、喜溫喜暖。次證:面色蒼白、小便清長(zhǎng)、大便稀溏、沉遲無(wú)力或沉細(xì)弱者、舌淡苔白而潤(rùn)或兼滑或舌體胖嫩者。具備虛寒證主證2項(xiàng)以上、次證1項(xiàng)以上可診斷為虛寒證。

1.2.2 月經(jīng)病診斷標(biāo)準(zhǔn) ①痛經(jīng):經(jīng)期或行經(jīng)前后，出現(xiàn)周期性小腹疼痛，或痛引腰骶;②月經(jīng)后期:月經(jīng)周期延后7d以上;③月經(jīng)過(guò)少:月經(jīng)周期基本正常，月經(jīng)量較以往明顯減少，甚或點(diǎn)滴即凈，或小于30ml，或經(jīng)期少于2d。具備以上1項(xiàng)以上、連續(xù)出現(xiàn)2個(gè)月經(jīng)周期以上者。

1.2.3 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn):同時(shí)具備虛寒證和月經(jīng)病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡為18～45周歲;排除標(biāo)準(zhǔn):除外腎上腺、甲狀腺、垂體等內(nèi)分泌腺功能異常、心腦血管疾病、肝腎疾病、神經(jīng)、精神系統(tǒng)疾病、血液病、卵巢腫瘤、生殖器官器質(zhì)性病變患者，3個(gè)月內(nèi)服用避孕藥或服用過(guò)其他含有激素類藥物的患者。

2 材料與方法

2.1 試劑

E2、P、T、FSH、LH 放射免疫分析試劑盒為天津九鼎醫(yī)學(xué)生物有限公司產(chǎn)品，IgG1FITC、CD3-PC5、PerCP、CD4-PE、CD8-PE 均為 BeckMan-Coulter公司產(chǎn)品，CD30-FITC為Caltag公司產(chǎn)品。

2.2 方法

2.2.1 生殖激素檢測(cè) E2、P、T、FSH、LH采用放射免疫分析法，按試劑盒說(shuō)明書同批檢測(cè)。于經(jīng)期第2天清晨空腹取坐位，肘靜脈采血6ml離心，取血清置－20℃冰箱備檢。

2.2.2 T細(xì)胞亞群檢測(cè) 于經(jīng)期第2天清晨空腹，肘靜脈采血1ml，迅速將血標(biāo)本移至無(wú)菌含抗凝劑的塑料試管中混勻，于24h內(nèi)檢測(cè)。取流式專用試管3支，分別標(biāo)記為CD3/CD4/IgG1(為對(duì)照管)、CD3/CD4/CD30、CD3/CD8/CD30，然后加入相應(yīng)熒光標(biāo)記的單抗(IgG1FITC:10ul、CD3:5ul;CD4:10ul;CD8:10ul、CD30:10ul)。分別加入標(biāo)本各50ul，渦旋混勻，室溫避光反應(yīng)20min;加入溶血素50ul，渦旋混勻，室溫避光反應(yīng)10min;加入純水500ul，渦旋混勻，室溫避光反應(yīng)10min;觀察溶血完全后加 PBS 3ml，1200r/min離心3～5min棄上清，留細(xì)胞沉淀，4℃保存，備上機(jī)。上機(jī)分析應(yīng)用Cellquest軟件，每個(gè)標(biāo)本攝取10000個(gè)細(xì)胞。以FSC/SSC設(shè)門，圈定淋巴細(xì)胞群進(jìn)行分析，結(jié)果由該軟件自動(dòng)統(tǒng)計(jì)。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，兩變量采用獨(dú)立樣本比較 t檢驗(yàn)，相關(guān)關(guān)系用直線相關(guān)分析，以Pearson相關(guān)系數(shù)表示，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 月經(jīng)病虛寒證患者生殖激素水平的變化

表1顯示，與正常組比較，虛寒組患者血清E2、LH降低(P＜0.05)，T、FSH 顯著降低(P＜0.01)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;P有降低趨勢(shì)，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P ＞0.05)。

表1 虛寒組與正常組性激素含量比較(±s)

表1 虛寒組與正常組性激素含量比較(±s)

注:與正常組比較:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

組 別 例數(shù) E2(pg/ml)T(ng/dl)P(ng/ml)FSH(mIU/ml)LH(mIU/ml)虛寒組 30 63.35±16.33▽ 42.60±16.35▽▽ 0.82±0.34 5.64±2.46▽▽ 5.25±1.84▽.88 6.76±2.28正常組 30 74.03±20.03 52.77±12.65 1.67±0.50 7.24±1

3.2 月經(jīng)病虛寒證患者外周血T細(xì)胞亞群的變化

表2顯示，與正常組比較，虛寒組病人外周血Th1細(xì)胞升高(P ＜0.01)，Th2、Tc2、Tc1細(xì)胞、Th2/Th1降低(P＜0.01)，Tc2/Tc1降低(P＜0.05)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表2 虛寒組與正常組Th2、Th1、Tc2、Tc1含量比較(±s)

表2 虛寒組與正常組Th2、Th1、Tc2、Tc1含量比較(±s)

注:與正常組比較:▽P＜0.05，▽▽P＜0.01

組 別 例數(shù)Th2 Th1 Th2/Th1 Tc2 Tc1 Tc2/Tc1虛寒組 30 1.439±0.67▽▽ 41.44±5.30▽▽ 0.04±0.02▽▽ 4.11±1.68▽▽ 13.02±2.10▽▽ 0.33±0.17▽8 16.28±3.29 0.73±0.44正常組 30 2.28±1.25 38.08±4.32 0.06±0.04 10.63±2.5

3.3 月經(jīng)病虛寒證患者外周血T細(xì)胞亞群與生殖激素的關(guān)系

研究結(jié)果表明，血清Th2細(xì)胞、Th2/Th1與E2呈顯著正相關(guān)(r=0.545，P＜0.01;r=0.580，P＜0.01)，Th1細(xì)胞與 E2呈負(fù)相關(guān)(r=－0.456，P＜0.05)，Th2、Tc2細(xì)胞、Th2/Th1與 T呈正相關(guān)(r=0.549，P ＜0.01;r=0.509，P ＜0.01;r=0.399，P ＜0.05)，Th1細(xì)胞與FSH呈負(fù)相關(guān)(r=－0.399，P＜0.05)，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為，寒為陰邪，易傷陽(yáng)氣，陽(yáng)氣受損則失去正常溫煦氣化之作用。寒性凝滯，性主收引，可使血脈運(yùn)行不暢?！端貑?wèn)·舉痛論》說(shuō):“寒氣入經(jīng)而稽遲，泣而不行，客于脈外則血少;客于脈中則氣不通。”寒邪致病又分為外寒與內(nèi)寒，由于內(nèi)寒是陽(yáng)微氣虛、生化功能不足的一種表現(xiàn)，故又稱為“虛寒”。在婦產(chǎn)科臨床中則以虛寒證較多［6］，虛寒證在人群中患病率高達(dá)9.95%，且女性(13.21%)明顯高于男性(5.56%)［1］。月經(jīng)病虛寒證的主要病機(jī)是機(jī)體陽(yáng)氣不足、虛寒內(nèi)生，使沖任胞宮失煦或陽(yáng)虛運(yùn)血遲滯引起沖任瘀阻?！妒酚洝}(cāng)公傳》云:“內(nèi)寒，月事不下也?！薄陡登嘀髋啤吩?“后期而來(lái)少，血寒而不足?！薄毒霸廊珪D人規(guī)》云:“凡血寒者，經(jīng)必后期而至。然血何以寒?亦惟陽(yáng)氣不足，則寒從內(nèi)生，而生化失期，是即所謂寒也。”吳德漢《醫(yī)理輯要》說(shuō):“易寒為病者，陽(yáng)氣素弱?！比魦D女素體陽(yáng)虛，再加以生活不節(jié)，如過(guò)度貪涼飲冷，冒雨涉水，或內(nèi)傷久病陽(yáng)氣耗傷則寒從內(nèi)生，陽(yáng)氣不運(yùn)，影響沖任胞宮的功能，子宮失煦，胞脈失養(yǎng)，排經(jīng)欠暢，溢而無(wú)源，經(jīng)血凝滯，臨床上表現(xiàn)為月經(jīng)過(guò)少、月經(jīng)后期、閉經(jīng)、痛經(jīng)等虛寒型月經(jīng)病。

Tc1、Th1細(xì)胞為Ⅰ型 T淋巴細(xì)胞，Tc2、Th2細(xì)胞為Ⅱ型T淋巴細(xì)胞，Th0細(xì)胞按一定比例向Th1、Th2細(xì)胞分化，兩者具有相互調(diào)節(jié)、相互制約的特點(diǎn)，處于相對(duì)平衡狀態(tài)，維持機(jī)體正常的細(xì)胞免疫和體液免疫［7］。其中Tc1與Th1作用相似，Tc2與Th2作用相似［8～10］。Ⅰ/Ⅱ型T淋巴細(xì)胞極性漂移是許多疾病發(fā)生發(fā)展的病理基礎(chǔ)，一方優(yōu)勢(shì)必然引起另一方弱勢(shì)［11］，若Ⅰ/Ⅱ型細(xì)胞的數(shù)量和功能發(fā)生異常，機(jī)體就會(huì)出現(xiàn)免疫功能紊亂，并發(fā)生一系列病理變化。Ⅰ、Ⅱ型T淋巴細(xì)胞之間的比例失衡決定著免疫反應(yīng)的方向，不同的病理過(guò)程可以特征化為向Ⅰ型或Ⅱ型免疫反應(yīng)的極化［12］。

內(nèi)分泌系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)在各個(gè)系統(tǒng)的生理病理反應(yīng)中起著重要的信息傳遞和調(diào)節(jié)作用［13］，二者相互調(diào)節(jié)。一方面，免疫細(xì)胞所分泌的細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素(IL)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)等不僅對(duì)HPO軸發(fā)揮自分泌、旁分泌調(diào)控作用，并有可能作為HPO軸反饋調(diào)節(jié)中的傳遞信號(hào)之一，在機(jī)體的生殖方面發(fā)揮重要作用。另一方面，性激素可能通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞受體的信號(hào)系統(tǒng)、T淋巴細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞(APC)活化分子的表達(dá)、細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯等影響免疫系統(tǒng)［14］。一般認(rèn)為，E2是免疫刺激性激素，T是免疫保護(hù)性激素［15］，雄性激素可促進(jìn) Th0細(xì)胞向 Th1細(xì)胞分化［16］。

FSH主要功能是促進(jìn)卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育，并激活卵泡顆粒細(xì)胞內(nèi)的芳香化酶，使雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素。卵巢間質(zhì)細(xì)胞及卵泡膜細(xì)胞上有LH受體，LH與之結(jié)合后啟動(dòng)細(xì)胞內(nèi)系列酶合成雄激素。本研究中月經(jīng)病虛寒證患者血清FSH、LH、E2、T減少，F(xiàn)SH分泌減少影響了卵泡發(fā)育，而LH水平降低，導(dǎo)致間質(zhì)細(xì)胞膜及泡膜細(xì)胞膜合成T減少，二者導(dǎo)致E2合成分泌減少。亦可能是月經(jīng)病虛寒證患者盆腔局部深部溫度較低［17］，影響卵巢血供，造成E2、T合成分泌減少?？傊?，月經(jīng)病虛寒證機(jī)體生殖內(nèi)分泌系統(tǒng)處于抑制狀態(tài)，從而表現(xiàn)為月經(jīng)后期、月經(jīng)量少和閉經(jīng)等。

陽(yáng)氣對(duì)于人體具有溫煦、推動(dòng)、防御等功能，其部分作用與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的免疫功能具有相通之處［18］。中醫(yī)證型與TH細(xì)胞具有相關(guān)性，不同中醫(yī)證型的TH細(xì)胞具有不同的特點(diǎn)［19，20］。本研究中，與正常人比較月經(jīng)病虛寒證患者Th2、Tc2、Tc1細(xì)胞降低，Th1細(xì)胞升高，Th2/Th1、Tc2/Tc1降低。提示月經(jīng)病虛寒證可能與機(jī)體Ⅰ/Ⅱ型T淋巴細(xì)胞有關(guān)，即Ⅰ/Ⅱ型T淋巴細(xì)胞的極性向Ⅰ型T淋巴細(xì)胞偏移，Ⅱ型T淋巴細(xì)胞處于弱勢(shì)，機(jī)體防御功能下降導(dǎo)致陽(yáng)虛生內(nèi)寒、沖任胞宮失煦進(jìn)而引起本病證。

本實(shí)驗(yàn)相關(guān)性研究顯示，月經(jīng)病虛寒證患者Th2、Tc2水平與血清生殖激素呈正相關(guān)，Th1水平與血清生殖激素呈負(fù)相關(guān)。推測(cè)虛寒型月經(jīng)病的發(fā)生與生殖激素分泌受到抑制、免疫調(diào)節(jié)功能紊亂、體液免疫功能低下有關(guān)。

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