謝寧 王玉平 王楓 顏耀東 王成傳

(1.空軍航空醫(yī)學(xué)研究所附屬醫(yī)院，100089；2.空軍后勤部衛(wèi)生部，100720；3.空軍總醫(yī)院，100142；4.沈陽軍區(qū)興城療養(yǎng)院，100125)

決明消障丸是由石決明、牡丹皮、密蒙花、羚羊粉、黃精等16味藥組成，具有滋陰填精，養(yǎng)肝明目，退翳消障之功效。臨床上能消除眼球沉淀物，改善視力，主治早期老年性白內(nèi)障等[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中未制定含量測定項(xiàng)目，為控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究選用高效液相色譜(HPLC)法測定主藥牡丹皮中丹皮酚的含量，方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好[2-3]?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 島津LG-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10AVP紫外檢測器，SIL10A自動(dòng)進(jìn)樣器；CR5A數(shù)據(jù)處理機(jī)。

1.1.2 試劑 丹皮酚對(duì)照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736-200322)。決明消障丸 (本院生產(chǎn)制劑，批號(hào)20051021)，所用試劑均為色譜或分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(4.6 nm×250 nm，5μm)；流動(dòng)相：甲醇∶水(65∶35)；檢測波長：274 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣量：20μL，理論板數(shù)按丹皮酚峰計(jì)算＞5 000。

1.2.2 溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的丹皮酚對(duì)照品適量，于50 mL量瓶中加60%甲醇制成0.02 mg/mL的溶液，即得對(duì)照品溶液。取決明消障丸，剪碎，精密稱取約0.5 g至具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL，密塞，稱重，超聲處理45 min，放冷，再精密稱重，用50%甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

1.2.3 干擾試驗(yàn) 分別精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液和供試品溶液及缺牡丹皮的陰性對(duì)照樣品溶液各20μL，注入液相色譜儀中[4]。

1.2.4 線性考查 精密吸取丹皮酚對(duì)照品溶液2，5，10，15，20μL注入液相色譜儀，以進(jìn)樣量(μL)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[5]。

1.2.5 精密度重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取同一對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)樣5次，測定樣品含量，考查重現(xiàn)性[6]。

1.2.6 加樣回收率試驗(yàn) 取已知含量樣品6份，分別精密加入丹皮酚對(duì)照樣品10μL計(jì)算回收率[7]。

2 結(jié)果

2.1 干擾試驗(yàn)(圖1) 測定結(jié)果為陰性對(duì)照液與丹皮酚對(duì)照液相同保留時(shí)間處未顯色譜峰，故認(rèn)為陰性干擾。

圖1 對(duì)照品(A)、陰性對(duì)照(B)、供試品(C)溶液的HPLC色譜圖

2.2 線性關(guān)系 丹皮酚的回歸方程Y＝54 479.60X＋20 887.92，r＝0.999 6。由此確定丹皮酚線性范圍為0.040 5～0.040 52μg。

2.3 精密度試驗(yàn) 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)＝0.54%，表明精密度較好。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)RSD＝2.62%，表明該方法重現(xiàn)性良好[8]。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 在0～24 h內(nèi)丹皮酚對(duì)照品和供試品的RSD分別為2.42%和2.49%，表明在此時(shí)間范圍內(nèi)對(duì)照品溶液和供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 丹皮酚平均率為99.25%，RSD＝0.62%。

2.7 樣品測定 取3批樣品以外標(biāo)法計(jì)算樣品中丹皮酚含量，批號(hào)為051207.060314.060401的樣品中丹皮酚含量分別為0.623 5，0.598 2，0.654 7 mg/g。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在含量測定供試品溶液制備中，根據(jù)丹皮酚的溶解性，考察了40%，60%，80%甲醇分別超聲提取15，30，45 min的提取效率，并與60%甲醇回流提取法相比較，結(jié)果超聲提取法與回流提取法的提取效率相近，故選擇超聲提取，操作簡便易行[9-10]。

通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，以選擇甲醇∶水(65∶35)作為流動(dòng)相，分離效果較好，丹皮酚峰與其他峰達(dá)到了良好的分離度(R＞1.5)，故采用此色譜條件進(jìn)行含量測定。研究表明，采用HPLC法作為決明消障丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢測方法，測定決明消障丸中丹皮酚的含量，能夠更有效控制該制劑的質(zhì)量。

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