徐玲玉周林艷楊榮華江秋英

1)江蘇常州市腫瘤醫(yī)院乳腺外科 常州213000 2)江蘇常州市腫瘤醫(yī)院病理科 常州213000

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一。近年來發(fā)病率明顯上升，已占大中城市女性惡性腫瘤的第一位。乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是多基因因素和外界環(huán)境因素聯(lián)合作用的結(jié)果。Ki-67是細胞增殖的重要標記，突變型P53失去其抑癌作用，腫瘤細胞的增殖狀況可作為預測惡性腫瘤發(fā)展及預后的指標。Her-2(人表皮因子生長受體)是乳腺癌明確的預后指標和藥物治療效果的預測指標，曲妥珠單抗的問世改變了Her-2陽性乳腺癌的預后，使患者獲益。而Her-2陰性乳腺癌的預后因子目前仍是研究的熱點，本文旨在探討研究Ki-67、P53在Her-2陰性乳腺癌組織中的表達，以及其與雌激素受體(ER)及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，評估Her-2陰性乳腺癌的預后。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2007-01—201-06期間202例Her-2陰性的女性乳腺癌患者，均行乳癌改良根治術(shù)，術(shù)前未行任何治療。年齡24～78歲，中位年齡52.4歲。組織學類型:浸潤性導管癌I級52例(25.7%)、II級104例(51.5%)、III級46例(22.8%)。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者96例(47.5.0%)，腋窩無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者106例(52.5%)。分為ER陰性組(99例)和ER陽性組(103例)。

1.2 免疫組化染色方法 所有乳腺組織標本均用4%甲醛固定24 h，常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)切片，HE染色，光鏡觀察。采用免疫組化SP法染色。試劑盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 評判標準(1)Her-2標準:Her-2陽性細胞為膜著色，不著色為陰性，著色陽性細胞數(shù)＞10%為陽性，其中著色弱且不連續(xù)為弱陽性(+)，著色中等部分不連續(xù)為陽性(++)，著色強且連續(xù)為強陽性(+++)。由于未對Her-2(++)的病例進一步進行FISH檢測，本研究將Her-2(++)及以下者定義為陰性。(2)ER標準:腫瘤細胞無細胞核棕黃染色或＜5%的細胞核較弱棕黃染色為陰性，＞5%的細胞核棕黃染色則為陽性。(3)Ki-67標準:以腫瘤細胞核呈棕色為陽性細胞，Ki-67指數(shù)指100個細胞中Ki-67陽性細胞數(shù)。每張切片于400倍鏡下選定10個視野，每個視野計數(shù)100個細胞，計算每張切片上陽性表達的細胞個數(shù)即Ki-67增殖指數(shù)。(4)P53標準:P53蛋白陽性表達主要定位于細胞核，癌細胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒著色即為P53陽性細胞。陽性細胞＞10%定義為P53陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行分析。臨床資料的描述采用百分比。Ki-67與ER狀態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系采用t檢驗。P53與ER狀態(tài)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系采用檢驗。檢驗標準為α=0.05，P＜0.05認為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 Her-2陰性乳腺癌中Ki-67表達與ER表達的關(guān)系202例Her-2陰性乳腺癌中ER陰性和ER陽性組比較，Ki-67增殖指數(shù)在ER陰性組明顯升高(50.14±16.58 vs 25.13±15.98，P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。

2.2 Ki-67表達與Her-2陰性乳腺癌腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系202例Her-2陰性乳腺癌中腋窩淋巴結(jié)陽性組和淋巴結(jié)陰性組比較，Ki-67增殖指數(shù)在腋窩淋巴結(jié)陽性組明顯升高(40.02±19.58 vs 22.23±9.72，P＜0.05)，差異有統(tǒng)計學意義。

2.3 Her-2陰性乳腺癌中P53表達與ER表達的關(guān)系202例Her-2陰性乳腺癌中ER陰性和ER陽性組比較，P53在ER陰性組表達明顯高于ER陽性組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，見表1。

表1 Her-2陰性乳腺癌P53表達與ER表達的關(guān)系

2.4 Her-2陰性乳腺癌中P53表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系202例Her-2陰性乳腺癌中腋窩淋巴結(jié)陽性組和淋巴結(jié)陰性組比較，P53表達腋窩淋巴結(jié)陽性組和陰性組比較，無明顯升高，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，見表2。

表2 Her-2陰性乳腺癌P53表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

3 討論

Ki-67是一種定位于細胞核、半衰期短、與增殖相關(guān)的非組蛋白核蛋白，除G0期、G1早期外，其他各期均有表達，M期達到高峰。研究表明［1］Ki-67與腫瘤的發(fā)生、侵襲、種植與轉(zhuǎn)移過程相關(guān)。Ki-67在正常組織的靜息細胞中幾乎不表達，而在增生組織中廣泛表達。有報道認為［2］，Ki-67的表達對乳腺癌預后判斷有重要意義。Ki-67陽性表達率高，反映腫瘤細胞增殖活性強、惡性程度高，患者預后差［3］。本研究顯示，Ki-67增殖指數(shù)在Her-2陰性乳腺癌中ER陰性組明顯高于ER陽性組，腋窩淋巴結(jié)陽性組明顯高于腋窩淋巴結(jié)陰性組。腫瘤的形成是多種不同基因共同作用的結(jié)果，在基因損傷的基礎(chǔ)上發(fā)展為單克隆增生，通過演進，形成不同生物學特性的亞克隆，有旺盛增殖能力的亞克隆獲得浸潤和轉(zhuǎn)移能力，有研究顯示［4，.5］增殖能力與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，Ki-67水平高者易出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，與本研究結(jié)果一致，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移早已被公認為乳腺癌不良預后因素。因此，筆者認為Ki-67表達高者，腫瘤細胞增殖活性強，更易發(fā)生侵襲和轉(zhuǎn)移，預后更差。

P53是乳腺癌中研究最多的抑癌基因，野生型P53與細胞周期的調(diào)控、DNA修復、細胞凋亡有重要的相關(guān)性，主要通過誘導可逆或不可逆的細胞周期阻滯，提高DNA的修復能力和抑制新生血管形成，發(fā)揮其抑制增殖的作用，突變型P53失去其抑癌作用。有報道認為［6］，突變型P53可以抑制野生型的活性，引起細胞轉(zhuǎn)化，促進細胞惡變、延遲或組織細胞凋亡，由于半衰期延長，免疫組化檢測到的P53均為突變型，P53突變與乳腺癌的預后不良顯著相關(guān)。本研究顯示，P53在Her-2陰性乳腺癌ER陰性組表達明顯高于ER陽性組。近年有報道［7］認為P53基因突變可以上調(diào)促進血管增生的內(nèi)皮生長因子，從而成為調(diào)控腫瘤血管生長的重要因素，P53表達陽性的腫瘤更具侵襲性，并與乳腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著正相關(guān)。但本研究顯示:P53表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無顯著相關(guān)性，與文獻報道結(jié)果存在一定差異，目前相關(guān)文獻報道［8］對于P53與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系仍沒有統(tǒng)一意見，有待于進一步探討。

ER是乳腺癌內(nèi)分泌治療的重要依據(jù)和評價預后的主要指標，其狀態(tài)有報道認為［9，10］與Ki-67、P53表達呈負相關(guān)，在Ki-67、P53高表達的腫瘤，顯示有高比例的ER陰性［11］。這與本研究結(jié)果一致。ER陰性的腫瘤［12，13］屬于非激素依賴性，細胞異型性高，分化差，患者5年生存率低，內(nèi)分泌治療效果較差。因此，Ki-67、P53高表達者，有可能對內(nèi)分泌治療抵抗，提示乳腺癌預后不良。

綜上所述，本研究顯示Her-2陰性乳腺癌中Ki-67增殖指數(shù)與ER表達呈負相關(guān)，與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。P53表達與ER表達呈負相關(guān)，與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況無顯著相關(guān)性。Ki-67、P53高表達很可能是乳腺癌預后不良因素。目前認為在乳腺癌的預后判斷中，以多基因的表達狀況作為參考依據(jù)更有意義。由于缺乏大樣本的前瞻性研究，Ki-67、P53尚不能作為公認的乳腺癌預后指標，在今后的研究中，我們將增大樣本量，并聯(lián)合其他生物標記物，進一步研究Ki-67、P53在乳腺癌預后中的作用及對治療的指導意義。

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