李 煬 景 明，2﹡ 陳 暉

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730000;2.甘肅省中藥藥理與毒理學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000)

濕生扁蕾為龍膽科扁蕾屬植物Gentianop sispaludosa(Munro)Ma.的干燥全草，藏藥稱機(jī)合斗，產(chǎn)于甘肅、青海、四川、西藏等地區(qū)，生長(zhǎng)在海拔2300～4100 m的河灘草地、溝邊、山坡。具有清熱解毒、止痛、利濕消黃、健脾止瀉等功效，用于治療肝炎、膽囊炎、熱病發(fā)斑、泄瀉、腸胃炎、結(jié)膜炎、急性腎盂腎炎、疥瘡腫毒等癥，藏醫(yī)用全草治療流行性感冒及膽病引起的發(fā)燒〔1〕。對(duì)所含化學(xué)成分包括黃酮類、山酮類、三萜類、三十烷醇、胡蘿卜苷、β－谷甾醇、酚類、有機(jī)酸等的研究已有報(bào)道〔2－3〕，但對(duì)濕生扁蕾多糖成分的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)擬采用硫酸苯酚法測(cè)定藏藥濕生扁蕾中多糖的含量，對(duì)不同產(chǎn)地、不同采收期濕生扁蕾中多糖的含量作一比較，為該藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

AE－240電子天平(梅特勒－托利多儀器上海分公司);KQ－100超聲波清洗器(昆山市超聲技術(shù)有限公司);R－200旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士布奇)。硫酸(分析純，白銀良友化學(xué)試劑有限公司);苯酚(分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所);水為重蒸餾水;其它試基金項(xiàng)目:甘肅省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(0804NKCA119－08)劑均為分析純。葡萄糖對(duì)照品(含量測(cè)定用，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所);濕生扁蕾藥材采自甘肅15個(gè)不同產(chǎn)區(qū)，由甘肅省藥品檢驗(yàn)所中藥室宋平順主任中藥師對(duì)以上品種進(jìn)行鑒定。

2 方法與結(jié)果〔4－5〕

2.1 多糖的提取分離:濕生扁蕾藥材用石油醚(60～90℃)脫脂，藥渣揮盡石油醚，加水煎煮3次，每次加10倍量水，煎煮1h，合并水煎液，濾過(guò)，濾液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.15 ～1.20(g·mL－1)的浸膏，攪拌下加 4 倍 95%乙醇沉淀24h，濾過(guò)，沉淀加水溶解，加1倍量20%三氯乙酸，攪拌20min，濾過(guò)，濾液用2mol·L－1氫氧化鈉迅速中和至pH7.0左右，加1.5%活性炭脫色30min，濾過(guò)，濾液再加4倍95%乙醇沉淀，濾過(guò)，沉淀60℃以下干燥，即得濕生扁蕾多糖。

2.2 對(duì)照品溶液的制備:精密稱取105℃干燥至恒重的無(wú)水葡萄糖對(duì)照品82mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備:精密稱取不同產(chǎn)地濕生扁蕾藥材提取的多糖0.5g，置100mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密吸取對(duì)照品溶液 1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL，分別置 50mL 量瓶中，加水至刻度，搖勻。精密量取上述各溶液2.0mL，置具塞試管中，分別加4%苯酚溶液1mL，混勻，迅速加入硫酸7.0mL，搖勻，于40℃水浴中保溫30min，取出，置冰水浴中5min，取出，以相應(yīng)試劑為空白，在490nm測(cè)定吸光度。以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，濃度(C)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為:A=57.248C+0.0695，r=0.9984。結(jié)果無(wú)水葡萄糖在 0.82 ～2.46μg范圍內(nèi)線性良好。

2.5 樣品含量測(cè)定:分別精密量取供試品溶液2.0mL，按2.4項(xiàng)下方法自“加4%苯酚溶液1mL”起處理，依法測(cè)定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中無(wú)水葡萄糖的重量(mg)，計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表1及表2。

表1 不同產(chǎn)地濕生扁蕾多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

表2 不同采收期濕生扁蕾多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

3 討論

實(shí)驗(yàn)曾考察了加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)對(duì)水煎提取的影響，結(jié)果以每次加10倍量水煎煮1h煎煮3次時(shí)濕生扁蕾多糖提取率最高。同時(shí)對(duì)影響醇沉的因素浸膏密度、加醇速度、含醇濃度也進(jìn)行了考察，結(jié)果以浸膏密度1.15～1.20(g·mL－1)，攪拌下按1/2浸膏體積速度加入4倍量95%乙醇時(shí)濕生扁蕾多糖得率最高。

實(shí)驗(yàn)中還曾對(duì)20%三氯乙酸與氯仿－正丁醇(5:1)去除蛋白進(jìn)行比較，結(jié)果氯仿－正丁醇宜乳化，分離困難，確定用20%三氯乙酸去除蛋白。同時(shí)對(duì)石油醚脫脂、活性炭脫色進(jìn)行考察，10倍量石油醚(60～90℃)脫脂2次、1.5%活性炭脫色30min較理想。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘肅15個(gè)不同產(chǎn)地濕生扁蕾全草中多糖的含量差別較大，其中最高為2.98%(g/g)，最低為1.01%(g/g)。而且同一產(chǎn)地的不同采收期之間多糖含量也有差異。分析影響本實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素可能是生態(tài)環(huán)境光照、氣候、土壤等的不同所致。

［1］張寶琛，甄潤(rùn)德，胡柏林，等.濕生扁蕾的化學(xué)成分研究〔J〕.中草藥，1980，11(4):149.

［2］李作平，霍長(zhǎng)虹，鄭小莉.扁蕾的化學(xué)成分研究〔J〕.中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2003，20(1):24.

［3］王煥弟，譚成玉，杜昱光，等.藏藥濕生扁蕾的化學(xué)成分研究〔J〕.中國(guó)藥學(xué)雜志，2005，40(14):105.

［4］單俊杰，王順春，劉 滌，等.黃芪毛狀根與栽培黃芪中多糖的比較〔J〕.中草藥，2001，32(5):413－414.

［5］中華人民共和國(guó)藥典(2010版一部)〔M〕.北京化學(xué)工業(yè)出版社:57.