周婷

（湖南省長沙市中醫(yī)院 長沙410100）

近年來第三代芳香化酶抑制劑來曲唑在促排卵中的應(yīng)用愈來愈受到關(guān)注，其可阻斷雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素，降低雌激素濃度，從而增加促性腺激素的分泌而促進(jìn)卵泡發(fā)育。臨床研究也表明中醫(yī)中藥可以促卵泡發(fā)育及排卵，其中香附使用率高，因香附有“氣中之司，婦科之帥”之稱，為婦科調(diào)經(jīng)之要藥。筆者通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)比觀察香附與來曲唑?qū)β殉步M織P450arom的影響，探討香附的作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制，以更好地指導(dǎo)臨床用藥。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 清潔級(jí)成熟雌性SD大鼠48只，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 [許可證號(hào)：SCXK（滬）2009-0005號(hào)]，周齡 6周，體重 180～200 g，平均(192±10)g。每日定時(shí)作陰道涂片檢查，選擇動(dòng)情周期4～5 d，連續(xù)兩個(gè)正常動(dòng)情周期的大鼠用于實(shí)驗(yàn)。全部動(dòng)物均于湖南中醫(yī)藥大學(xué)普通動(dòng)物房飼養(yǎng)，恒溫22℃，12h光照，12h黑暗交替，自由攝取食物和水。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及主要試劑 來曲唑（芙瑞）：2.5 mg/片（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，購自湖南中醫(yī)附一醫(yī)院，產(chǎn)品批號(hào)09061656）；醋香附中藥配方顆粒：0.5g/袋，每袋相當(dāng)于中藥飲片10 g（廣東一方制藥有限公司，購自湖南中醫(yī)附一醫(yī)院，產(chǎn)品批號(hào)0908044）；Aromatase試劑盒（購自于武漢博士德有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 將具有規(guī)律動(dòng)情周期的48只清潔級(jí)雌性SD大鼠按隨機(jī)排列表法分為四組并編號(hào)：A組：空白對(duì)照組（12只）；B組：香附組（12只）；C組：來曲唑組（12只）；D組：香附+來曲唑組（12只）。同步化大鼠性周期后于大鼠的第一個(gè)性周期的動(dòng)情前期開始灌胃，用藥劑量按照人與大鼠用藥劑量換算公式計(jì)算，分別溶于2 mL蒸餾水溶液中對(duì)大鼠進(jìn)行灌胃：A組：蒸餾水溶液10 mL/kg灌胃；B組：香附水溶液10 mL/kg灌胃，藥物濃度為0.1 g/mL（取人1 d用藥劑量10倍實(shí)驗(yàn)）；C組：來曲唑水溶液10 mL/kg灌胃，藥物濃度為0.025 mg/mL；D組：來曲唑水溶液10 mL/kg+香附水溶液10 mL/kg灌胃。每日同一時(shí)間灌胃一次，持續(xù)灌胃9 d后斷頭處死，取卵巢標(biāo)本行免疫組化和HE染色。各級(jí)卵泡采用計(jì)數(shù)，免疫組織化學(xué)結(jié)果采用平均灰度值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS15.0軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料以(±S)表示，采用t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

B、C、D三組均可增加大鼠次級(jí)卵泡數(shù)目，其中C組較B組增加更多，D組則多于C組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；B、C、D三組均能抑制卵巢顆粒細(xì)胞中P450arom的表達(dá)，其中D組和C組的抑制效果最強(qiáng)，而B組作用優(yōu)于A組但弱于C組。見表1。

表1 各組大鼠次級(jí)卵泡計(jì)數(shù)及卵巢組織P450arom的表達(dá) (±S)

表1 各組大鼠次級(jí)卵泡計(jì)數(shù)及卵巢組織P450arom的表達(dá) (±S)

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3 討論

第三代芳香化酶抑制劑是治療絕經(jīng)期乳腺癌的內(nèi)分泌新藥，其中來曲唑在促排卵中的應(yīng)用愈來愈受到關(guān)注。臨床用于促排卵一般在月經(jīng)周期第3～7天，2.5 mg/d，口服，其通過與亞鐵血紅蛋白中的鐵原子結(jié)合，與內(nèi)源性底物競爭芳香化酶的活性位點(diǎn)，從而可逆地抑制該酶的活性，選擇性抑制雌激素生物合成，有效地阻斷雄烯二酮及睪酮向雌激素轉(zhuǎn)化，且只降低體內(nèi)雌激素水平，而不影響其他甾體激素生物合成[1]。香附味辛、微苦、微甘、平，歸肝、脾、三焦經(jīng)，有行氣解郁、調(diào)經(jīng)止痛之功效?，F(xiàn)代藥理研究表明，香附具有雌激素樣作用，可使子宮平滑肌松弛，皮下注射或陰道內(nèi)給藥，以子香烯的作用最強(qiáng)，可出現(xiàn)陰道上皮細(xì)胞完全角質(zhì)化，此可能是治療月經(jīng)不調(diào)的主要理論依據(jù)之一[2]。臨床研究表明中醫(yī)中藥調(diào)經(jīng)以促卵泡發(fā)育、促排卵療效確切、可提高妊娠率的中藥為主，其中香附使用率高，其能解氣、血、痰、火、濕、食六般郁邪，調(diào)經(jīng)常配合當(dāng)歸、川芎、熟地、紅花、川楝子、桃仁等，因此香附為婦科調(diào)經(jīng)之要藥。在卵巢內(nèi)部，由于p450arom受抑制，使雄激素轉(zhuǎn)化為雌激素受阻，導(dǎo)致雄激素在卵泡內(nèi)短暫積聚，從而增強(qiáng)FSH受體的表達(dá)并促使卵泡發(fā)育。說明P450arom在卵泡發(fā)育和排卵過程中起著重要作用，是卵泡發(fā)育和排卵的關(guān)鍵機(jī)制之一。本研究從卵泡數(shù)目、卵巢組織P450arom方面對(duì)比觀察香附和來曲唑?qū)Υ笫舐雅莅l(fā)育及排卵的影響，以探索香附調(diào)經(jīng)的作用靶點(diǎn)及其機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：（1）香附和來曲唑都可促進(jìn)大鼠卵泡發(fā)育；（2）香附和來曲唑均能下調(diào)卵巢組織P450arom表達(dá)，以促進(jìn)卵泡發(fā)育和排卵；（3）通過香附與來曲唑?qū)Υ笫舐殉步M織P450arom的表達(dá)，進(jìn)一步推測兩者促卵泡發(fā)育可能具有相同的作用靶點(diǎn)和作用機(jī)制。

[1]Kilic-Okman T,Kucuk M,Altaner S.Comparison of the effects of letrozole and clomiphene citrate on ovarian follicles,endometrium,and hormonelevelsin therat[J].Fertil Steril,2003,80(6):1 330-1 332

[2]王潔琳,鄭志群.第三代芳香化酶的促排卵作用的研究進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2007,13(15):1 176-1 178