龔 杰，劉柏林，方艷秋＊，楊廣民

（1.廈門(mén)大學(xué)醫(yī)院 體檢科，福建 廈門(mén)361005；2.吉林省人民醫(yī)院，長(zhǎng)春130021）

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）引起的一種傳染性疾病，可進(jìn)一步發(fā)展為肝硬化甚至肝癌，晚期導(dǎo)致患者肝功能衰竭，嚴(yán)重影響患者的健康。早期對(duì)HBV感染進(jìn)行明確診斷，做出相應(yīng)防治措施，對(duì)提高臨床療效和改善患者預(yù)后具有重要意義。ELISA法檢測(cè)血清學(xué)標(biāo)志物（HBV－M）是確定乙肝病毒感染的傳統(tǒng)方法，但對(duì)評(píng)估HBV感染者病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)歸及預(yù)后等情況有一定的局限性。HBVDNA定量檢測(cè)用于判斷病毒復(fù)制的活躍程度已廣泛應(yīng)用于臨床。乙肝病毒外膜大蛋白（HBV－LP），是病毒形成完整外膜的重要標(biāo)志，與病毒復(fù)制密切相關(guān)[1]。前S1抗原（Pre－S1）是 HBV 病毒前S1基因編碼的一種外膜蛋白[2]，在病毒入侵肝細(xì)胞過(guò)程中起重要作用，是HBV感染和復(fù)制的新標(biāo)志。本文對(duì)864例乙型肝炎患者 HBV－LP、Pre－S1抗原、HBV－DNA載量和乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)，探討反映不同血清學(xué)類型患者體內(nèi)病毒復(fù)制及抗病毒療效監(jiān)測(cè)的最佳指標(biāo)以及分析各指標(biāo)之間的關(guān)系，為臨床診療乙型肝炎提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集吉林省人民醫(yī)院體檢中心2009－2012年體檢人員中所有乙型肝炎感染者血清標(biāo)本，其中男426例，年齡23－62歲，女438例，年齡28－68歲?；颊邿o(wú)其它類型肝炎合并感染，診斷均符合北京第五次全國(guó)傳染病和寄生蟲(chóng)病會(huì)議修訂的標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí)以體檢中心100例單項(xiàng)HBsAg（＋）及HBV－M全陰性體檢者作為健康對(duì)照。

1.2 儀器與試劑 檢測(cè)儀器包括Fluido洗板機(jī)、Reader2010酶標(biāo)儀、Smartcycle熒光定量PCR儀等。血清學(xué)標(biāo)志物HBV－M檢測(cè)試劑購(gòu)自上?？迫A生物工程有限公司，HBV－LP抗原、Pre－S1抗原檢測(cè)試劑和HBV－DNA定量檢測(cè)試劑均購(gòu)自廈門(mén)英科新創(chuàng)科技有限公司。

1.3 檢測(cè)方法 HBV－M檢測(cè)采用ELISA法，目測(cè)定性檢查；HBV－LP、Pre－S1抗原采用ELISA 雙抗體夾心法檢測(cè)，嚴(yán)格按照試劑盒操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，選擇波長(zhǎng)450nm，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度（A）值，按要求設(shè)定Cutoff值，測(cè)定結(jié)果大于Cutoff值為陽(yáng)性。HBV－DNA檢測(cè)采用熒光定量PCR法，病毒載量以copies／ml表示，結(jié)果以5×102copies／ml為參考臨界值，大于此值為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)輸入到Excel表中，采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料組間差異采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料組間差異采用方差分析、相關(guān)性用非參數(shù)Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)分析，P＜0.05或P＜0.01為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同HBV－M模式中HBV－LP、Pre－S1 及HBV－DNA陽(yáng)性率比較 100例健康對(duì)照組HBVLP、Pre－S1及 HBV－DNA的檢測(cè)結(jié)果均為陰性。不同 HBV－M模式中HBV－LP、Pre－S1 及 HBVDNA陽(yáng)性例數(shù)及陽(yáng)性率如表1所示。數(shù)據(jù)經(jīng)χ2檢驗(yàn)后得出：HBsAg、HBeAg、HBcAb陽(yáng)性模式組（大三陽(yáng)）HBV－LP、Pre－S1及 HBV－DNA 陽(yáng)性率顯著高于其它 HBV－M 模式組（P＜0.05），提示 HBVLP、HBV DNA與HBeAg高度相關(guān)，可以反映患者體內(nèi)HBV的復(fù)制水平。

表1 不同HBV－M模式中HBV－LP、Pre－S1及HBV－DNA的檢出率比較

2.2 HBV－LP、Pre－S1與 HBV－DNA 陽(yáng)性符合率比較 HBV－LP與 HBV－DNA的陽(yáng)性率無(wú)顯著差異（P＞0.05），與 HBV－DNA 陽(yáng)性符合率為86.9%。Pre－S1的陽(yáng)性率明顯低于 HBV－LP與 HBV－DNA的陽(yáng)性率（P＜0.05），與 HBV－DNA的陽(yáng)性符合率為57.7%。說(shuō)明HBV－LP較Pre－S1在反應(yīng)病毒復(fù)制及疾病活動(dòng)方面更為靈敏，HBV－LP的檢測(cè)比Pre－S1更有意義。

表2 HBV－LP、Pre－S1與 HBV－DNA陽(yáng)性率比較

2.3 HBV－LP、Pre－S1與 HBV－DNA 拷貝數(shù)及 HB－sAg定量值之間的相關(guān)性比較 HBV－DNA陽(yáng)性的668例標(biāo)本中，HBV－DNA拷貝數(shù)與 HBV－LP、Pre－S1平均A值具有顯著的正相關(guān)性，而與HBsAg無(wú)明顯相關(guān)性（見(jiàn)表3）。

表3 HBV－DNA拷貝數(shù)與HBV－LP、Pre－S1及HBsAg定量值的相關(guān)性比較

3 討論

HBV血清標(biāo)志物檢測(cè)是目前診斷乙型肝炎最常用的指標(biāo)，它反映了人體對(duì)乙型肝炎病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)和病程的轉(zhuǎn)化過(guò)程，也是判斷患者傳染性及預(yù)后的傳統(tǒng)指標(biāo)。然而由于HBV血清標(biāo)志物復(fù)雜多樣，臨床上難以根據(jù)這些結(jié)果對(duì)HBV感染復(fù)制情況進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，因此它主要反映人體對(duì)乙肝病毒的免疫反應(yīng)狀態(tài)，不能直接反映HBV在患者體內(nèi)的復(fù)制情況。

目前臨床判斷患者病毒是否復(fù)制的常用指標(biāo)是HBeAg和HBV－DNA，并發(fā)現(xiàn)部分HBeAg陰性患者HBV－DNA仍處于較高水平，說(shuō)明患者體內(nèi)依然有病毒大量復(fù)制。臨床上通常以HBeAg和HBVDNA轉(zhuǎn)陰作為抗病毒治療的終點(diǎn)，然而即使如此，仍有部分患者停藥后出現(xiàn)病情反復(fù)。HBV的S基因編碼三種外膜蛋白：主蛋白（HBsAg）、中蛋白（HBsAg和 Pre－S2蛋白）、大蛋白（HBsAg、Pre－S1蛋白和Pre－S2蛋白，HBV－LP）[3]，研究證明 HBVLP在病毒復(fù)制過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[4]，HBV－LP診斷試劑盒的研制成功有望為填補(bǔ)傳統(tǒng)兩對(duì)半試劑的空白并彌補(bǔ)HBV DNA檢測(cè)的不足，成為抗病毒治療終點(diǎn)判定的新的指標(biāo)。

在本實(shí)驗(yàn)研究中共對(duì)864例乙型肝炎患者進(jìn)行了 HBV－LP、Pre－S1抗原、HBV－DNA載量和乙型肝炎血清標(biāo)志物的檢測(cè)。結(jié)果顯示：“大三陽(yáng)”感染者中HBV－LP和HBV－DNA陽(yáng)性率均較高，且顯著高于其它血清模式組，同時(shí)HBV－LP和HBV－DNA的陽(yáng)性率無(wú)顯著差異?！按笕?yáng)”感染模式是病毒復(fù)制活躍，急性期、傳染性強(qiáng)的模式，提示 HBV－LP、HBV DNA與HBeAg高度相關(guān)，均為評(píng)價(jià)乙型肝炎傳染性及病毒復(fù)制的良好指標(biāo)。在檢測(cè)結(jié)果中還發(fā)現(xiàn)，雖然Pre－S1與 HBV－LP、HBV DNA 具有一定的相關(guān)性，但Pre－S1的陽(yáng)性率明顯低于HBV－LP與HBV－DNA的陽(yáng)性率。這與Pre－S1的特殊結(jié)構(gòu)以及試劑盒制備的局限性有關(guān)。Pre－S1檢測(cè)試劑使用的單抗是用化學(xué)合成的多肽而制作的，而應(yīng)用該多肽無(wú)法模擬Pre－S1形成的構(gòu)象表位，因而導(dǎo)致Pre－S1的檢出率較低[5]。最近幾年的研究采用其特異結(jié)構(gòu)型表位抗體檢測(cè)HBV－LP取得了技術(shù)上的突破。本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明HBV－LP比Pre－S1試劑效果大大提高，且大蛋白的檢出率與血液中病毒DNA的符合率高度符合（86.9%），可作為判斷病毒復(fù)制的一個(gè)可靠指標(biāo)。

進(jìn)一步的檢測(cè)及分析證實(shí)，不同HBV－DNA拷貝數(shù)與HBV－LP、Pre－S1的平均A值具有良好的相關(guān)性，且三者與HBsAg定量值均無(wú)相關(guān)性，再次說(shuō)明HBsAg不能作為乙肝病毒復(fù)制及傳染性強(qiáng)弱的指標(biāo)，而 HBV－LP、Pre－S1可以部分作為 HBV－DNA檢測(cè)的補(bǔ)充檢測(cè)指標(biāo)。

我國(guó)衛(wèi)生資源分配不一，尚有很多醫(yī)院不具備HBV－DNA PCR的實(shí)驗(yàn)水平。而免疫測(cè)定技術(shù)因其有效、直接、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)，已經(jīng)在臨床診斷應(yīng)用上占主導(dǎo)地位，在我國(guó)大中小型醫(yī)院普遍應(yīng)用，HBVLP檢測(cè)有利于中小型醫(yī)院也掌握血液內(nèi)病毒復(fù)制指標(biāo)的檢測(cè)方式。進(jìn)而提高臨床醫(yī)生的診斷和治療水平。同時(shí)，HBV－LP的完全消退提示抗病毒治療較為徹底，此時(shí)選擇停止用藥可以避免患者病情的反跳。HBV－DNA與HBV－LP的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于臨床判斷病情、選擇最佳治療方案、檢測(cè)病情變化和觀察臨床療效具有重要的意義。

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