鄭加永， 夏淑琦， 魏國(guó)忠， 馬衛(wèi)德， 汪 海， 王 晗， 張德亭

(溫州市人民醫(yī)院溫州市婦幼保健院婦產(chǎn)科實(shí)驗(yàn)室，浙江溫州325000)

凝血項(xiàng)目的檢查日益廣泛的應(yīng)用于臨床，我們根據(jù)《ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的相關(guān)要求，對(duì)Destiny Max全自動(dòng)血凝分析系統(tǒng)(簡(jiǎn)稱(chēng)Destiny Max)性能以及配套試劑的穩(wěn)定性進(jìn)行了綜合評(píng)價(jià)。

材料和方法

一、儀器和試劑

愛(ài)爾蘭Tcoag公司生產(chǎn)的Destiny Max全自動(dòng)血凝儀及原裝配套試劑、質(zhì)控品和消耗品。法國(guó)Stago公司生產(chǎn)的STA-R全自動(dòng)血凝儀及原裝配套試劑、質(zhì)控品和消耗品。

二、評(píng)價(jià)樣本

Stago公司提供的正常值質(zhì)控血漿(STA Coag Control N，批號(hào):105650)和異常值質(zhì)控血漿(STA Coag Control P，批號(hào):106118);Tcoag公司提供的正常水平質(zhì)控品(TriniCHECK Control 1，批號(hào):B315006)和異常水平質(zhì)控品(TriniCHECK Control 2，批號(hào):B302009)，以及新鮮混合血漿(按需要用健康體檢者和患者新鮮血漿制備)。常規(guī)測(cè)定血漿為0.109 mol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝空腹靜脈血經(jīng)3 000×g離心10 min制備的乏血小板血漿。

三、評(píng)價(jià)內(nèi)容和方法

根據(jù)美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)相關(guān)文件要求，對(duì)儀器的準(zhǔn)確度、精密度(批內(nèi)、批間)、線(xiàn)性評(píng)價(jià)、檢出限值、攜帶污染率和試劑穩(wěn)定性等進(jìn)行評(píng)價(jià)。具體項(xiàng)目為血漿凝血酶原時(shí)間(PT)、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化比值(INR)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)和凝血酶時(shí)間(TT)。PT、APTT和TT均采用機(jī)械式磁珠凝固法，根據(jù)PT試劑的國(guó)際敏感度指數(shù)(ISI)值計(jì)算INR，F(xiàn)IB采用Clauss法。所有試驗(yàn)均由經(jīng)驗(yàn)豐富的技術(shù)人員嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程進(jìn)行。采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室改進(jìn)修正案'88(CLIA'88)推薦的允許誤差，PT為15%、APTT為15%、FIB為20%和TT為15%。

1.精密度試驗(yàn) 根據(jù)CLSI EP5-A2文件的要求［1］，批內(nèi)精密度采用正常值、異常值的新鮮混合血漿，在2 h內(nèi)連續(xù)重復(fù)測(cè)定20次;批間精密度采用同一批號(hào)的正常和異常血漿及Stago公司提供的質(zhì)控血漿，每天測(cè)定1次連續(xù)20 d，測(cè)定時(shí)間涵蓋整個(gè)工作日和試劑與質(zhì)控品的穩(wěn)定期，計(jì)算均值()、標(biāo)準(zhǔn)差(s)及變異系數(shù)(CV)，以CV%低于1/4總誤差和1/3總誤差為判定標(biāo)準(zhǔn)。

2.檢出限 取FIB試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)品作為高值血清，進(jìn)行倍比濃度稀釋至廠(chǎng)家提供的靈敏度值，以天間CV接近20%時(shí)相應(yīng)的FIB濃度為檢出限［2］。

3.FIB線(xiàn)性評(píng)價(jià)試驗(yàn) 根據(jù)CLSI EP6-A文件的要求［3］，選取1份FIB值接近預(yù)期上限混合血漿(H)和1份FIB值接近預(yù)期下限混合血漿(L)，按 5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L關(guān)系進(jìn)行配制，每個(gè)稀釋度由低到高重復(fù)測(cè)定3次，再由高到低重復(fù)測(cè)定3次，計(jì)算均值。將6對(duì)實(shí)測(cè)值(Y)與預(yù)期值(X)進(jìn)行線(xiàn)性回歸，計(jì)算Y=aX+b驗(yàn)證線(xiàn)性范圍要求，a值在1±0.05范圍內(nèi)，b接近0為判定標(biāo)準(zhǔn)［4］。

4.攜帶污染率 用制備的FIB高值、FIB低值、PT和APTT正常值混合血漿，按如下方法進(jìn)行攜帶污染試驗(yàn)，要求FIB測(cè)定攜帶污染率(K)≤1/4總誤差。(1)FIB高值樣本對(duì)FIB低值、PT和APTT正常值樣本的污染:將FIB低值樣本連續(xù)測(cè)定3次，結(jié)果為L(zhǎng)1、L2、L3，立即連續(xù)測(cè)定FIB高值樣本3次，結(jié)果為H1、H2、H3，再連續(xù)測(cè)定FIB低值樣本3次，結(jié)果為L(zhǎng)4、L5、L6。根據(jù)公式K1=［L4－Mean(L1，L2，L3)］/Mean(L1，L2，L3)，計(jì)算FIB高值樣本對(duì)FIB低值樣本的攜帶污染率(K1)。將上述過(guò)程中的FIB低值標(biāo)本分別用PT和APTT正常值血漿代替，可以得到FIB高值樣本對(duì)其的攜帶污染率(K1);(2)FIB低值樣本對(duì)FIB高值樣本的污染:將FIB高值樣本連續(xù)測(cè)定3次，結(jié)果為H1、H2、H3，立即連續(xù)測(cè)定FIB低值樣本3次，結(jié)果為L(zhǎng)1、L2、L3，再連續(xù)測(cè)定FIB高值樣本3次，結(jié)果為H4、H5、H6。根據(jù)公式 K2=［H4－Mean(H1，H2，H3)］/Mean(H1，H2，H3)，計(jì)算 FIB 低值樣本對(duì)FIB高值樣本的攜帶污染率(K2)。

5.試劑穩(wěn)定性 正常值、異常值的混合血漿及高低2個(gè)水平的Stago公司質(zhì)控血漿，各自分裝15支，－70℃冰箱冷凍。試劑按說(shuō)明書(shū)復(fù)溶，用此試劑用Destiny Max連續(xù)測(cè)定PT、APTT、FIB、TT項(xiàng)目15個(gè)工作日。試劑不使用時(shí)，2～8℃密封保存，觀察測(cè)定值的變化。

6.相關(guān)性試驗(yàn) 根據(jù)CLSI EP9-A文件關(guān)于能力比對(duì)與偏差評(píng)估的相關(guān)要求，對(duì)臨床送檢新鮮血漿(包括正常水平和異常水平)，分別在Destiny Max和Stago STA-R血凝分析系統(tǒng)(簡(jiǎn)稱(chēng)Stago STA-R)上檢測(cè) PT、APTT、FIB、TT，連續(xù)20 d，共507份標(biāo)本。以參加室間質(zhì)評(píng)的Stago STA-R為比對(duì)基準(zhǔn)，對(duì)Destiny Max進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)(r2)高于0.95為判定標(biāo)準(zhǔn)。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

結(jié) 果

一、批內(nèi)精密度

Destiny Max對(duì)PT、APTT、FIB和 TT 項(xiàng)目正常值和異常值新鮮混合血漿的重復(fù)性試驗(yàn)顯示其批內(nèi)CV均低于1/4總誤差。見(jiàn)表1。

二、批間精密度

Destiny Max對(duì)PT、APTT、FIB和TT項(xiàng)目正常值和異常值混合血漿以及Stago公司質(zhì)控血漿的重復(fù)性試驗(yàn)顯示其批間CV均低于1/3總誤差，表明Destiny Max的檢測(cè)精密度高、穩(wěn)定性好。見(jiàn)表2。

表1 Destiny Max血凝分析系統(tǒng)PT、APTT、FIB和TT批內(nèi)精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2 Destiny Max血凝分析系統(tǒng)PT、APTT、FIB和TT批間精密度試驗(yàn)結(jié)果

三、檢出限

連續(xù)測(cè)定稀釋為0.40、0.50、0.60和 0.80 g/L的FIB，其中0.50 g/L的CV值接近20%，故該值為檢出限。見(jiàn)表3。

四、FIB線(xiàn)性評(píng)價(jià)

制備的混合血漿FIB預(yù)期高值為8.97 g/L，預(yù)期低值為0.90 g/L，Destiny Max的 a值在1±0.05范圍內(nèi)，b接近0達(dá)到判定標(biāo)準(zhǔn)。FIB在0.90～8.97 g/L范圍內(nèi)有良好的線(xiàn)性 (r=0.999 9)。見(jiàn)表4。

表3 FIB檢測(cè)系統(tǒng)檢出限計(jì)算結(jié)果

五、FIB攜帶污染率

FIB高值樣本對(duì)FIB低值、PT和APTT正常值樣本的攜帶污染率K1分別為0.71%、1.00%和0.41%;FIB低值樣本對(duì)FIB高值樣本的攜帶污染率 K2為0.89%，均＜1/4總誤差。表明Destiny Max在FIB檢測(cè)過(guò)程中交叉污染低。

六、試劑穩(wěn)定性

Destiny Max PT、APTT、FIB和TT試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)，參照EP15文件［5］，要求CV低于1/3總誤差。見(jiàn)表5。

七、相關(guān)性

Destiny Max和Stago STA-R除APTT的r2為0.813 4 外，PT、INR和 FIB 的 r2＞0.95。表明其有良好的相關(guān)性，檢測(cè)結(jié)果具有可比性。見(jiàn)表6。

表4 FIB在Destiny Max血凝分析系統(tǒng)上的線(xiàn)性范圍試驗(yàn)結(jié)果

表5 Destiny Max血凝分析系統(tǒng)PT、APTT、FIB和TT試劑穩(wěn)定性試驗(yàn)

表6 Destiny Max與STA-R血凝分析系統(tǒng)PT、INR、APTT和FIB相關(guān)性結(jié)果

討 論

Destiny Max可以自由選擇機(jī)械法和/或光學(xué)法檢測(cè)原理的儀器，多種測(cè)量方式同時(shí)檢測(cè)，微量反應(yīng)體積(試劑用量最小達(dá)25μL)。其機(jī)械法采用磁珠法原理，故不受溶血、黃疸、及高血脂血癥的影響，具有很強(qiáng)的抗干擾能力。本研究根據(jù)國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICSH)對(duì)血凝分析系統(tǒng)要求，并結(jié)合Destiny Max的特點(diǎn)，建立了一套適合并簡(jiǎn)單可行的性能評(píng)價(jià)方法。

本研究批內(nèi)精密度采用混合血漿監(jiān)測(cè)，各項(xiàng)目高、低值CV均在3%以?xún)?nèi);批間精密度采用雙水平的混合血漿和質(zhì)控血漿同時(shí)監(jiān)測(cè)，各項(xiàng)目測(cè)定值CV均在1/3總誤差要求以?xún)?nèi)，重復(fù)性良好。將0.50 g/L定為FIB的檢出限，其CV(19.59%)接近20%。FIB在0.90～8.97 g/L范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性相關(guān)。攜帶污染率K1(0.71%、1.00%和0.41%)和 K2(0.89%)均低于 1/4總誤差(3.75%)。表明Destiny Max在正常維護(hù)操作下，能將交叉污染控制在較好的范圍內(nèi)。試劑穩(wěn)定期長(zhǎng)，常規(guī)4項(xiàng)檢查項(xiàng)目在15 d內(nèi)項(xiàng)目CV值均在10%以?xún)?nèi)。在比對(duì)實(shí)驗(yàn)中，Destiny Max的 PT、INR、FIB結(jié)果與Stago STA-R的結(jié)果呈高度相關(guān)(r2＞0.95)。APTT 的 r2為0.813 4，差異較大，可能與Tcoag公司采用的試劑為液體硅藻土，激活能力強(qiáng)有關(guān)。

綜上所述，本研究對(duì)Destiny Max進(jìn)行了較為全面的性能評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，該系統(tǒng)性能可靠，能為臨床提供可靠的檢驗(yàn)數(shù)據(jù)，適合現(xiàn)代化大型綜合性實(shí)驗(yàn)室的臨床常規(guī)檢驗(yàn)工作。

［1］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods;approved guideline-second edition［S］.EP05-A2，CLSI，2004.

［2］馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)［M］.第2版.上海:上?？萍嘉墨I(xiàn)出版社，2007:111-125.

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures［S］.EP6-A，CLSI，2003.

［4］宋文琪，靳劍蕓，王 艷，等.全自動(dòng)血凝儀分析過(guò)程質(zhì)量管理與評(píng)價(jià)的研究［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2009，24(6):469-472.