歐立軍 危 革 周紅燦 鄭 鎮(zhèn) 李軍桃 (懷化學(xué)院生命科學(xué)系，湖南 懷化 48008)

不同產(chǎn)地的同種藥材，其活性成分的種類及含量均有所不同，導(dǎo)致其藥效的差異，從而中藥材講究道地性〔1～5〕。對道地藥材的判斷方法很多，如高效液相色譜法〔6～9〕、光譜法〔10～12〕和分子標(biāo)記〔13～16〕等方法，但少見從藥理學(xué)角度進(jìn)行中藥材的道地性分析。天門冬為天門冬屬植物，具有較強(qiáng)的抗氧化能力〔17～20〕。對天門冬藥材的道地性探討較少，僅見通過ITS序列初步認(rèn)為貴州產(chǎn)天門冬遺傳多樣性較大，可能是其道地產(chǎn)區(qū)〔14〕。本文從藥理學(xué)角度對不同地區(qū)天門冬進(jìn)行抗氧化能力比較。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 我國貴州、湖南、廣東、廣西、云南、青海和浙江7個省產(chǎn)的天門冬。昆明種健康雄性小鼠，2月齡，體重(20±2)g，分為空白對照組、衰老模型組和給藥組，每組10只。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 藥劑制備 天門冬低溫烘干后，粉碎成粗粉。取天門冬粗粉20 g，加水160 ml煮提3次，1 h/次，合并3次提取液，過濾后濃縮得天門冬水提液;把所得的藥劑稀釋到生藥濃度0.7 g/ml，冷藏備用。

1.2.2 衰老和給藥模型的構(gòu)建 對照組每天皮下注射生理鹽水;衰老模型組每天注射 D-半乳糖(7 mg/ml，經(jīng)130℃滅菌，100 mg/kg);給藥組每天注射 D-半乳糖(上海試劑二廠)(100 mg/kg)，同時灌胃天門冬水提液(2 g/kg)。各組分籠飼養(yǎng)，自由進(jìn)水。

1.2.3 生理指標(biāo)測定 連續(xù)給藥30 d后，斷頭處死，取血，3 000 r/min離心取血清;取肝臟、腦、心、肺稱重，用生理鹽水分別制成1%和10%的勻漿。南京建成產(chǎn)試劑盒進(jìn)行起氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的測定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以s表示，各組之間差異的比較采用單因素方差分析。

2 結(jié)果

2.1 天門冬對小鼠腦NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響 各地區(qū)天門冬水提液均能提高小鼠腦的SOD、NOS和CAT的活力，使NO含量上升，MDA含量降低(均P＜0.05);不同產(chǎn)區(qū)天門冬的提高或降低比率存在明顯差異，貴州和湖南產(chǎn)天門冬提高抗氧化系統(tǒng)酶活性明顯高于其他產(chǎn)區(qū)天門冬，且升高NO含量和降低MDA含量同樣與其他產(chǎn)區(qū)天門冬存在顯著差異(均P＜0.05)。見表1。

2.2 天門冬對小鼠肝NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響比較 7個給藥組小鼠肝的NOS、CAT和SOD活性及NO含量都比衰老組高，MDA含量比衰老組低，SOD活性和NO含量比對照組低(均P＜0.05);不同產(chǎn)區(qū)天門冬的效果存在顯著差異，貴州和湖南產(chǎn)天門冬效果最好，云南和青海產(chǎn)天門冬次之，其他產(chǎn)區(qū)一般(P＜0.05)。見表2。

2.3 天門冬對小鼠血清NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響 7個給藥組小鼠血清的SOD、NOS和CAT活性、NO和MDA含量與衰老組差異顯著(均P＜0.05);貴州和湖南產(chǎn)天門冬的抗氧化效果顯著優(yōu)于其他產(chǎn)區(qū)(P＜0.05)。見表3。

表1 不同產(chǎn)地天門冬水提液對腦NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響( s，n=10)

表1 不同產(chǎn)地天門冬水提液對腦NOS、CAT、SOD活性與NO和MDA含量的影響( s，n=10)

與衰老組比較:1)P＜0.05，與其他產(chǎn)地天門冬比較:2)P＜0.05;下表同

處理 SOD(U/mg)NOS(U/mg)CAT(U/mg)MDA(U/mg)NO(μmol/L)對照組 98.31±4.44 1.48±0.035 32.34±0.98 1.43±0.08912.50±1.06衰老組 63.99±4.20 1.35±0.057 20.67±2.16 2.59±0.255 5.08±0.85給藥組 貴州產(chǎn) 93.47±4.051)2) 1.63±0.0551)2) 47.80±1.811)2) 1.09±0.0281)2) 22.02±1.831)2)湖南產(chǎn) 92.25±3.641)2) 1.59±0.0291)2) 48.47±2.481)2) 1.15±0.0471)2) 21.37±1.361)2)廣東產(chǎn) 74.31±3.471) 1.41±0.0641) 38.36±2.141) 1.39±0.0581) 16.02±1.781)廣西產(chǎn) 76.67±5.141) 1.39±0.0341) 36.24±3.251)1) 1.41±0.0971) 15.39±2.131)云南產(chǎn) 85.21±3.981) 1.48±0.0671) 40.47±2.401) 1.34±0.0551) 18.44±1.501)青海產(chǎn) 79.68±2.471) 1.42±0.0401) 42.80±3.031) 1.29±0.0741) 19.21±2.141)浙江產(chǎn) 86.34±3.191) 1.44±0.0641) 34.56±1.681) 1.37±0.061) 17.57±1.391)

表2 天門冬不同提取液對小鼠肝NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響( s，n=10)

表2 天門冬不同提取液對小鼠肝NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響( s，n=10)

?處理對照組 55.65±2.81 0.84±0.130 54.61±3.32 1.32±0.2734.95±0.017衰老組 49.54±2.88 0.74±0.117 45.72±4.5 1.75±0.136 1.91±0.016給藥組 貴州產(chǎn) 51.87±3.011)2) 1.11±0.2231)2) 57.28±3.141)2) 1.14±0.1241)2) 3.75±0.0451)2)湖南產(chǎn) 52.36±2.751)2) 1.08±0.1941)2) 58.01±2.241)2) 1.18±0.0381)2) 3.98±0.0321)2)廣東產(chǎn) 50.35±3.551) 0.79±0.1141) 54.10±1.871) 1.34±0.0471) 3.01±0.0181)廣西產(chǎn) 50.24±2.671) 0.82±0.1321) 53.26±3.021) 1.30±0.0871) 2.89±0.0231)云南產(chǎn) 50.87±4.381) 0.87±0.1231) 55.14±2.221) 1.28±0.0741) 3.31±0.0501)青海產(chǎn) 51.47±1.801) 0.90±0.1141) 54.87±2.571) 1.33±0.0571) 3.43±0.0421)浙江產(chǎn) 50.89±2.491) 0.82±0.1341) 52.14±1.451) 1.39±0.0771) 3.12±0.0321)

s，n=10)表3 天門冬不同提取液對小鼠血清NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響(

s，n=10)表3 天門冬不同提取液對小鼠血清NOS、MDA、SOD活性，NO和MDA含量的影響(

處理 SOD(U/mg)NOS(U/mg)CAT(U/mg)MDA(U/mg)NO(μmol/L)對照組 96.42±9.29 46.52±3.32 0.61±0.083 24.96±3.80987.64±46.14衰老組 72.58±6.47 43.76±4.51 0.072±0.0132 29.64±4.46 503.26±27.08給藥組 貴州產(chǎn) 102.65±8.131)2) 57.21±3.431)2) 0.85±0.0541)2) 22.67±2.211)2) 985.52±32.121)2)湖南產(chǎn) 99.10±7.581)2) 59.54±3.191)2) 0.74±0.0201)2) 21.35±1.321)2) 978.36±35.031)2)廣東產(chǎn) 95.36±8.741) 49.36±4.141) 0.58±0.081) 23.44±1.941) 805.36±40.241)廣西產(chǎn) 96.31±9.271) 50.17±2.321) 0.54±0.0221) 23.78±1.871) 824.31±30.021)云南產(chǎn) 97.87±8.301) 55.39±3.231) 0.64±0.0521) 22.98±2.071) 905.21±25.051)青海產(chǎn) 95.87±7.811) 54.18±4.141) 0.65±0.0521) 23.07±2.571) 918.39±30.041)浙江產(chǎn) 94.25±7.491) 51.02±3.341) 0.58±0.0411) 23.57±3.071) 836.25±40.021)

3 討論

衰老是生命的必然過程，提高抗氧化系統(tǒng)酶活性，抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，清除自由基，是中藥材抗氧化，延緩衰老的重要機(jī)制〔21〕。MDA是脂質(zhì)過氧化物的分解產(chǎn)物，可間接反映機(jī)體自由基水平的代謝情況〔22，23〕。隨著年齡的增長，NO的含量逐漸下降，許多生理作用不能發(fā)揮而加速機(jī)體衰老進(jìn)程〔24〕，NO的生成量與NOS的活性密切相關(guān)〔25〕。SOD和CAT廣泛存在于各類生物體中，是機(jī)體重要的抗氧化酶，可催化生物體內(nèi)的超氧自由基發(fā)生歧化反應(yīng)，降低自由基代謝產(chǎn)物MDA的生成〔26～31〕。本文結(jié)果表明，7個省產(chǎn)天門冬都可以提高提高機(jī)體內(nèi)各種抗氧化系統(tǒng)相關(guān)酶活性，增加NO生成量，從而達(dá)到減少機(jī)體過氧化損傷程度而延緩衰老。

針對傳統(tǒng)藥用植物的品質(zhì)退化進(jìn)行品質(zhì)改良，選育優(yōu)良品種，是優(yōu)化中草藥品質(zhì)的根本途徑，選育出優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、穩(wěn)產(chǎn)、熟期適當(dāng)、抗性強(qiáng)和適應(yīng)性廣，是各種藥用植物育種的共同目標(biāo)〔32，33〕。天門冬在我國分布較廣，主要依靠野生資源。近些年由于天門冬用量大增，野生天門冬資源逐年減少，且生態(tài)破壞嚴(yán)重，因此人工栽培成為解決天門冬資源緊張和保護(hù)環(huán)境的必要手段，而優(yōu)異種質(zhì)是人工栽培的重要方面。本文研究認(rèn)為，貴州和湖南產(chǎn)天門冬具有更有效地抗氧化損傷和減少過量自由基的損傷能力，有更明顯的抗衰老效果。因此，這些地區(qū)可以成為人工栽培天門冬及引種的首選，并可以從中選育出抗氧化能力強(qiáng)、產(chǎn)量高和適應(yīng)性廣的優(yōu)良新品種。

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