葉伊琳 李 莉 張敏敏 崔 娟 (安徽中醫(yī)學(xué)院美容醫(yī)學(xué)教研室，安徽 合肥 230038)

肥胖不僅可導(dǎo)致脂肪的過(guò)量?jī)?chǔ)存，而且增加了心血管疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，如肥胖性高血壓等〔1〕。肥胖性高血壓的涉及因素較多，但肥胖是導(dǎo)致該病的關(guān)鍵因素〔2〕。藥物是目前常用的減肥方式，但存在多種問(wèn)題，如毒性大、易反彈、效果不理想等，此外長(zhǎng)期服用可導(dǎo)致肝損傷，故探討有效安全的減肥方法很有必要。肉桂是藥食同源的藥材，毒性低，具有一定的減肥降脂作用〔3，4〕，而臨床指出肉桂可用于肥胖治療〔5〕，但目前肉桂是否對(duì)肥胖性高血壓仍有治療效果還不清楚。研究指出Toll樣受體參與了肥胖性高血壓的發(fā)病過(guò)程〔6〕。本研究擬分析肉桂對(duì)肥胖性高血壓大鼠癥狀的改善及Toll樣受體的影響。

1 材料與方法

1.1 肉桂的提取及配制 向500 g肉桂粉末藥材中加入3 000 ml水，采用回流裝置蒸餾3 h后分離出揮發(fā)油及水溶性成分，將水溶性成分進(jìn)一步濃縮，并與揮發(fā)油混合，最終得到74.6 g浸膏。取肉桂浸膏1.34 g加水配成100 ml藥液，相當(dāng)于生藥0.9 g/kg，即為高劑量;取肉桂浸膏0.445 g加水至100 ml，相當(dāng)于生藥0.3 g/kg，即為低劑量。

1.2 肥胖性高血壓大鼠模型建立、分組及給藥 雄性SD大鼠，體重為200～250 g，購(gòu)于安徽省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(皖)2011-002。將60只雄性大鼠按體重隨機(jī)分成對(duì)照組(10只)和高脂飼料組(50只)，對(duì)照組從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至結(jié)束給予普通飼料，高脂組給予高脂飼料，造模10 w后，取肥胖性高血壓大鼠30只，分成3組，模型組、肉桂高、低劑量組(0.9、0.3 g生藥/kg)(n=10)。每日按上述劑量灌胃一次，給藥期間繼續(xù)給予高脂飼料，正常組與模型組給予常水灌胃，共12 w。高脂飼料:由每100 g基礎(chǔ)飼料中加入奶粉、豬油各10 g，雞蛋1個(gè)，魚(yú)肝油10滴，當(dāng)日配制并供給。肥胖大鼠是指高脂飼養(yǎng)大鼠的體重較普通飼養(yǎng)大鼠重20%(即單只模型組大鼠體重-正常組均值/正常組均值≥20%);從肥胖大鼠中篩選出高血壓(收縮壓≥140 mm Hg)即為肥胖性高血壓大鼠。

1.3 血壓的檢測(cè) 采用成都泰盟儀器廠無(wú)創(chuàng)尾動(dòng)脈測(cè)壓系統(tǒng)監(jiān)測(cè)清醒大鼠用藥后不同時(shí)間的收縮壓情況，具體操作如下:監(jiān)測(cè)前10 d于固定時(shí)間段將大鼠置于固定器中預(yù)測(cè)定，以使其適應(yīng)測(cè)量環(huán)境。每隔2 w測(cè)量一次血壓，測(cè)量12 w。連續(xù)5次測(cè)定值相差＜5 mmHg時(shí)認(rèn)定測(cè)壓有效，最終結(jié)果取5次測(cè)定的平均值。

1.4 其余指標(biāo)檢測(cè) 每?jī)芍芊Q重一次，并記錄12 w內(nèi)的體重變化情況。12 w后，3.2%水合氯醛腹腔麻醉大鼠，分離腹主動(dòng)脈，并采集5 ml血樣，靜置分離血清10 min(3 000 r/min)，保留上清液，采用全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)血清甘油三酯和總膽固醇水平，根據(jù)公式計(jì)算:Lee指數(shù) =體重(g)1/3×1 000/體長(zhǎng)(cm);打開(kāi)腹腔等部位，取腹股溝、腹膜后、附睪、腸系膜的脂肪墊稱重并計(jì)算全身脂肪重量，計(jì)算脂肪系數(shù):脂肪系數(shù)=(脂肪質(zhì)量/大鼠質(zhì)量)×100%。

1.5 脂肪Toll樣受體蛋白水平檢測(cè) 采用Western印跡檢測(cè)脂肪TLR2、TLR4的蛋白水平，具體步驟見(jiàn)Zhu等〔7〕的報(bào)道:將脂肪充分剪碎，加入裂解液、離心、提取蛋白并進(jìn)行BCA法蛋白定量，將蛋白樣品與上樣緩沖液混合上樣，進(jìn)行10%SDSPAGE電泳，采用半干轉(zhuǎn)法行轉(zhuǎn)膜操作，分別加TLR2(1∶200)和TLR4(1∶300)的一抗孵育4℃過(guò)夜，二抗(1∶5 000)孵育后行ECL顯色，由Gel-Pro analyzer軟件分析各條帶光密度，最終結(jié)果為與GAPDH的光密度比值。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS16.0軟件包，指標(biāo)均以s表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較為SNK法。

2 結(jié)果

2.1 四組不同時(shí)間點(diǎn)的收縮壓情況 用藥前，模型組、低劑量肉桂組和高劑量肉桂組的收縮壓均高于對(duì)照組(P＜0.05)，且三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);除用藥后2、4 w外，低劑量肉桂組和高劑量肉桂組的收縮壓均低于模型組(P＜0.05)，但仍與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);除2 w外，高劑量肉桂組用藥后的收縮壓均低于低劑量肉桂組(P＜0.05)。見(jiàn)圖1。

2.2 四組不同時(shí)間點(diǎn)的體重情況 用藥前，模型組、低劑量肉桂組和高劑量肉桂組的體重均高于對(duì)照組(P＜0.05)，且三組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05);除用藥后2、4 w外，低劑量肉桂組和高劑量肉桂組的體重均低于模型組(P＜0.05)，但仍與對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05);除2 w外，高劑量肉桂組用藥后的體重均低于低劑量肉桂組(P＜0.05)。見(jiàn)圖2。

2.3 四組大鼠的肥胖相關(guān)指標(biāo)情況 用藥12 w后，模型組的Lee指數(shù)、甘油三酯、總膽固醇和脂肪系數(shù)均高于對(duì)照組(P＜0.05)，但肉桂治療后的以上指標(biāo)均降低，且與模型組有差異;高劑量肉桂組的以上指標(biāo)均低于低劑量肉桂組(P＜0.05)，但兩組仍與對(duì)照組有差異(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

2.4 四組大鼠的脂肪分布情況 用藥12 w后，模型組各部位及全身的脂肪質(zhì)量均高于對(duì)照組(P＜0.05)，但肉桂治療后的以上部位及全身的脂肪質(zhì)量均降低，且與模型組有差異;高劑量肉桂組的脂肪質(zhì)量低于低劑量肉桂組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，但兩組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表2。

2.5 四組大鼠脂肪的Toll樣受體的蛋白水平 用藥12 w后，模型組脂肪的TLR2及TLR4蛋白水平均高于對(duì)照組(P＜0.05)，但肉桂治療后以上兩種蛋白水平均降低，且與模型組有顯著差異(P＜0.05);高劑量肉桂組的蛋白水平低于低劑量肉桂組(P＜0.05)，但兩組仍與對(duì)照組有差異(P＜0.05)。見(jiàn)圖3、表 3。

表1 四組大鼠的肥胖相關(guān)指標(biāo)情況( s，n=10)

表1 四組大鼠的肥胖相關(guān)指標(biāo)情況( s，n=10)

與對(duì)照組比較:1)P＜0.05;與模型組比較:2)P＜0.05;與低劑量肉桂組比較:3)P＜0.05，下表同

組別 Lee指數(shù) 甘油三酯(mmol/L)總膽固醇(mmol/L)脂肪系數(shù)(%)283.27±17.32 2.18±0.32 1.04±0.36 4.09±0.66模型組 324.50±15.841) 3.25±0.771) 1.43±0.231) 4.36±1.381)低劑量肉桂組 307.42±14.181)2) 2.86±0.411)2) 1.29±0.311)2) 4.28±0.721)2)高劑量肉桂組 292.65±13.501)2)3) 2.45±0.851)2)3) 1.16±0.251)2)3) 4.15±0.531)2)3)對(duì)照組

圖1 各組不同時(shí)間點(diǎn)的收縮壓

表2 四組大鼠的脂肪分布情況(g， s，n=10)

表2 四組大鼠的脂肪分布情況(g， s，n=10)

64±0.55模型組 18.72±0.421) 16.35±14.631) 10.71±19.821) 8.71±19.821) 53.71±19.821)低劑量肉桂組 15.26±1.641)2) 14.73±10.171)2) 8.57±11.581)2) 6.57±12.471)2) 44.57±11.581)2)高劑量肉桂組 11.65±2.311)2)3) 10.94±9.681)2)3) 7.36±14.731)2)3) 5.36±13.911)2)3) 33.36±14.731)2)3)組別 腹股溝 腹膜后 附睪 腸系膜 全身對(duì)照組 8.03±0.27 7.47±0.39 5.54±0.15 4.69±0.13 25.

表3 四組大鼠脂肪Toll樣受體的蛋白水平( s，n=10)

表3 四組大鼠脂肪Toll樣受體的蛋白水平( s，n=10)

0.32±5.61 0.2±1.73模型組 0.8±11.341) 0.7±0.831)低劑量肉桂組 0.6±6.261)2) 0.6±1.301)2)高劑量肉桂組 0.5±9.651)2)3) 0.4±1.241)2)3)TLR2 TLR4對(duì)照組組別

圖3 四組脂肪Toll樣受體的Western印跡結(jié)果

3 討論

高血壓和肥胖關(guān)系密切，肥胖本身可增加高血壓的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，而肥胖性高血壓對(duì)機(jī)體的危害強(qiáng)于單純肥胖或高血壓〔8〕。該病的治療效果評(píng)價(jià)除降低體重和脂肪含量外，還應(yīng)包括降血壓。肉桂本身具有改善肥胖的效果，但對(duì)血壓是否有改善作用目前還不清楚。

本研究表明肉桂具有改善肥胖和收縮壓的雙重功效，可能的原因是肥胖本身是高血壓的危險(xiǎn)因素，而降低肥胖性高血壓的體重可改善高血壓癥狀。本研究提示肉桂的改善肥胖性高血壓的癥狀與用藥劑量有關(guān)，可在耐受的情況下，增加藥物的劑量。

Toll樣受體分布廣泛，屬于一大類受體家族，在多種信號(hào)途徑中發(fā)揮重要作用，如免疫應(yīng)答、炎癥反應(yīng)等，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其在肥胖性高血壓的發(fā)病中起著重要作用〔9〕。Toll樣受體存在脂肪細(xì)胞中，且飽和脂肪酸可激活Toll樣受體介導(dǎo)的信號(hào)通路，在調(diào)節(jié)飲食和能量代謝上具有重要作用〔10〕。TLR2和TLR4是Toll樣受體中的主要類型，本研究表明肉桂可降低TLR2和TLR4蛋白水平。Toll樣受體激活，可導(dǎo)致白細(xì)胞介素6和腫瘤壞死因子水平的上調(diào)，繼而增強(qiáng)炎癥反應(yīng)〔11〕，而炎癥反應(yīng)與多種老年性疾病有關(guān)〔12〕。肉桂可能通過(guò)下調(diào)Toll樣受體水平來(lái)改善肥胖性高血壓的肥胖及高血壓癥狀。

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