周曉寧 (廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 廣州 510010)

子宮頸鱗癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的生物學(xué)行為過程涉及多種基因和蛋白表達(dá)的異常。整合素連接激酶(ILK)是新發(fā)現(xiàn)的基因和相關(guān)蛋白產(chǎn)物，參與了生物體內(nèi)多種信號(hào)傳導(dǎo)通路〔1〕。ILK對(duì)調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)的降解有重要作用〔2〕。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-14作為細(xì)胞外基質(zhì)的強(qiáng)效降解劑，可以溶解基底膜，為腫瘤細(xì)胞離開原發(fā)灶形成轉(zhuǎn)移提供了重要前提〔3〕。本實(shí)驗(yàn)關(guān)注老年子宮頸鱗癌術(shù)后組織ILK和MMP-14的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 2008年1月至2011年12月我院行子宮頸鱗癌根治術(shù)的老年患者97例作為觀察組，標(biāo)本均經(jīng)病理醫(yī)師明確診斷并依WHO的原則進(jìn)行分型。年齡60～76(平均66.0)歲，術(shù)前均未進(jìn)行任何放、化療。同時(shí)選取子宮脫垂或子宮肌瘤行子宮全切患者的宮頸組織(病理診斷為慢性宮頸炎)60例作為對(duì)照組，年齡60～74(平均65.3)歲。兩組一般臨床特征差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

1.2 ILK和MMP-14蛋白表達(dá)的檢測(cè) 應(yīng)用ILK和MMP-14抗體的濃縮液(購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)公司)，并按不同配比進(jìn)行稀釋后進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，選擇表達(dá)最理想的稀釋度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)均由病理科主管技師集中操作完成，減少人為誤差，嚴(yán)格質(zhì)量控制。

1.3 免疫組化結(jié)果的判定方法 ILK陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜之上，MMP-14陽性染色定位于細(xì)胞質(zhì)上，以呈棕黃色的染色為陽性細(xì)胞。選擇染色最集中的10個(gè)高倍視野，計(jì)算陽性細(xì)胞占全部計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率，以陽性細(xì)胞數(shù)＞25%為陽性，以陽性細(xì)胞數(shù)≤25%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組ILK和MMP-14蛋白表達(dá)的比較 觀察組ILK和MMP-14表達(dá)陽性率明顯高于對(duì)照組(P＜0.001)，見表1。

2.2 ILK和MMP-14蛋白的表達(dá)與子宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 觀察組ILK和MMP-14的陽性表達(dá)在頸管侵犯、腫瘤最大直徑、FIGO分期及Ki67的表達(dá)中差別顯著(P＜0.01)。見表2。

表1 兩組ILK和MMP-14蛋白陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

表2 ILK和MMP-14蛋白的陰性表達(dá)與子宮頸鱗癌臨床病理特征的關(guān)系〔n(%)〕

2.3 觀察組ILK和MMP-14蛋白表達(dá)的相關(guān)性分析 ILK和MMP-14的表達(dá)具有正相關(guān)性(r=0.49，P=0.035 9)。

3 討論

ILK是一個(gè)具有3個(gè)結(jié)構(gòu)單位的Ser/Thr蛋白激酶，在N端具有4個(gè)錨蛋白重復(fù)序列，接下來是一個(gè)磷酸肌醇結(jié)合序列，而在C端是整合素結(jié)合位點(diǎn)，也是蛋白激酶的結(jié)構(gòu)域〔4，5〕。ILK作為整合素和生長(zhǎng)因子受體信號(hào)傳導(dǎo)通路中的重要效應(yīng)產(chǎn)物，通過介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)控生長(zhǎng)因子整合蛋白介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)及WNT等多條經(jīng)典傳導(dǎo)途徑，有效地調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附、生存、移動(dòng)、運(yùn)動(dòng)和侵襲〔6，7〕。MMP-14是膜型MMPs家族的經(jīng)典成員，不僅降解膠原Ⅲ、膠原Ⅳ的作用強(qiáng)〔8〕，還可以促進(jìn)腫瘤的血管生成、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖。當(dāng)MMP-14被激活后，引起MMP-2和MMP-9等明膠酶活化，可以放大其對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解作用，使腫瘤細(xì)胞容易離開原發(fā)灶，引發(fā)轉(zhuǎn)移〔9〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ILK和MMP-14在子宮頸鱗癌中的表達(dá)明顯高于對(duì)照組，提示ILK和MMP-14對(duì)促進(jìn)老年人子宮頸鱗癌的發(fā)生及癌變有重要價(jià)值。ILK和MMP-14參與腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)及增殖。腫瘤的生長(zhǎng)與血管生成密切相關(guān)，而ILK和MMP-14均具有激活血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的作用，因此促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)可能與血管生成有關(guān)。Ki67是標(biāo)記增殖的最重的蛋白，而ILK和MMP-14均與增殖相關(guān)，提示ILK和MMP-14促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)可能與促進(jìn)增殖有關(guān)。FIGO分期是臨床常用的分期，對(duì)判斷預(yù)后和指導(dǎo)治療有重要幫助，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也間接提示聯(lián)合檢測(cè)ILK和MMP-14的表達(dá)可能是判斷預(yù)后的重要指標(biāo)，二者可能在腫瘤發(fā)生和進(jìn)展過程中具有協(xié)同正向作用，分析認(rèn)為ILK可能是上游蛋白，當(dāng)ILK高表達(dá)時(shí)，引起MMP-14分泌增多。由于惡性腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的先決條件是細(xì)胞外基質(zhì)的降解，而細(xì)胞外基質(zhì)是由膠原、蛋白多糖和基底膜構(gòu)成〔10〕，當(dāng)ILK促進(jìn)MMP-14產(chǎn)生增多時(shí)，引起基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)廣泛溶解，此時(shí)腫瘤細(xì)胞易向周圍組織浸潤(rùn)，同時(shí)易通過血管和淋巴管壁并進(jìn)行播散〔11，12〕。

1 孫曉杰，林 梁，趙 玫，等.ILK與HSP90相互作用對(duì)乳腺癌細(xì)胞遷移影響及其機(jī)制的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(3):161-3.

2 王鳳玲，黃佳濱.ILK和MMP-9在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)〔J〕.中國(guó)誤診學(xué)雜志，2010;10(19):4592.

3 劉愛東，李 青，要瑞莉，等.MMP-14 mRNA在胃腺癌中的表達(dá)及意義〔J〕. 重慶醫(yī)學(xué)，2012;41(5):439-41.

4 Zoppi N，Ritelli M，Salvi A，et al.The FN13 peptide inhibits human tumor cells invasion through the modulation of alpha v beta 3 integrins organization and the inactivation of ILK pathway〔J〕.Biochim Biophys Acta，2007;1773(6):747-63.

5 Sen T，Dutta A，Maity G，et al.Fibronectin induces matrix metalloproteinase-9(MMP-9)in human laryngeal carcinoma cells by involving multiple signaling pathways〔J〕.Bilchimie，2010;92(10):1422-34.

6 余俊隆，溫劍虎.ILK和MMP9在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其意義〔J〕.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2010;35(12):1874-6.

7 劉 騫，趙 玫，趙 平，等.ILK、HSP90相互作用及在胃癌中表達(dá)的研究〔J〕.中國(guó)腫瘤臨床，2005;32(7):365-8.

8 Laudański P，Swiatecka J，Kozlowski L，et al.Increased serum level of membrane type 1-matrix metalloproteinase(MT1-MMP/MMP-14)in patients with breast cancer〔J〕.Folia Histochem Cytobiol，2010;48(1):101-3.

9 Adley BP，Gleason KJ，Yang XJ，et al.Expression of membrane type 1 matrix metalloproteinase(MMP-14)in epithelial ovarian cancer:high level expression in clear cell carcinoma〔J〕.Gynecol Oncol，2009;112(2):319-24.

10 劉愛東，龐久玲，郭紅輝.基質(zhì)金屬蛋白酶-9在胃癌中的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011;20(18):2226-7.

11 沈劉忠，陳 鑫，張愛平，等.整合素相連激酶和基質(zhì)金屬蛋白酶9在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系〔J〕.中國(guó)胸心血管外科臨床雜志，2010;17(6):479-82.

12 Zellweger T，Ninck C，Bloch M，et al.Expression patterns of potential therapeutic targets in prostate cancer〔J〕.Int J Cancer，2005;113(4):619-28.