朱 峰,范 豪,宋雅穎,張 健,李珊珊
1)鄭州大學醫(yī)學系09級六班開拓者創(chuàng)新團隊 鄭州 450052 2)鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科 鄭州 450052
創(chuàng)傷愈合是《病理學》課程中的重要章節(jié),按照常規(guī)教學方法,老師做理論講解后,學生觀看組織學和病理學圖片。學生只在理論上知道創(chuàng)傷愈合的炎癥滲出、組織增生、瘢痕形成三個階段,印象并不深刻。作者探索建立一種簡便易行的創(chuàng)傷愈合大鼠模型,以便學生動態(tài)觀察創(chuàng)傷愈合過程,從而更好地理解理論知識,拓展思路并培養(yǎng)其動手能力。
1.1動物與分組清潔級SD大鼠28只,鄭州大學實驗動物中心提供,雌雄不拘,10~12周齡,體質(zhì)量250~350 g。采用隨機數(shù)字表將實驗動物分為1、3、5、7、14、28 d模型組及正常對照組,每組4只大鼠。
1.2造模方法戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠,置俯臥位,臀背部剃毛約6 cm直徑大小區(qū)域,常規(guī)消毒,鋪一次性無菌巾。模型組大鼠于臀背部脊柱兩側(cè)旁開1 cm處各做長1.5 cm皮膚切口,右側(cè)創(chuàng)口縫合,左側(cè)創(chuàng)口不縫合,創(chuàng)面自然止血,不包扎,不施藥。正常對照組大鼠臀背部脊柱一側(cè)旁開1 cm切開3 cm,分離皮下組織和肌肉,分層進行解剖學組織結(jié)構(gòu)觀察;另一側(cè)臀背部取材1 cm3組織塊。手術(shù)后分籠飼養(yǎng),給予消毒飼料及飲水,注意保持傷口干燥。
1.3觀察方法裸眼觀察各模型組大鼠創(chuàng)口愈合情況。斷頸處死各組大鼠,取創(chuàng)緣及周圍1 cm3組織塊。所有組織塊均石蠟包埋、切片及常規(guī)HE染色,顯微鏡下觀察創(chuàng)傷組織愈合情況及病理組織學改變。
2.1正常大鼠臀背部解剖和組織學結(jié)構(gòu)大鼠背部解剖結(jié)構(gòu)由淺入深依次為:皮膚和皮下組織、淺筋膜、淺層肌肉組織、深筋膜、深層背部肌肉。組織學見皮膚層含有毛囊和附屬器,皮下組織較為疏松,淺筋膜由疏松結(jié)締組織和彈力纖維組成、染色較淺,淺層肌肉為束狀環(huán)形,肌肉下深筋膜組織較厚且致密。深筋膜下為縱行的背部肌肉。
2.2大鼠臀背部創(chuàng)口愈合過程的大體觀察1 d模型組大鼠:縫合創(chuàng)口輕度腫脹,少許滲出物,邊緣對合整齊,無出血和皮下組織外露;未縫合創(chuàng)口紅腫較嚴重,滲出物較多,創(chuàng)口哆開,皮下組織及淺層肌肉外露,創(chuàng)口少許滲血。3 d模型組大鼠:縫合創(chuàng)口腫脹消退,表面干燥,邊緣對合整齊;未縫合創(chuàng)口紅腫減輕,創(chuàng)面趨于干燥,創(chuàng)口邊緣回縮,創(chuàng)口兩側(cè)間距縮小。5 d模型組大鼠:縫合創(chuàng)口表面干燥,邊緣對合整齊;未縫合創(chuàng)口局部紅腫消退,創(chuàng)面干燥,創(chuàng)口邊緣繼續(xù)回縮、兩側(cè)間距進一步變小,滲出物及肉芽組織逐步填平創(chuàng)口。7 d模型組大鼠:縫合創(chuàng)口拆線,留下一淡紅色的線形痕跡;未縫合創(chuàng)口創(chuàng)緣進一步回縮,創(chuàng)口兩側(cè)間距進一步變小。14 d模型組大鼠:縫合創(chuàng)口僅留下一白色線狀瘢痕;未縫合創(chuàng)口留下表面較為粗糙的瘢痕。28 d模型組大鼠:創(chuàng)口均已愈合,看不出造創(chuàng)痕跡。見圖1。
2.3大鼠臀背部創(chuàng)口愈合過程的病理組織學觀察
1 d模型組大鼠:未縫合創(chuàng)口哆開、創(chuàng)緣不整,可見大量中性粒細胞浸潤;縫合創(chuàng)口組織缺損少,創(chuàng)緣較整齊,可見少量炎細胞浸潤。創(chuàng)口邊緣基底細胞增生,向創(chuàng)口中心遷移。3 d模型組大鼠:未縫合創(chuàng)口大量炎性細胞浸潤,創(chuàng)口內(nèi)可見周圍脂肪組織嵌塞;縫合創(chuàng)口創(chuàng)緣整齊,少量炎細胞浸潤;創(chuàng)口邊緣開始長出肉芽組織。5 d模型組大鼠:未縫合創(chuàng)口底部及邊緣長出多量的肉芽組織;縫合創(chuàng)口肉芽組織趨于填滿創(chuàng)口。7 d模型組大鼠:未縫合創(chuàng)口仍有較多炎性細胞浸潤,從創(chuàng)口底部及邊緣長出多量的肉芽組織,創(chuàng)面收縮明顯;縫合創(chuàng)口肉芽組織基本將創(chuàng)口填滿,表皮結(jié)構(gòu)已基本恢復正常。14 d模型組大鼠:未縫合創(chuàng)口炎細胞浸潤減少,創(chuàng)緣可見新生毛細血管減少,纖維成分增多;縫合創(chuàng)口創(chuàng)面已基本消失,膠原纖維平行于皮膚表面,毛囊等附屬器尚未長出,肌層尚未完全修復。28 d模型組大鼠:未縫合創(chuàng)口瘢痕完全形成,瘢痕中膠原纖維與皮膚表面平行,纖維結(jié)締組織仍富于細胞,毛囊等皮膚附屬器未見再生,瘢痕部肌層缺如;縫合創(chuàng)口表皮和真皮的結(jié)構(gòu)均已基本恢復正常,幾乎看不出造創(chuàng)痕跡。見圖2。
圖1 模型組大鼠臀背部創(chuàng)傷愈合的大體觀察
圖2 大鼠臀背部創(chuàng)傷愈合的病理組織學觀察(HE,×10)
3.1大鼠創(chuàng)傷愈合實驗模型作為教學實驗的可行性創(chuàng)傷愈合是《病理學》課程中的重要章節(jié),但本科生教學時間和經(jīng)費有限,因此采用什么實驗動物、使用較少的經(jīng)費、在較短的時間內(nèi)完成創(chuàng)傷愈合實驗需要探索。文獻[1-2]顯示,創(chuàng)傷愈合常用的動物有鼠、兔或豬等,切口常選在動物的背部或腹部,這種模型適合觀察創(chuàng)口愈合過程、全身或局部使用藥物和敷料等對創(chuàng)口愈合的影響[3]。大鼠常用于眼科、婦產(chǎn)科創(chuàng)傷愈合和外科胃腸吻合實驗研究[4-6]。大鼠價格低廉、飼養(yǎng)方便,形體適合進行1~3 cm大小的創(chuàng)傷實驗,并且大鼠性格溫順,觀察方便,創(chuàng)傷愈合過程較快,Ⅰ期愈合在7~14 d可以完整觀察到炎癥滲出、組織增生、組織改建三個創(chuàng)傷愈合的基本過程。所以該研究選用大鼠作為病理學創(chuàng)傷愈合實驗模型動物。
3.2大鼠創(chuàng)傷愈合過程該實驗結(jié)果顯示,大鼠臀背部創(chuàng)傷后,縫合創(chuàng)口和自然愈合創(chuàng)口愈合時間和愈合后局部組織結(jié)構(gòu)明顯不同。
縫合(Ⅰ期愈合)創(chuàng)口:大體觀察創(chuàng)口炎癥反應較輕微,可在5~7 d達到臨床愈合標準;病理組織學顯示炎癥滲出不明顯,3 d開始長出肉芽組織,7 d創(chuàng)口區(qū)基本為肉芽組織填平,14 d已進入組織改建期,28 d組織改建完成,組織結(jié)構(gòu)基本恢復正常。
自然愈合(Ⅱ期愈合)創(chuàng)口:大體觀察創(chuàng)口表面哆開、炎癥反應明顯,炎癥滲出至5 d,5~7 d創(chuàng)口結(jié)痂,14 d創(chuàng)口表面愈合;病理組織學顯示,1~3 d創(chuàng)口內(nèi)大量炎細胞浸潤,5~7 d長出多量肉芽組織,纖維母細胞大量增生,14 d時開始形成瘢痕,28 d創(chuàng)口區(qū)大量瘢痕結(jié)構(gòu)。
創(chuàng)傷愈合過程涉及許多細胞因子的作用[7],也可以通過類似實驗進行觀察研究。該實驗研究顯示:大鼠創(chuàng)傷愈合炎癥滲出、組織增生、組織改建等病理過程可在2周內(nèi)完成。
3.3進行創(chuàng)傷愈合實驗的意義①學會了觀察和愛護實驗動物:如果不細心觀察和愛護動物,動物意外死亡,會影響實驗進程;實驗動物為教學和科研做出貢獻,值得愛護和保護。②通過實驗,學會了麻醉和固定動物,確保實驗順利進行。③學會和懂得了無菌術(shù)的重要性:通過創(chuàng)傷實驗,學會了手術(shù)區(qū)消毒、器械和輔料消毒,操作過程遵守無菌術(shù),才能避免手術(shù)感染,保證實驗的成功。④熟練掌握了切開、分離、止血、縫合、打結(jié)等外科基本手術(shù)技術(shù)。⑤懂得了掌握適當方法的重要性:如實驗開始時使用剪刀和刮刀給大鼠剃毛,費時費工且效果不好,通過詢問有經(jīng)驗的老師,使用剃毛推子,既快又好。⑥學會了病理取材方法,增加了對病理切片制作過程的了解和對病理學應用于臨床的感性認識。⑦增強了思考問題、動手解決問題的能力,學會了許多相關(guān)知識和技能。⑧提高了學習興趣。
總之,希望“大鼠創(chuàng)傷愈合實驗模型”能夠應用到本科病理學教學實踐中,從而提高學生的學習興趣,提高學生的動手能力,提升學生對創(chuàng)傷愈合和病理學的深刻認識。
致謝:衷心感謝眼科實驗室的老師們?yōu)閷嶒炋峁┝藞龅睾推餍?;感謝病理科的老師們?yōu)閷嶒炦M行病理組織學制片;感謝鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科副主任李珊珊教授的指導!
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