白 晶, 李愛軍#, 王麗萍，張 斌, 張 毅

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州 450052 2)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤科 鄭州 450052 3)美國德克薩斯州大學(xué)圣安東尼奧醫(yī)學(xué)中心醫(yī)學(xué)系 圣安東尼奧 77027703 4)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生物細胞治療中心 鄭州 450052

卵巢癌是女性三大惡性腫瘤之一。目前有研究[1]表明細胞黏附分子與腫瘤的發(fā)生相關(guān)。CD44是一種糖蛋白，是細胞黏附分子的成員之一，主要位于細胞表面，它在免疫識別、細胞運動、細胞間黏附、細胞與基質(zhì)間相互作用及淋巴細胞歸巢中均起促進作用，是接受細胞外基質(zhì)糖基化、透明質(zhì)酸化信息的受體。CD24是一種低相對分子質(zhì)量高度糖基化的黏附分子， 介導(dǎo)癌細胞與活化血小板和內(nèi)皮細胞的結(jié)合，可能促進腫瘤細胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展[2-3]。該實驗采用免疫組化方法，觀察CD44和CD24在漿液性卵巢癌組織中的表達情況，并分析二者與卵巢癌各臨床參數(shù)間的關(guān)系，為卵巢癌的診斷和治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本來源30例漿液性卵巢癌標(biāo)本取自鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科2008年1月至2012年1月手術(shù)切除的卵巢癌組織，患者年齡25～73(49.7±13.8)歲；10例正常卵巢組織標(biāo)本取自同期在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科行子宮肌瘤手術(shù)切除的卵巢組織，術(shù)后病理示卵巢組織無病變，患者年齡48～65(52.3±6.8)歲。按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)的病理分期標(biāo)準(zhǔn)[4]將卵巢癌分為4期，其中Ⅰ期6例，Ⅱ期9例，Ⅲ期8例，Ⅳ期7例；組織學(xué)分級[5]G1期(高分化)15例，G2期(中分化)9例，G3期(低分化)6例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者11例；腫瘤直徑≥5 cm者6例，<5 cm者24例；患者年齡>49歲者17例，≤49歲者13例。所有標(biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%中性甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋，6 μm厚切片備用。

1.2 2種卵巢組織中CD44和CD24的檢測采用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司SP-9000免疫組化染色試劑盒和DAB顯色試劑盒進行染色。兔抗人CD44單克隆抗體(ZA-0573，1200稀釋)、鼠抗人CD24單克隆抗體(ZA-0274，1200稀釋)均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。石蠟標(biāo)本常規(guī)脫蠟至水后沖洗，抗原修復(fù),去離子水消除內(nèi)源性過氧化物酶活性，正常山羊血清封閉非特異性結(jié)合位點，滴加一抗和二抗,DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片[6]。用PBS代替一抗作為陰性對照，用已知陽性染色的乳癌組織標(biāo)本作為陽性對照。

1.3結(jié)果判斷以胞膜呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽性，每張切片觀察10個400倍視野，綜合染色強度和陽性細胞所占比例進行判定。染色強度評分標(biāo)準(zhǔn)：不著色0 分，黃色1分，棕黃色2 分，黃褐色3 分。陽性細胞所占比例評分標(biāo)準(zhǔn)[7]：陽性細胞率<5%者0分，5%～者1分，25%～者2分，50%者3分，75%～ 者4分。2種評分相乘，0分為陰性，1～12分為陽性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理采用SPSS 17.0進行統(tǒng)計學(xué)處理,漿液性卵巢癌和正常卵巢組織中CD44及CD24陽性表達率的比較、漿液性卵巢癌組織中CD44、CD24與不同病理特征的關(guān)系均采用Fisher確切概率法，漿液性卵巢癌組織中CD44和CD24的關(guān)聯(lián)性分析采用Pearson列聯(lián)系數(shù)，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié)果

2.1不同卵巢組織中CD44、CD24的表達正常卵巢組織中CD44呈陰性表達；漿液性卵巢癌組織中CD44表達于癌細胞的細胞膜及部分細胞質(zhì)中，呈彌漫棕黃色顆粒。正常卵巢組織中CD24呈陰性表達；與CD44表達部位不同，CD24表達于漿液性卵巢癌組織的細胞膜頂端邊緣部位，呈棕黃色顆粒。見圖1和表1。

2.2漿液性卵巢癌組織中CD44及CD24的表達與臨床病理特征的關(guān)系結(jié)果見表2。

2.3漿液性卵巢癌組織中CD44和CD24表達間的關(guān)系結(jié)果見表3。

圖1 各種卵巢組織中CD44、CD24的表達情況(SP,×400)

表1 正常卵巢和漿液性卵巢癌組織中CD44和CD24的表達 例(%)

表2 漿液性卵巢癌組織中CD44及CD24的表達與臨床病理特征的關(guān)系 例(%)

表3 漿液性卵巢癌組織中 CD44和CD24表達間的關(guān)系 例

rP=0.397,P=0.018。

3 討論

腫瘤的侵襲、轉(zhuǎn)移是一個具有高度組織性和器官選擇性的多因素、多步驟的過程。雖然已知很多因素參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移，但不同組織來源的腫瘤細胞侵襲發(fā)生的機制還不清楚。卵巢癌是婦科常見的三大惡性腫瘤之一，在各年齡段均可發(fā)病，由于卵巢組織成分非常復(fù)雜，是全身原發(fā)腫瘤類型最多的器官，不同組織學(xué)類型的卵巢腫瘤，其生物學(xué)行為存在很大的差異。上皮性卵巢腫瘤是最常見的卵巢腫瘤，其中漿液性卵巢癌占上皮性卵巢癌的75%,患者經(jīng)手術(shù)、化療后，70%的患者經(jīng)過幾個月或幾年又復(fù)發(fā)[8-9]，5 a生存率僅30.6%[10]。 正是由于卵巢癌不易發(fā)現(xiàn)、即使臨床發(fā)現(xiàn)后生存率低且易復(fù)發(fā)的特點，近年來對卵巢癌發(fā)病機制的研究越來越多，研究人員試圖通過各種途徑找到卵巢癌浸潤和轉(zhuǎn)移的機制，以阻斷卵巢癌的進一步發(fā)展，但至今為止其機制仍不十分清楚。

該實驗選擇10例正常卵巢組織及30例漿液性卵巢癌組織，從黏附分子的角度分析CD44和CD24的表達與臨床特征的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)CD44和CD24在漿液性卵巢癌組織中的陽性表達率均高于正常卵巢組織，推測黏附分子CD44和CD24的表達可能參與腫瘤的發(fā)生。漿液性卵巢癌組織中兩者的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、FIGO分期和組織學(xué)分級有關(guān)，而與年齡、腫瘤直徑無關(guān)。病理分期增高，兩者的表達均增加，說明隨病理分期增高，腫瘤細胞與基質(zhì)的黏附性增強，更容易向組織深層浸潤。組織學(xué)分級越高，腫瘤的分化越差，黏附分子CD44與CD24的陽性表達率越高，說明腫瘤細胞分化程度越低，越具有原始細胞的一些特性，越具有侵襲和轉(zhuǎn)移的能力。此外，該研究中CD44 和CD24 在漿液性卵巢癌組織中的表達呈正關(guān)聯(lián)。這提示兩者可能在卵巢癌的發(fā)生發(fā)展及侵襲中起共同的作用，但作用的機制有待于進一步研究。

該研究結(jié)果表明，CD44和CD24在漿液性卵巢癌組織中的表達可能促進了卵巢癌的發(fā)生和發(fā)展，共同檢測CD44和CD24的表達可以為臨床診斷卵巢癌、確定其惡性程度提供依據(jù)。關(guān)于兩者共同作用的機制有待于進一步研究。

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