魏 東 支 政 高 侃 耿 惠 丁 旭 張 冬 方朝義

(河北省辛集市第二醫(yī)院急診科，河北 辛集 052360)

慢性支氣管炎為氣管、支氣管黏膜及其周圍組織的慢性非特異性炎癥，臨床以咳嗽、咯痰或伴有喘息及反復發(fā)作的慢性過程為特征，是一種嚴重危害患者身心健康的常見病、多發(fā)病，屬中醫(yī)學咳嗽、喘證、痰飲、肺脹等范疇。金水寶膠囊具有補腎保肺、秘精益氣之功效，是臨床治療慢性支氣管炎的常選藥物。為研究金水寶膠囊對慢性支氣管炎的作用特點和機制，我們應用金水寶膠囊干預慢性支氣管炎大鼠，并檢測了大鼠內皮素-1(ET-1)、一氧化氮(NO)的含量變化，結果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 健康SD大鼠50只，雌雄各半，體質量(200±20)g，由河北省實驗動物中心提供，動物合格證號：冀醫(yī)動字04057號。飼養(yǎng)于12 h光照/12 h黑暗的環(huán)境中，自由攝食和飲水。室溫控制在18～22 ℃，日照充足，相對濕度維持在60%～70%。

1.1.2 實驗藥物 金水寶膠囊(江西濟民可信金水寶制藥有限公司，國藥準字Z10890003)，實驗時用蒸餾水配制成所需濃度的混懸液；桂龍咳喘寧膠囊(山西桂龍醫(yī)藥有限公司，國藥準字Z20053135)，實驗時用蒸餾水配制成濃度為0.09 g/mL的混懸液。

1.1.3 主要試劑 ET放免藥盒由中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所提供；NO試劑盒由南京建成生物工程研究所提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 將50只SD大鼠隨機分為5組，即空白對照組、模型對照組、金水寶膠囊低劑量組、金水寶膠囊高劑量組和陽性藥對照組，每組各10只。

1.2.2 模型制備 除空白對照組外，其余4組大鼠用1%戊巴比妥鈉50 mg/kg腹腔注射麻醉，仰臥位固定于操作臺，暴露聲門，以靜脈套管針代替氣管導管，拔除針芯，快速插入氣管，將脂多糖(LPS)(美國Sigma公司提供) 200 μg注入氣管內。空白對照組大鼠氣管內滴入0.9%氯化鈉注射液0.5 mL/只。

1.2.3 給藥方法 金水寶膠囊低、高劑量組分別予0.03、0.06 g/mL的金水寶膠囊混懸液，每日1次灌胃，每日用藥劑量為0.3、0.6 g/kg，分別相當于臨床成人用藥量的7、14倍。陽性藥對照組予0.09 g/mL的桂龍咳喘寧膠囊混懸液，每日1次灌胃，每日用藥劑量0.9 g/kg，相當于臨床成人用藥量的14倍?？瞻讓φ战M、模型對照組予0.9%氯化鈉注射液10 mL/kg，每日1次灌胃。5組均于造模結束后第2 d起連續(xù)灌胃給藥21 d。大鼠給藥劑量換算參照文獻[1]。

1.3 樣本制備及指標檢測 灌胃給藥結束后第2 d，斷頭取血，立即以4 ℃ 3 500 r/min離心5 min，分離血漿，并取血清，-20 ℃凍存待檢。肺組織勻漿的制備：將肺組織用冰0.9%氯化鈉注射液沖洗，濾紙吸濕后，稱取濕質量0.3 g左右，加入預冷的0.9%氯化鈉注射液，用電動勻漿器研磨，鏡檢未見完整細胞，制成10%的肺組織勻漿。4 ℃ 6 000 r/min離心5 min，提取上清液，用雙縮脲法測定蛋白含量，-20 ℃凍存待檢。ET-1采用放射免疫法，NO采用硝酸還原酶法。

2 結 果

2.1 各組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量變化 見表1。

表1 各組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量變化 ±s

與空白對照組比較，*P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.01；與金水寶膠囊低劑量組比較，#P<0.05，##P<0.01；與陽性藥對照組比較，◇P<0.05

由表1可見，模型對照組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量均高于空白對照組(P<0.01)，說明造模成功。金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血漿中ET-1含量均高于模型對照組(P<0.01)，金水寶膠囊低劑量組、金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠肺組織中ET-1含量均高于模型對照組(P<0.01)。金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量均低于金水寶膠囊低劑量組(P<0.05，P<0.01)。金水寶膠囊高劑量組大鼠血漿中ET-1含量低于陽性藥對照組(P<0.05)。

2.2 各組大鼠血清、肺組織中NO含量變化 見表2。

表2 各組大鼠血清、肺組織中NO含量變化 ±s

與空白對照組比較，*P<0.01；與模型對照組比較，△P<0.01；與金水寶膠囊高劑量組比較，#P<0.05，##P<0.01

由表2可見，模型對照組大鼠血清、肺組織中NO含量均低于空白對照組(P<0.01)，說明造模成功。金水寶膠囊低劑量組、金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組血清中NO含量均高于模型對照組(P<0.01)，金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組肺組織中NO含量均高于模型對照組(P<0.01)。金水寶膠囊高劑量組血清、肺組織中NO含量均高于金水寶膠囊低劑量組、陽性藥對照組(P<0.05，P<0.01)。

3 討 論

根據(jù)中醫(yī)學對慢性支氣管炎的傳統(tǒng)認識和現(xiàn)代研究成果，我們以具有補腎保肺、秘精益氣功效的金水寶膠囊對慢性支氣管炎大鼠模型進行干預，觀察其對慢性支氣管炎過程中氣道舒縮狀態(tài)的作用機制。我們采用氣管內滴注LPS方法復制大鼠慢性支氣管炎模型，其組織病理學改變與文獻報道相近[2]，符合慢性支氣管炎病理學特征。

ET-1在肺血管收縮、氣道平滑肌痙攣及氣道和肺血管平滑肌增生等病理發(fā)展過程中起重要作用[3]。生理狀態(tài)下，ET-1能被迅速降解，以防止肺支氣管的過度收縮。但在病理狀態(tài)下，ET-1合成釋放過多，既能引起支氣管平滑肌痙攣，又可通過釋放多種炎性介質，促進白細胞黏附和平滑肌的增生引起氣道炎癥。NO是人體血管內皮細胞合成的重要物質之一，具有強大的舒張血管、抑制血管平滑肌細胞增殖及抗血小板凝集、黏附和釋放活性物質的作用，可防止血管痙攣和血栓形成[4]。

本研究結果顯示，采用氣管內滴注LPS復制的慢性支氣管炎大鼠模型，其血漿和肺組織中ET-1含量均較空白對照組明顯升高(P<0.01)，血清和肺組織中NO含量則明顯低于空白對照組(P<0.01)，表明在慢性支氣管炎發(fā)生、發(fā)展過程中，氣道炎癥促使血管內皮細胞和氣道上皮細胞釋放ET-1，ET-1過多合成，又進一步加重了氣道的炎癥反應和組織損傷。慢性支氣管炎狀態(tài)下，由于組織缺血缺氧，ET引起肺及周圍血管強烈收縮，增加心臟負荷，此為血管活性藥物的臨床應用提供了理論依據(jù)。

在慢性支氣管炎時，細支氣管及肺組織周圍有大量以淋巴細胞為主的慢性炎性細胞浸潤，并引起血管內皮細胞破壞，從而使NO生成減少，消耗增加，致使ET-1和NO比例嚴重失調。

經(jīng)用藥干預，金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血漿、肺組織中ET-1含量均低于模型對照組(P<0.01)，金水寶膠囊高劑量組血漿中ET-1含量明顯低于陽性藥對照組(P<0.05)，說明金水寶膠囊高劑量組尤其是對血漿中ET-1的釋放有抑制作用。金水寶膠囊高、低劑量之間具有良好的量效關系。金水寶膠囊高劑量組、陽性藥對照組大鼠血清、肺組織中NO含量均高于模型對照組(P<0.01)，提示金水寶膠囊、桂龍咳喘寧膠囊均能提高大鼠血清、肺組織中NO的活性，金水寶膠囊高劑量組的作用更加明顯(P<0.05，P<0.01)。

金水寶膠囊可以有效抑制ET-1的產(chǎn)生，顯著提高NO活性，從而恢復肺血管、支氣管平滑肌正常舒縮狀態(tài)，控制肺臟慢性炎癥。

[1] 藥理實驗基礎知識系列之一：給藥劑量換算[EB/OL].http：//wenku.baidu.com/view/c1444b6b1eb91a37f1115c08.html.

[2] 李文杰.肺心平對肺心病肺動脈高壓大鼠ET和NO的影響[J].遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(5)：348-349.

[3] 陳玲，羅文侗.慢性阻塞性肺病血漿內皮素-1含量的動態(tài)變化[J].中華內科雜志，1996，35(1)：51-52.

[4] 趙黎明，李兵，修清玉，等.持續(xù)氣道正壓通氣對阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征小型豬血漿NO、ET濃度及心肌結構的影響[J].第二軍醫(yī)大學學報，2009，30(6)：680-683.

[5] Barnes PJ，Belvisi MG.Nitric oxide and lung disease[J].Thorax，1993，48(10)：1034-1043.