李 洪 張 靜 高玉梅 姚東云 王 剛

(河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系中藥制藥教研室，河北 石家莊 050026)

冠心2號(hào)粉針為河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系研發(fā)自制中藥注射劑，主要由紅花、赤芍藥、丹參、川芎、降香5味中藥構(gòu)成，具有活血止痛、化瘀行氣的功效。紅花是方中主要中藥，其主要有效成分為羥基紅花黃色素A[1]，能夠有效改善患者心肌供血、降低血小板凝聚、預(yù)防血栓形成等[2]。本研究通過以羥基紅花黃色素A為觀察指標(biāo)，采用高效液相色譜(HPLC)法，觀察不同提取時(shí)間、提取次數(shù)、溶劑用量及提取溶劑的濃度對冠心2號(hào)粉針中羥基紅花黃色素A提取的影響[3]，選取最佳提取工藝，為冠心2號(hào)粉針的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 高效液相色譜儀Agilent 1100(美國安捷倫科技有限公司)；CX-250型超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)；電熱恒溫水浴鍋(天津中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司)；賽多利斯BS210S電子天平(北京賽多利斯天平有限公司)；乙醇濃度檢測儀(河北省河間市宏利儀表廠)；冠心2號(hào)粉針(河北化工醫(yī)藥職業(yè)技術(shù)學(xué)院制藥工程系研發(fā)自制，藥物組成：紅花、赤芍藥、丹參、川芎、降香，中藥材均購自安國光明中藥飲片廠)；乙腈、甲醇為色譜純，其余為分析純；水為屈臣氏蒸餾水；羥基紅花黃色素A(中國藥品生物制品檢定所，111637-200901)。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-0.7%磷酸水溶液(26∶2∶72)；檢測波長：403 nm；流速：1.2 mL/min。

1.2.2 觀察因素選取 紅花中主要活性成分羥基紅花黃色素A易溶于乙醇[4]，因此確定乙醇為提取溶劑，以提取時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇用量(相對于藥材質(zhì)量)及乙醇濃度為考察因素，每個(gè)因素設(shè)定3個(gè)水平層次(見表1)，采用4因素3水平9次[L9(34)]正交試驗(yàn)進(jìn)行研究測定。

表1 相關(guān)因素的3個(gè)水平層次劃分表

1.2.3 供試品溶液制備 按處方比例分別稱取5種中藥材，放入具塞錐形瓶中，精密稱質(zhì)量，分別用規(guī)定濃度的乙醇按照正交設(shè)計(jì)進(jìn)行超聲提取9次，放涼，再用同等濃度乙醇補(bǔ)足質(zhì)量，定容，稱質(zhì)量，合并提取液，用0.45 μm的微孔濾膜過濾，備用。

1.2.4 對照品溶液制備 取羥基紅花黃色素A對照品3.822 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加入25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上液1.0 mL置25 mL量瓶中，加入25%甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。

1.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取對照品溶液1、2、4、6、8 μL分別注入高效液相色譜儀，按1.2.1項(xiàng)色譜條件下記錄色譜圖，測定峰面值。以羥基紅花黃色素A峰面積值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，做線性回歸，得回歸方程：Y=61 392X-15 816，R=0.999 9。結(jié)果表明，羥基紅花黃色素A對照品在0.072～0.395 μg的范圍內(nèi)進(jìn)樣量和峰面積與峰面積呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

1.2.6 樣品測定 精密吸取供試品溶液15 μL，注入高效液相色譜儀，按1.2.1項(xiàng)色譜條件下記錄色譜圖，測定其峰面積值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算羥基紅花黃色素A含量，并根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，列出方差分析表。

2 結(jié)果及分析

2.1 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析結(jié)果 見表2、表3。

表2 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

F0.05(2,2)= 19.00；F0.01(2,2)= 99.00

由表2、表3可見，以羥基紅花黃色素A為指標(biāo)，對冠心2號(hào)凍干粉針中紅花提取工藝因素影響大小是：A> B> D> C，A因素對提取工藝影響最大，即提取時(shí)間。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，冠心2號(hào)凍干粉針劑中羥基紅花黃色素A的提取工藝最佳條件：A2B2C3D3，即采用10倍藥材量的75%乙醇，提取2次，每次45 min。

2.2 工藝驗(yàn)證 取紅花適量，按照最佳工藝條件確定的提取時(shí)間、提取次數(shù)、乙醇用量及濃度，平行試驗(yàn)測定3組 見表4。

表4 工藝驗(yàn)證

由表4可見，本方法檢驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可靠。

3 討 論

本研究選取羥基紅花黃色素A為測定冠心2號(hào)凍干粉針中紅花的觀測指標(biāo)，采用HPLC法檢測，以乙醇為提取試劑。取適量羥基紅花黃色素A對照品，加乙醇制成溶液，用紫外分光光度計(jì)掃描，結(jié)果在405 nm處有最大吸收，參考2010年版《中華人民共和國藥典》，確定檢測波長是403 nm。經(jīng)L9(34)正交試驗(yàn)得出影響冠心2號(hào)凍干粉針中紅花提取工藝的因素：提取時(shí)間>提取次數(shù)>乙醇用量>乙醇濃度，提取時(shí)間因素對提取工藝影響最大。冠心2號(hào)凍干粉針劑最佳提取工藝條件為：用10倍藥材量75%乙醇，提取2次，每次45 min。本方法簡便易行，準(zhǔn)確可靠，可用于冠心2號(hào)凍干粉針的質(zhì)量控制與檢測。

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：141.

[2] 蘇慧，劉萍，溫薇，等.紅花黃色素凍干粉針對大鼠體內(nèi)體外血栓形成的影響[J].中醫(yī)藥信息，2012，29(6)：29-30.

[3] 牛麗紅，劉軍凱，劉偉.紅花黃色素的提取與純化工藝研究[J].中成藥，2010，32(7)：1230-1232.

[4] 劉慶華，陳孝娟，于萍，等.紅花紅色素的提取工藝研究[J].新疆醫(yī)學(xué)，2011，41(5)：133-136.