馬凱慧，王毓洪，嚴(yán)蕾艷，應(yīng)泉盛，王迎兒，張華峰

（浙江寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，315040）

黃瓜綠斑駁花葉病毒（cucumber green mottle mosaic virus，CGMMV）是煙草花葉病毒屬葫蘆科的重要病毒之一[1]，是一種典型的種傳病毒，為害十分嚴(yán)重。該病毒所有的株系都極其穩(wěn)定[2]，典型的CGMMV病毒株系的致死溫度為90～100℃；體外保毒期長達(dá)119 d[3]。

應(yīng)用干熱處理方法能安全有效地對葫蘆科、茄果類、十字花科等作物種子進(jìn)行消毒[4]。鑒于不同作物的生物學(xué)特性有所差異，對種子進(jìn)行干熱處理時(shí)，適宜的溫度和時(shí)間也不盡相同。已有研究報(bào)道，用于殺滅種子帶菌的干熱處理一般為70～75℃處理3～5 d[5]。本試驗(yàn)以葫蘆種子為試驗(yàn)材料，通過不同條件的干熱處理后，檢測并分析種子帶毒情況和發(fā)芽率，進(jìn)而篩選出葫蘆種子干熱處理的最適條件。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試葫蘆品種為夜開花，種子采自農(nóng)戶發(fā)病田內(nèi)植株。

1.2 試驗(yàn)設(shè)備

恒溫恒濕干熱處理器，恒溫箱。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)共設(shè)6個(gè)處理，3次重復(fù)，每次重復(fù)種子數(shù)為1000粒。處理?xiàng)l件：第一階段設(shè)置溫度35℃，處理24 h；第二階段設(shè)置溫度 50℃，處理24 h；第三階段設(shè)置溫度分別為65，70，72，75，80，85℃，處理72 h。最后冷卻24 h。

處理后的試驗(yàn)種子保存1周，然后催芽，1周后統(tǒng)計(jì)發(fā)芽率。取100粒出芽種子播種，控制適宜溫濕度和光照，待葫蘆苗長出真葉后，取樣，用ELISA檢測法檢測葫蘆真葉病毒情況。

2 結(jié)果與分析

由表1可見，不同的處理?xiàng)l件下，葫蘆種子發(fā)芽率有差異，當(dāng)干熱處理溫度為35-50-65℃、35-50-70℃和35-50-72℃時(shí)，葫蘆種子發(fā)芽率較高。之后隨著溫度的升高，葫蘆種子發(fā)芽率明顯降低，溫度越高，發(fā)芽率越低。所以，65，70，72℃都可能是較適宜的干熱處理溫度。但對于病毒本身來說，溫度越高，殺毒越有利，種子的帶毒性越小。所以，結(jié)合發(fā)芽率和殺毒條件，72℃為葫蘆種子干熱處理的最佳條件。

將在35-50-72℃條件下進(jìn)行干熱處理后的種子放置一周，讓種子適當(dāng)?shù)幕謴?fù)水分之后，進(jìn)行催芽和播種，取葫蘆苗的真葉進(jìn)行病毒檢測。

根據(jù)表2結(jié)果，葫蘆種子病毒檢測結(jié)果由干熱處理前的陽性變?yōu)楦蔁崽幚砗蟮年幮?，即處理后未檢測到病毒。這證明葫蘆真葉不帶毒，35-50-72℃條件的干熱處理對種子殺毒效果好。

3 討論與小結(jié)

對于黃瓜綠斑駁花葉病毒，干熱處理溫度越高，殺毒效果越好。有報(bào)道稱，在干熱處理過程中75℃處理72 h可以使病毒完全失活，85℃處理24 h也可以得到同樣的效果[6]。但是干熱處理的溫度條件對種子發(fā)芽率的影響較大[7]，處理溫度過高會(huì)對種子造成較嚴(yán)重的傷害，進(jìn)而影響發(fā)芽率，所以試驗(yàn)設(shè)置了 65，80，72，75，80，85℃ 6 個(gè)溫度條件。通過試驗(yàn)可知，葫蘆種子在65℃、70℃和72℃時(shí)受干熱處理的損傷程度都較小，發(fā)芽率符合要求，即干熱處理對種子發(fā)芽率的影響較?。唤Y(jié)合干熱處理對葫蘆種子黃瓜綠斑駁花葉病毒的殺毒效果，在72℃時(shí)可以有效殺滅病毒。所以，選擇35-50-72℃作為葫蘆種子干熱處理的最適溫度條件。

表1 染病葫蘆干熱處理后的發(fā)芽率

表2 病毒檢測結(jié)果

[1]張永江.黃瓜綠斑駁花葉病毒研究進(jìn)展[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006（8）：9-12.

[2]馮蘭香，謝丙炎，楊宇紅，等.檢疫性黃瓜綠斑駁花葉病毒的檢測和防疫控制[J].中國蔬菜，2007（9）：34-38.

[3]吳鑫，丁元明，何月秋，等.檢疫有害生物——黃瓜綠斑駁花葉病毒[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，16（2）：87-89.

[4]宋順華，鄭曉鷹.干熱滅菌處理技術(shù)——一種防治種傳病害的有效方法[J].蔬菜，2008（10）:41.

[5]李瑞云，楊琳，常華，等.不同溫度干熱處理對幾種蔬菜種子萌發(fā)的影響[J].中國蔬菜，2011（16）：61-71.

[6]蔡明，江冬，張麗英，等.黃瓜綠斑駁花葉病毒種子處理試驗(yàn)研究[J].植物檢疫，2011，25（1）：62-63.

[7]Kim S M，Nam S H,Lee J M,et al.Destruction of cucumber green mottle mosaic virus by heat treatment and rapid detection of virus inactivation by RT-PCR[J].Molecules and Cells,2003,16(2):338-342.