天津市南開醫(yī)院（300100）張柏順

附表1 正交試驗因素水平表

附表2 正交試驗結(jié)果及統(tǒng)計（相當(dāng)于生藥mg/g）

附表3 4因素間主次關(guān)系分析表[F（2，2）0.05=19.00]

附表4 綿茵陳提取驗證表（相當(dāng)于生藥mg/g）

綿茵陳為菊科植物濱蒿Artemisia scoparia Waldst. et Kit. 或茵陳蒿Artemisiacapillaris Thunb.的干燥幼苗地上部分，春季幼苗高6～10cm時采收。臨床上具有清熱利濕，利膽退黃功效。常用于黃疸尿少，濕溫暑濕，濕瘡瘙癢。幼苗期主要成分為綠原酸，但還含有少量6，7-二甲氧基香豆素、茵陳色元酮等?，F(xiàn)代藥理研究表明，綠原酸具有利膽、保肝、抗菌、消炎、抑制脂質(zhì)過氧化物對肝細(xì)胞的破壞等作用[1]。

1 儀器與材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC-IOATVP）；紫外檢測器（島津SPD-10AVP）；水浴鍋；色譜柱：奧泰Apollo C18；十萬分之一電子天平（Sartorius analytic BP211D）。

1.2 材料 綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-201013）；色譜純：乙腈；分析純：重蒸餾水、磷酸；茵陳藥材（產(chǎn)地：河北）。

2 方法與結(jié)果

2.1 正交試驗設(shè)計 綿茵陳中主要成分綠原酸，可溶于常用的有機溶劑或水中，經(jīng)預(yù)實驗比較并考慮到其他成分，故筆者對綿茵陳采用乙醇進(jìn)行提取。對醇提取工藝條件進(jìn)行正交篩選試驗，篩選條件包括醇濃度、加醇量、提取時間、提取次數(shù)，以綠原酸含量為測定指標(biāo)采用L9（34）正交試驗表，見附表1。

2.2 色譜條件 奧泰Apollo C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為乙腈-0.0 5%磷酸水溶液（10∶90）；流速1.0mL/min；檢測波長327nm；柱溫35℃；進(jìn)樣量20μL。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品10.34mg，置于棕色容量瓶中，加50%甲醇定容至50mL容量瓶中并稀釋到刻度，搖勻。進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制，得回歸方程綠原酸y=1.89577×106x+47960.1，r=0.9998。試驗結(jié)果表明，綠原酸在0.2068～3.102μg間具有良好的線性關(guān)系。

2.4 實驗樣品制備方法 據(jù)正交設(shè)計附表1試驗，精密稱取綿茵陳約5g，加入圓底燒瓶，按試驗號對應(yīng)的條件試驗，水浴溫度80℃，回流提取，過濾，提取液合并，測定體積，配制供試樣品液。

2.5 含量測定方法 HPLC測定用樣品的制備：精密吸取提取液4mL，加入25mL容量瓶，用相應(yīng)甲醇稀釋定容至25mL，過0.45μm微孔濾膜。按綠原酸色譜條件測定，進(jìn)樣20μL，結(jié)果見附表2。對附表2中的試驗結(jié)果進(jìn)行直觀分析顯示，4個因素間主次關(guān)系為D＞A＞B＞C，對上述試驗結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見附表3。提取次數(shù)有顯著性差異，而其余三者無顯著性差異，考慮實際生產(chǎn)中的因素，決定選用A3B3C1D3工藝條件，即加10倍量60%乙醇，提取3次，40min/次。

2.6 驗證試驗 用同一批藥材，分別按A3B3C1D3工藝條件進(jìn)行3次試驗，結(jié)果顯示驗證結(jié)果與試驗結(jié)果基本一致，見附表4。

3 小結(jié)與討論

同批次綿茵陳藥材中綠原酸含量為8.104mg/g生藥，驗證結(jié)果的轉(zhuǎn)移率可達(dá)98%，說明該篩選結(jié)果可滿足提取工藝。