托婭 張軍力

Brewerton等[1]于1973年首次發(fā)現(xiàn)人類白細(xì)胞抗原 B27（human leukocyte antigen-B27，HLA-B27）與強(qiáng)直性脊柱炎（ankylosing spondylitis，AS）之間存在密切關(guān)聯(lián)，此后的研究表明HLA-B27與銀屑病性關(guān)節(jié)炎、Reiter綜合征、前眼色素層炎和潰瘍性結(jié)腸炎等也存在不同程度的相關(guān)性[2]。由于AS臨床癥狀與許多疾病相似而難以確診，因此HLA-B27的檢測(cè)已成為臨床診斷和鑒別診斷AS的重要指標(biāo)[3]。近年來(lái)隨著流式細(xì)胞儀（flow cytometer，F(xiàn)CM）在臨床上應(yīng)用的日益廣泛，F(xiàn)CM以其強(qiáng)大、精確細(xì)胞分析能力，被認(rèn)為是當(dāng)前分析HLA-B27的最好方法之一[4]。

研究證實(shí)HLA-B27不是單一抗原，而是由多種等位基因所控制的亞型構(gòu)成，且存在人種和地區(qū)差異，并且同一亞型在不同地區(qū)與AS的易感性也可能不同，因此環(huán)境因素的作用也不容忽視[5]。因此，了解當(dāng)?shù)夭煌詣e和年齡AS患者中HLA-B27抗原表達(dá)情況有助于臨床早期診斷，同時(shí)減少誤診和漏診率。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)998例我院疑似AS患者T淋巴細(xì)胞HLA-B27抗原表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病史資料，以分析HLA-B27抗原和其平均熒光強(qiáng)度（mean fluorescence intensity，MFI）在疑似AS 患者中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

998例疑似AS患者為2012年1月～2012年12月內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院門診、急診及住院患者。其中男581例，女417例，年齡5～67歲，平均（32.1±11.2）歲。

1.2 主要儀器與試劑

美國(guó)BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀；BD HLA-B27 kit（HLA-B27 FITC/CD3 PE）為美國(guó)BD公司產(chǎn)品。

1.3 HLA-B27檢測(cè)及結(jié)果判斷

EDTA抗凝真空管采集外周血2 mL，應(yīng)用美國(guó)BD公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀和HLA-B27專用分析軟件，對(duì)998例疑似患者外周血T淋巴細(xì)胞HLA-B27抗原表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)分析。操作步驟為：取20μL試劑A加入到流式專用上樣管底部，加入100μL充分混勻的新鮮抗凝全血，低速振蕩混勻，室溫下避光靜置15～20 min；每管加入2 mL 1×濃度的溶血素，低速振蕩混勻，室溫下避光靜置8～10 min；1 500 r/min離心5 min，棄上清液，加入2 mL生理鹽水洗1次；1 500 r/min離心5 min，棄上清，加0.5 mL生理鹽水，24 h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)。每個(gè)樣品采集的細(xì)胞數(shù)不少于20 000個(gè)，以CD3（T淋巴細(xì)胞）設(shè)門并檢測(cè)其HLA-B27的MFI，大于本批HLA-B27試劑盒設(shè)定界值147者為陽(yáng)性，否則報(bào)告為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。就診年齡和HLA-B27的MFI用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示；HLA-B27陽(yáng)性率采用百分率表示。將各組就診年齡和HLA-B27的MFI比較分別采用配對(duì)u檢驗(yàn)，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各組HLA-B27陽(yáng)性率比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同性別疑似AS患者HLA-B27表達(dá)情況

臨床就診的男性疑似AS患者明顯多于女性，男女比例為1.4︰1；同時(shí)男性的平均就診年齡比女性患者低約5歲（P＜0.01）；二者的HLA-B27陽(yáng)性率比較，男性明顯高于女性（P＜0.05），男性患者 MFI＞160的比率明顯高于女性（P＜0.05），見表1。

表1 998例男女疑似AS患者的就診年齡和HLA-B27表達(dá)情況 [n（%）±s]Table 1 The age and expression of HLA-B27 of 998 cases of male and female patients who are suspected as AS [n(%),±s]

表1 998例男女疑似AS患者的就診年齡和HLA-B27表達(dá)情況 [n（%）±s]Table 1 The age and expression of HLA-B27 of 998 cases of male and female patients who are suspected as AS [n(%),±s]

性別 n 就診年齡（歲）HLA-B27陽(yáng)性頻率MFI值＞160男性 581 30.4±10.7 192（33.05%） 149（77.60%）女性 417 35.4±12.1 96（23.02%） 63（65.62%）合計(jì) 998 32.1±11.2 288（28.86%） 212（73.61%）

2.2 不同就診年齡段疑似AS患者HLA-B27表達(dá)情況

AS患者發(fā)病主要集中在21～50歲的青壯年人群（合計(jì)達(dá)77.35%）；各年齡段的HLA-B27陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 2。

表2 不同就診年齡段AS患者HLA-B27表達(dá)情況統(tǒng)計(jì) n（%）Table2 The statistic of different ages AS patients who express different level of HLA-B27 n(%)

3 討論

HLA是人體內(nèi)最為復(fù)雜的遺傳多態(tài)性系統(tǒng)，主要功能是參與抗原的處理與呈遞，參與免疫應(yīng)答的遺傳控制及T細(xì)胞的活化，在免疫調(diào)節(jié)中起重要的作用。AS是一種慢性、進(jìn)行性中軸關(guān)節(jié)受累的關(guān)節(jié)病變。研究顯示強(qiáng)直性脊柱炎病人 HLA-B27陽(yáng)性率高達(dá) 90%左右，正常人群中HLA-B27陽(yáng)性率僅為8%。而HLA-B27陽(yáng)性者強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病率可達(dá)15%～20%，普通人群中發(fā)病率僅為0.1%～0.2%，強(qiáng)直性脊柱炎患者一級(jí)親屬中患者與本病的可能性是一般人群的20～30倍，HLA-B27陽(yáng)性患者患強(qiáng)直性脊柱炎的概率是陰性患者的200～300倍。這些均說(shuō)明HLA-B27在強(qiáng)直性脊柱炎發(fā)病中是個(gè)非常重要的因素[6]。

由于強(qiáng)直性脊柱炎主要是累及脊柱、骶髂關(guān)節(jié)和周圍大關(guān)節(jié), 使脊柱、骶髂關(guān)節(jié)及髖關(guān)節(jié)等周圍大關(guān)節(jié)的結(jié)締組織發(fā)生炎癥變性, 其致殘率較高, 因此早期診斷就顯得尤為重要。而強(qiáng)直性脊柱炎又是一種慢性疾病, 其病程往往長(zhǎng)達(dá)10年、20年，骶髂關(guān)節(jié)骨質(zhì)沒(méi)有發(fā)生病變時(shí)X線片很難診斷，因此HLA-B27在強(qiáng)直性脊柱炎的診斷中具有很高的價(jià)值[7]。

與微量細(xì)胞毒法和PCR檢測(cè)方法比較，流式細(xì)胞儀檢測(cè)HLA-B27的表達(dá)無(wú)須分離淋巴細(xì)胞，且操作簡(jiǎn)單，其檢測(cè)靈敏度可達(dá)100%，特異性為97.4%，不同儀器型號(hào)及實(shí)驗(yàn)室之間的檢測(cè)重復(fù)性高，已成為國(guó)際上通用的最佳方法[8]。群體研究表明，AS患者在不同人群和種族中都與HLA-B27存在相關(guān)性，且AS的群體發(fā)病率與人群的HLA-B27陽(yáng)性率呈正相關(guān)，中國(guó)人群的HLA-B27陽(yáng)性率約為8%，AS發(fā)病率為0.3%，男女比例2～6︰1[9]。內(nèi)蒙古地區(qū)還沒(méi)有相關(guān)的研究報(bào)道。由于AS主要侵害青壯年人群，這對(duì)本地區(qū)勞動(dòng)力資源的危害很大。因此，對(duì)本地區(qū)疑似AS患者進(jìn)行HLA-B27檢測(cè)可為臨床診斷、鑒別診斷和針對(duì)性的治療提供強(qiáng)有力的依據(jù)，且對(duì)AS的預(yù)防亦有積極的意義。

3.1 998例AS疑似患者檢測(cè)結(jié)果分析

表1結(jié)果顯示，男女比例為1.4︰1,說(shuō)明內(nèi)蒙古地區(qū)疑似AS患者有明顯的性別差異，與文獻(xiàn)報(bào)道一致[10]。從就診年齡平均值比較，男性患者比女性低5歲（P＜0.01），提示男性患者發(fā)病較早，病程進(jìn)展較快。從統(tǒng)計(jì)的就診年齡分析（表2），21～50歲青壯年為主，占77.35%，＜20歲占10.92%，＞50歲占11.73%。因此，對(duì)于年齡處在高發(fā)階段者，凡具有相應(yīng)的臨床癥狀，不論男女都應(yīng)高度重視。

3.2 HLA-B27抗原表達(dá)強(qiáng)度的臨床價(jià)值探討

目前對(duì)于檢測(cè)HLA-B27抗原表達(dá)強(qiáng)度是否有臨床價(jià)值的爭(zhēng)議較大。本研究通過(guò)分析HLA-B27陽(yáng)性的疑似AS患者HLA-B27 MFI結(jié)果顯示：（1）表1結(jié)果顯示男性患者M(jìn)FI＞160的比率明顯高于女性（P＜0.05），可能與男性患者發(fā)病較早，病程進(jìn)展較快有關(guān)。（2）998例疑似AS患者外周血T淋巴細(xì)胞HLA-B27抗原陽(yáng)性率28.86%，明顯高于中國(guó)人群的HLA-B27陽(yáng)性率8%，可能由于研究樣本都為臨床有疑似AS的相關(guān)癥狀人群。與我院風(fēng)濕免疫科醫(yī)生溝通，反映HLA-B27陽(yáng)性與AS診斷符合性接近100%。HLA-B27抗原表達(dá)強(qiáng)度與AS患者的病情嚴(yán)重程度和進(jìn)展的關(guān)系尚需做進(jìn)一步研究。

研究表明，除AS與HLA-B27存在密切關(guān)聯(lián)外，其它一些疾病與HLA-B27抗原的表達(dá)也有著或多或少的相關(guān)性。譬如，Reiter綜合癥的HLA-B27陽(yáng)性率為70%～90%，銀屑病性關(guān)節(jié)炎的HLA-B27陽(yáng)性率為50%～60%，葡萄膜炎的HLA-B27陽(yáng)性率為40%～50%，潰瘍性結(jié)腸炎伴有關(guān)節(jié)病的HLA-B27陽(yáng)性率為5%～10%等，故而可將此類疾病統(tǒng)稱為“B27疾病”[11]。

雖然HLA-B27與AS高度相關(guān)，但因HLA-B27陽(yáng)性群體中僅有不到5%的個(gè)體最終發(fā)展成AS，故不能將HLA-B27檢測(cè)作為隨機(jī)人群AS的篩選指標(biāo)[12]。只有在受檢者臨床癥狀、體癥及X線檢查疑為AS時(shí)，HLA-B27檢測(cè)為陽(yáng)性則可明顯支持AS的臨床診斷。由于AS具有較強(qiáng)的家族遺傳傾向，其親屬中發(fā)病率比一般人高出近20～30倍，因此，應(yīng)當(dāng)對(duì)AS患者一級(jí)親屬做HLA-B27抗原檢測(cè)，這對(duì)AS早期診斷、延緩發(fā)病乃至預(yù)防發(fā)病均有重要意義。

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