林宇星

福建省立醫(yī)院藥學(xué)部，福建 福州 350001

實(shí)驗(yàn)性子宮肌瘤模型的建立及姜黃素的干預(yù)

林宇星

福建省立醫(yī)院藥學(xué)部，福建 福州 350001

目的：研究姜黃素對(duì)子宮肌瘤大鼠的影響及作用機(jī)制。方法：采用雌二醇及孕酮誘導(dǎo)雌性W istar大鼠子宮肌瘤模型，進(jìn)行20周的藥物干預(yù)，觀察大鼠血的生化指標(biāo)、雌二醇、孕酮及子宮病理變化。結(jié)果：姜黃素與米非司酮均能降低W istar大鼠子宮系數(shù)、宮頸直徑及宮體直徑，減輕子宮病理?yè)p害。姜黃素能降低血清中雌二醇和孕酮的含量。結(jié)論：姜黃素能改善大鼠子宮肌瘤病變，其作用機(jī)制可能與降低血漿雌二醇和孕酮有關(guān)。

實(shí)驗(yàn)性子宮肌瘤；姜黃素；干預(yù)

姜黃是姜科植物姜黃Curcuma longa L.的干燥根莖，臨床用于治療乳腺癥、子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥等婦科疾患，取得很好的治療效果［1，2］，本研究通過(guò)在實(shí)驗(yàn)性高雌、孕激素大鼠模型［3］上觀察姜黃的最主要有效成分姜黃素對(duì)大鼠子宮體指標(biāo)、子宮肌瘤病理學(xué)、雌、孕激素水平的影響，探討姜黃對(duì)子宮肌瘤大鼠的保護(hù)作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料及方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料 清潔級(jí)雌性Wistar大鼠，體重150～180g，由福建省立醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供；苯甲酸雌二醇（國(guó)藥準(zhǔn)字H12020530，1m l：5mg）天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)，批號(hào)1203251；孕酮（國(guó)藥準(zhǔn)字H11022340，1m l：20mg），山西晉新雙鶴藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)201206161；市售花生油，高壓滅菌備用。米非司酮片（國(guó)藥準(zhǔn)字H20083780，20mg），湖北葛店人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào)201207113。姜黃素，西安和霖生物技術(shù)有限公司，99%純度。雌二醇（E2酶聯(lián)免疫試劑盒購(gòu)自上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；孕酮 （Pg）檢測(cè)試劑盒 （酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法）購(gòu)自北京樂(lè)博生物科技有限公司。

1.2 動(dòng)物分組及模型建立 60只清潔級(jí)雌性Wistar大鼠，隨機(jī)分為正常對(duì)照組、子宮肌瘤模型組、米非司酮對(duì)照組和姜黃素高、中、低治療組，每組10只動(dòng)物。子宮肌瘤模型組、米非司酮對(duì)照組和姜黃素治療組每周隔日肌肉注射苯甲酸雌二醇0.2mg／d，共20周。第14周起每周肌肉注射孕酮1次0.7mg／d，共7周。正常對(duì)照組每周隔日肌肉注射高壓滅菌花生油0.2ml，共20周。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 治療組第11周起分別給予姜黃素10、20、40mg／kg灌胃；米非司酮對(duì)照組第11周起給予米非司酮3mg／kg灌胃，正常對(duì)照組和子宮肌瘤模型組給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)10周。用藥第10周末，大鼠稱重后給予腹腔注射30mg／kg戊巴比妥鈉，頸正中切口，頸動(dòng)脈取血，2000r／min離心10min，取上清，－20℃保存，用于雌二醇和孕酮檢測(cè)。取出子宮，稱重，計(jì)算子宮系數(shù)。測(cè)量宮頸和宮體處的最大直徑。用10%中性福爾馬林固定子宮組織，石蠟包埋、切片后，行常規(guī)HE及過(guò)碘酸Schiff（PAS）染色。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 一般指標(biāo) 子宮重量除以大鼠的體重即為子宮系數(shù)。同時(shí)測(cè)量宮頸和宮體處的最大直徑。

1.4.2 子宮組織病理學(xué)檢查 每張PAS染色切片在光鏡下（×200）觀察并測(cè)定子宮直徑、子宮壁厚度、肌層厚度、子宮壁平滑肌增生狀況、內(nèi)皮細(xì)胞類型及增生情況及子宮壁炎細(xì)胞浸潤(rùn)的程度。子宮壁平滑肌增生及肥大狀況由輕到重分別評(píng)為1分、2分、3分、4分。宮壁擴(kuò)張、肌細(xì)胞萎縮者根據(jù)萎縮程度由輕到重評(píng)分。累積每組評(píng)分，并計(jì)算出±sd，分值越高提示子宮平滑肌增生程度越嚴(yán)重。

1.4.3 生化指標(biāo) 大鼠血清采用酶聯(lián)免疫法進(jìn)行檢測(cè)雌二醇和孕酮的含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料均數(shù)用X＋SD表示，組間比較采用方差分析和P檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 一般情況的比較 實(shí)驗(yàn)期間，子宮肌瘤模型組有2只大鼠，陽(yáng)性藥組、治療組低劑量組各有1只大鼠因感染等原因而死亡，未納入最后統(tǒng)計(jì)。子宮肌瘤模型組大鼠較正常對(duì)照組子宮系數(shù)、宮頸直徑、宮體直徑增加（P＜0.01），表明子宮肌瘤大鼠模型復(fù)制成功。治療組能降低大鼠子宮系數(shù)、宮頸直徑、宮體直徑，和模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＜0.001），說(shuō)明藥物對(duì)子宮肌瘤有抑制作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大鼠子宮系數(shù)、宮頸直徑、宮體直徑的比較（mean±sd）

2.2 子宮病理學(xué)變化的比較 病理組織學(xué)觀察結(jié)果表明，模型組大鼠子宮壁肌層增厚，平滑肌細(xì)胞排列紊亂，呈環(huán)行或局灶性，并向系膜區(qū)延伸，增生的平滑肌細(xì)胞體積變大，胞核大，核仁大而明顯。內(nèi)膜上皮也較正常上皮增生，呈柱狀，并出現(xiàn)鱗狀細(xì)胞化生，宮內(nèi)膜腺體數(shù)目減少，有部分子宮肌瘤病變嚴(yán)重，宮壁組織壞死，局部有大量炎細(xì)胞浸潤(rùn) （化膿性改變），治療組及陽(yáng)性組未見(jiàn)化膿性改變，子宮平滑肌增生程度減輕，提示治療組及陽(yáng)性對(duì)子宮肌瘤有治療作用。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.3 大鼠激素水平的比較 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，模型組與正常組比較，大鼠血清中雌二醇的含量明顯上升，而治療組能抑制雌二醇和孕酮的上升趨勢(shì)。見(jiàn)表2。

表2 大鼠子宮病理學(xué)和激素水平變化的比較（mean±sd）

3 討論

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，乳腺增生、子宮內(nèi)膜異位癥、子宮肌瘤等病癥與機(jī)體雌激素水平過(guò)高而孕酮拮抗不足密切相關(guān)，設(shè)法降低雌激素、孕激素濃度是治療措施的首選［4－8］。西醫(yī)常采用米非司酮這一雌激素受體部分激動(dòng)劑與雌二醇競(jìng)爭(zhēng)雌激素受體，從而達(dá)到減弱雌激素作用的目的［9，10］。

我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，治療組與米非司酮組能降低大鼠子宮系數(shù)、宮頸直徑、宮體直徑，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，減少子宮平滑肌增生程度，降低雌二醇和孕酮含量的趨勢(shì)。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)把姜黃認(rèn)為是活血化瘀藥，因此原先的研究多是從活血，改善微循環(huán)等角度出發(fā)研究姜黃對(duì)子宮肌瘤的作用［11，12］，從新的角度揭示了姜黃的治療作用機(jī)制，提示姜黃素是治療雌二醇和孕酮水平異常升高致子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、乳腺增生等癥的有效藥物。為將來(lái)開(kāi)發(fā)有效的子宮肌瘤藥物提供了新的思路。

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R737.33

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1007－8517（2013）11－0016－02

2013.03.28）

林宇星 （1964－），男，福建省立醫(yī)院藥學(xué)部副主任藥師。