★ 付長華 楊琴香 蔡華吉

(江西施美制藥有限公司 東鄉(xiāng) 331800)

HPlC法測定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及有關(guān)物質(zhì)

★ 付長華 楊琴香 蔡華吉

(江西施美制藥有限公司 東鄉(xiāng) 331800)

目的:建立反相高效液相色譜法測定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及有關(guān)物質(zhì)。方法:采用十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱(Apollo C18，5μm，250mm×4.6mm)，甲醇-0.03mol/L磷酸二氫鉀溶液(75∶25)為流動相，檢測波長為238nm，流速為1.0mL/min，柱溫為室溫。結(jié)果:主成分與其余雜質(zhì)峰完全分離，苯磺酸左旋氨氯地平溶液在2.448μg/mL-122.4μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為0.9999，平均回收率為99.1%，RSD為0.8%，最小檢出量為1.67ng，方法精密度良好(RSD=0.4%)。結(jié)論:該方法專屬性強(qiáng)，精密度、準(zhǔn)確度符合要求，方法可靠，可用于苯磺酸左旋氨氯地平片的含量測定及有關(guān)物質(zhì)檢查。

苯磺酸左旋氨氯地平片；反相高效液相色譜法；含量；有關(guān)物質(zhì)

苯磺酸左旋氨氯地平(levamLodipine)是一種鈣離子拮抗劑(CCB)類的降壓藥。苯磺酸左旋氨氯地平是在苯磺酸氨氯地平的消旋體分子中進(jìn)行手性拆分，將容易引起水腫等副反應(yīng)而沒有降壓作用的右旋體拆除，保留有降壓作用的左旋體。氨氯地平是由左旋氨氯地平和右旋氨氯地平以1∶1的比例構(gòu)成的外消旋混合物，左旋體鈣拮抗活性是右旋體的近1000倍,是消旋體的2倍,理論上表明左旋氨氯地平劑量是消旋體的1/2時,即可有相同的降壓療效,同時副作用減少。[1]它是我國擁有獨(dú)立知識產(chǎn)權(quán)的抗高血壓藥物。本文對其有關(guān)物質(zhì)檢查及含量測定方法進(jìn)行了研究，方法準(zhǔn)確、靈敏、可靠，為保證本品的質(zhì)量提供了質(zhì)控方法。

1 儀器與試藥

日本島津lC-10AT高效液相色譜儀，包括lC-10ATVP泵、SPD-10AVP檢測器、Class-VP色譜工作站。甲醇為色譜純，磷酸二氫鉀為分析純，試驗用水為自制蒸餾水。

試驗用的苯磺酸左旋氨氯地平對照品由中國食品藥品檢定研究院提供。對照品含量：95.7%(以C20H25N2O5C1·C6H6O3S計)；樣品提供單位：江西施美制藥有限公司，批號：20130309、20130312、20130320，規(guī)格：2.5mg(以左旋氨氯地平計)。空白輔料均符合藥用標(biāo)準(zhǔn)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Apollo C18，5μm，250mm×4.6mm；流動相：甲醇-0.03mol/l的磷酸二氫鉀溶液(75∶25)；檢測波長為238nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL；理論板數(shù)按左旋氨氯地平計算應(yīng)不低于2000；左旋氨氯地平峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5。

2.2 溶液的制備

對照品溶液的制備 取苯磺酸左旋氨氯地平對照品17mg，精密稱定，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL，置25mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(相當(dāng)于左旋氨氯地平12.5mg)，置100mL量瓶中，加流動相適量超聲使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，置25mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定

避光操作。精密稱取苯磺酸左旋氨氯地平對照品約17mg，置100mL量瓶中，加流動相適量超聲溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。精密量取該儲備液5mL,分別置250、200、100、50、25、10、5mL容量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20μL注入色譜儀中，記錄色譜圖，以濃度(C)為橫坐標(biāo)，所測峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程：A=6177157.9C+2949，r=0.9999，表明在2.448μg/mL-122.4μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 最低檢出限測定

精密稱取苯磺酸左旋氨氯地平對照品適量，加流動相溶解并按逐步稀釋法測定得當(dāng)信噪比約為3∶1時，進(jìn)樣量約為1.67ng。

2.5 空白輔料干擾實驗

取本品空白輔料1片量細(xì)粉，置100mL量瓶中，加入含量測定項下的流動超聲溶解，過濾，精密吸取20μL續(xù)濾液注入液相色譜儀中，結(jié)果空白輔料無干擾。

2.6 苯磺酸的檢測

取苯磺酸適量，加流動相溶解，搖勻，過濾，取續(xù)濾液20μL注入色譜儀中，圖譜中顯示苯磺酸的峰。

2.7 專屬性考察試驗

酸破壞：取本品1片量細(xì)粉，置100mL量瓶中，加10mL水溶解，加10mL 0.1mol/L鹽酸溶液水浴1h，加0.1mol/L氫氧化鈉溶液10mL，加流動相稀釋至刻度，過濾，精密吸取20μL續(xù)濾液注入色譜儀中，結(jié)果見附圖B。

堿破壞：取本品1片量細(xì)粉，置100mL量瓶中，加10mL水溶解，加10mL 0.1mol/L氫氧化鈉溶液水浴1h，加0.1mol/L鹽酸溶液10mL，加流動相稀釋至刻度，過濾，精密吸取20μL續(xù)濾液注入色譜儀中，結(jié)果見附圖C。

氧化破壞：取本品1片量細(xì)粉，置100mL量瓶中，加10mL水溶解，滴加過氧化氫溶液10滴，振搖，加流動相至刻度，搖勻，過濾，精密吸取10μL續(xù)濾液注入色譜儀中，結(jié)果見附圖D。

高溫破壞：取本品1片量細(xì)粉，置100mL量瓶中，置120℃烘箱放置120min，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密吸取20μL續(xù)濾液注入色譜儀中，結(jié)果見附圖E。

光照破壞：取本品1片量細(xì)粉經(jīng)4500lX光照48h，置100mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，過濾，精密吸取20μL續(xù)濾液注入色譜儀中，結(jié)果見圖1。

A

B

C

D

F

以上試驗結(jié)果可見：本品在流動相中的溶液在強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、過氧化氫溶液、高溫及光照環(huán)境中均有不同程度的分解，各主要降解產(chǎn)物與主藥能有效分離，表明本方法專屬性良好。

2.8 溶液穩(wěn)定性試驗

取“2.2”項下的供試品溶液置室溫下避光放置，于0、2、4、8、10、24h取樣測定峰面積，測得RSD為0.4%，放置過程中峰面積無明顯變化，溶液在24h內(nèi)避光穩(wěn)定。

2.9 樣品回收率測定

按80%、100%、120%三個濃度梯度，分別精密稱取苯磺酸左旋氨氯地平對照品，加入處方量的空白輔料中，置適宜的容量瓶中，然后按2.12項下的方法測定含量，再計算回收率。測得平均回收率為99.6%，RSD為0.28%，表明本方法回收率好。

2.10 精密度和方法重復(fù)性試驗

取“2.2”項下的對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，量取峰面積，計算RSD為0.4%，表明進(jìn)樣精密度良好；分別精密稱取同一批(20130309)樣品6份，照含量測定項下的方法，測得平均含量為100.36%，RSD為0.25%，表明本方法有良好的重復(fù)性。

2.11 有關(guān)物質(zhì)檢查

避光操作。取本品細(xì)粉適量(約相當(dāng)于左旋氨氯地平12.5mg)，置100mL量瓶中，加流動相適量使溶解，加流動相稀釋至刻度，搖勻，濾過，作為供試品溶液，精密量取1mL供試品溶液置100mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，作為對照溶液。取對照溶液20μL注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測靈敏度，使主成分峰高為滿量程的20%，再取供試溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍，供試品溶液色譜圖若顯雜質(zhì)峰(苯磺酸峰和輔料峰除外)，各雜質(zhì)峰面積之和不得大于對照溶液的主峰面積(1.0%)。本品三批樣品(20130309、20130312、20130320)的總雜質(zhì)量分別為0.22%，0.19%和0.20%。

2.12 含量測定

各批樣品按“2.2”項下方法制備成供試品溶液、對照品溶液，精密量取對照品溶液與供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，按外標(biāo)法以峰面積計算，三批樣品(20130309、20130312、20130320)的含量測定結(jié)果分別為100.40%、99.40%和99.78%。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

參考《中華人民共和國藥典》[3]中同類品種的色譜條件，選用C18柱。實驗曾用Apollo和AgilentTC不同牌號的C18柱對苯磺酸左旋氨氯地平及其有關(guān)物質(zhì)進(jìn)行分離測定，結(jié)果一致，表明本方法耐用性較好。

左旋氨氯地平為堿性化合物，本品為其苯磺酸鹽，為保持色譜峰具有較好的峰形，需在流動相中加入適當(dāng)?shù)木彌_液(磷酸二氫鉀溶液)。參照國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[2]項下的色譜條件，確定本文中使用的流動相，各峰均可達(dá)到基線分離。

3.3 檢測波長的選擇

實驗中取苯磺酸左旋氨氯地平對照品適量，加流動相溶解并稀釋成每1mL含17ug的溶液，在200-300nm波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在238nm波長處有最大吸收，確定定238nm為檢測波長。

3.4 有關(guān)物質(zhì)檢查

苯磺酸左旋氨氯地平經(jīng)酸、堿、氧化、高溫及光照破壞后,產(chǎn)生的雜質(zhì)峰均在主峰保留時間的二倍內(nèi),并能與主峰基線分離,說明本色譜系統(tǒng)能有效控制其降解產(chǎn)物,并將記錄時間定為主峰保留時間的二倍。

3.5 含量測定

高效液相色譜法測定苯磺酸左旋氨氯地平片中苯磺酸左旋氨氯地平的含量，經(jīng)方法學(xué)研究結(jié)果表明，該法具有較好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，可用于苯磺酸左旋氨氯地平片的質(zhì)量控制。

[1]胡大一,趙秀麗,孫寧.苯磺酸左旋氨氯地平與苯磺酸氨氯地平治療原發(fā)性輕中度高血壓的隨機(jī)、雙盲平行研究[J].中國醫(yī)刊，2002(5):46-47.

[2]國家食品藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[S]，標(biāo)準(zhǔn)號：WS1-(X-020)-2002Z.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

DeterminationoflevamLodipineBesylateTabletsandRelatedSubstancesbyHPlC

FUChang-hua,YANGQin-xiang,CAIHua-ji

JiangxiShimeiPharmaceuticalCo.,ltd.JiangxiDongxiang331800

Objective:To Determinate levamlodipine besylate tablets and related substances by rp-HPlC. Methods:The eighteen alkyl silane bonded silica gel packed column(Apollo C18，250mm×4.6mm，5μm)，Methanol-0.03mol/L potassium dihydrogen phosphate (75∶25) as the mobile phase, The detection wavelength was 238nm, the flow rate was 1.0mL/min, column temperature was at room temperature. ResμLts: Principal component completely separated from other impurity peak, levamLodipine besylate solution at 2.448μg/mL to 122.4μg/mL concentration range showed a good linear relationship, the correlation coefficient was 0.9999, the average recovery was 99.1%,RSDwas 0.8%, The minimum detectable amount is 1.67ng, the precision of the method is good (RSD=0.4%), Conclusion The method has high specificity, precision, accuracy, reliable method, can be used for the determination of levamLodipine besylate tablets of the content and the related substances.

Levamlodipine Besylate Tablets; RP-HPlC; Content; Related Substances

R284.1

A

2013-07-24)