山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司 李曉穎 王 靜 谷 巍

抗菌肽是生物體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的一類抵抗外界病原體感染的小分子肽類物質(zhì)，具有非特異性的抗菌、抗病毒等作用，且不破壞正常細(xì)胞。本試驗(yàn)以高產(chǎn)抗菌肽的乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕添加到羅非魚(yú)日糧中，部分替代魚(yú)粉，研究富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能及免疫功能的影響，為植物發(fā)酵蛋白在水產(chǎn)飼料中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 抗菌肽發(fā)酵豆粕：為產(chǎn)抗菌肽乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕，由山東寶來(lái)利來(lái)生物工程股份有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取平均體重為（56.0±0.56）g的健康羅非魚(yú)240條，隨機(jī)分成4組，每組3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20條，馴養(yǎng)10 d。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)基礎(chǔ)日料參照NRC魚(yú)類營(yíng)養(yǎng)需要，以全魚(yú)粉作為蛋白源，配制羅非魚(yú)配合日糧。試驗(yàn)Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組分別用20%、40%、60%富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代基礎(chǔ)日糧中等量的魚(yú)粉。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)羅非魚(yú)飼養(yǎng)在室內(nèi)水族箱內(nèi)，按體重的3%投喂飼料，每天2次，投飼時(shí)間為 09∶00和17∶00， 投飼后2 h撈取剩余飼料，烘干，稱重。試驗(yàn)期為40 d。試驗(yàn)期間每天記錄羅非魚(yú)的攝食量和死亡魚(yú)數(shù)量，試驗(yàn)結(jié)束后尾椎靜脈采血，4000 r/min，離心15 min，分離血清。測(cè)定血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、溶菌酶（LZM）含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行單因子方差分析，用LSD進(jìn)行組間多重比較，試驗(yàn)結(jié)果均以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)生產(chǎn)性能的影響由表1可知，在試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各試驗(yàn)組平均體重差異均不明顯，10日齡時(shí)，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅰ組的平均日采食量和平均日增重分別降低2.95%和3.73%，但差異均不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組餌料系數(shù)比對(duì)照組提高1.14%，但差異不顯著（P＞0.05）；與試驗(yàn)Ⅰ組和對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅱ組和Ⅲ組日增重、日采食量均顯著降低，餌料系數(shù)顯著升高（P＜0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組日增重和日采食量均顯著高于試驗(yàn)Ⅲ組（P＜0.05）。這說(shuō)明在日糧中用抗菌肽發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉是可行的，但是高劑量添加會(huì)影響羅非魚(yú)的生長(zhǎng)。

表1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)生產(chǎn)性能的影響

20日齡時(shí)，各組的初始體重雖然差異不顯著，但是對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組的體重均高于試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組，與試驗(yàn)Ⅰ組和對(duì)照組相比，試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組，平均日增重和平均日采食量顯著降低，試驗(yàn)Ⅱ組和Ⅲ組的餌料系數(shù)均顯著高于試驗(yàn)Ⅰ組和對(duì)照組（P＜0.05）。試驗(yàn)Ⅱ組平均日增重和平均日采食量與試驗(yàn)Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05）。

30日齡時(shí)，對(duì)照組與試驗(yàn)Ⅰ組的初始體重差異不顯著，但均顯著高于試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組 （P＜0.05）；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組的日增重和餌料系數(shù)差異均不顯著（P>0.05），但均與試驗(yàn)Ⅱ組和Ⅲ組差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組的平均日增重和平均日采食量與試驗(yàn)Ⅲ組相比差異顯著（P＜0.05），分別較試驗(yàn)Ⅲ組提高18.25%和9.27%。通過(guò)比較不同添加水平抗菌肽發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)不同生長(zhǎng)階段生長(zhǎng)性能的影響可以看出，抗菌肽發(fā)酵豆粕在飼料中替代魚(yú)粉是可行的，但高劑量的添加對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)發(fā)育具有明顯的抑制作用。

2.2 抗菌肽發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

2.2.1 抗菌肽發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)血清TP、ALB含量的影響 由圖1可知，試驗(yàn)Ⅰ組TP含量比對(duì)照組提高1.58%，但差異不顯著（P＞0.05），而試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組的TP含量分別比對(duì)照組降低5.66%（P＞0.05）和10.46%（P＜0.05）。試驗(yàn)Ⅰ組ALB含量最高，比對(duì)照組高10.54%，差異顯著（P＜0.05）；試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組的ALB含量與對(duì)照組相比差異均不顯著（P＞0.05），但均顯著低于試驗(yàn)Ⅰ組。

由圖2可知，隨著日齡的增加各試驗(yàn)組的TP、ALB含量均有所增加，但各組間TP、ALB含量差異均不明顯，其中，試驗(yàn)Ⅰ組TP、ALB含量最高，分別比對(duì)照組提高1.2%和0.77%。

由圖3可知，到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各試驗(yàn)組間TP、ALB含量差異均不顯著，試驗(yàn)Ⅰ組的TP、ALB的含量最高，分別比對(duì)照組提高0.29%和0.38%。

2.2.2 抗菌肽發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)血清LZM含量的影響 由圖4可知，對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組LZM含量呈現(xiàn)逐漸遞增趨勢(shì)，而試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組含量呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，在試驗(yàn)前期對(duì)照組LZM含量最低，各試驗(yàn)組LZM含量均高于對(duì)照組。其中，試驗(yàn)Ⅱ組LZM含量最高，較對(duì)照組提高20.81%，各組間差異均顯著（P＜0.05）；隨著日齡的增加對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組LZM含量逐漸增加，試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組逐漸降低，到試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，試驗(yàn)Ⅰ組含量最高，比對(duì)照組提高4.59%，差異不顯著（P>0.05），但顯著高于試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組（P＜0.05）。

3 討論

抗菌肽作為飼料添加劑，已在畜牧生產(chǎn)中廣泛應(yīng)用。宋理平等（2010）研究發(fā)現(xiàn)，在凡納濱對(duì)蝦的飼料中添加重組抗菌肽制劑，可使其攝食量增加，相對(duì)增重率顯著提高。王阿榮等（2011）研究表明，抗菌肽能提高斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能和免疫功能。黃永彤等（2004）研究報(bào)道，抗菌肽在代替抗生素防治肉雞病害方面有明顯效果，并對(duì)多種細(xì)菌有較明顯的殺滅作用。

豆粕的蛋白質(zhì)含量為42%～45%，且必需氨基酸含量、氨基酸構(gòu)成比例以及消化率均優(yōu)于其他植物性餅粕類原料，經(jīng)過(guò)微生物發(fā)酵處理的豆粕，營(yíng)養(yǎng)素水平有所提高，并可獲得有益微生物，同時(shí)抗?fàn)I養(yǎng)因子水平顯著降低。盡管發(fā)酵豆粕有效能含量和氨基酸水平不及魚(yú)粉，但大量飼養(yǎng)試驗(yàn)表明，發(fā)酵豆粕替代全部或部分魚(yú)粉不會(huì)影響動(dòng)物的生產(chǎn)性能和健康水平（劉勇，2009；Refstie 等，2005）。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在飼料中適量添加含有抗菌肽成分的發(fā)酵豆粕代替魚(yú)粉，能促進(jìn)羅非魚(yú)的生長(zhǎng)發(fā)育、提高采食量及降低餌料系數(shù)，但值得注意的是，添加中、高劑量抗菌肽發(fā)酵豆粕會(huì)嚴(yán)重影響羅非魚(yú)的生長(zhǎng)性能，原因可能是乳酸菌發(fā)酵脫皮豆粕替代魚(yú)粉，影響了飼料適口性及氨基酸組成。高劑量抗菌肽發(fā)酵豆粕替代魚(yú)粉時(shí)，影響作用更為明顯。此外，陳曉生等（2006）研究表明，添加高劑量抗菌肽可能會(huì)抑制腸道有益菌的生長(zhǎng)。

通過(guò)測(cè)定不同組別的血液指標(biāo)，可以看出在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中，低劑量替代組即試驗(yàn)Ⅰ組TP、ALB含量均最高，但與其他各組均無(wú)顯著差異。一定濃度范圍內(nèi)的發(fā)酵豆粕對(duì)羅非魚(yú)血清TP、ALB含量無(wú)顯著影響，這表明，羅非魚(yú)具有自身穩(wěn)定調(diào)節(jié)系統(tǒng)，可以保持血清TP、ALB含量處在穩(wěn)定狀態(tài)。

LZM是機(jī)體非特異性免疫功能的重要體液因素，在試驗(yàn)前期試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組的含量高于對(duì)照組和試驗(yàn)Ⅰ組，說(shuō)明高劑量替代能顯著增加血清中LZM含量，但是隨著日齡的增加，這兩組LZM含量明顯下降，原因可能是試驗(yàn)Ⅱ組、Ⅲ組羅非魚(yú)在后期采食量下降影響了免疫功能。姜珊等（2011）研究報(bào)道，高劑量的抗菌肽對(duì)肝臟組織有一定的破壞性作用。LZM含量的下降，可能與該因素也有一定的關(guān)系，有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

劉勇（2009）研究表明，鮮雜魚(yú)-豆粕替代奧尼羅非魚(yú)幼魚(yú)飼料中2／3魚(yú)粉 （占飼料6%），不影響機(jī)體生長(zhǎng)性能。在本試驗(yàn)中，抗菌肽發(fā)酵豆粕替代20%魚(yú)粉（占飼料5.4%），對(duì)羅非魚(yú)的生長(zhǎng)性能影響不大，進(jìn)一步說(shuō)明抗菌肽發(fā)酵豆粕代替魚(yú)粉的適宜比例與品種和生長(zhǎng)階段等有一定關(guān)系。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，富含抗菌肽乳酸菌發(fā)酵豆粕替代20%的魚(yú)粉（占飼料5.4%），對(duì)羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能及血清免疫指標(biāo)具有促進(jìn)和增強(qiáng)作用。

[1]陳曉生，張輝華，周慶國(guó)，等.抗菌肽對(duì)肉鴨雛鴨期腸道主要微生物菌落的影響[J].獸藥與飼料添加劑，2006，11（4）：1 ～ 2.

[2]黃永彤，黃自然，黃建清，等.抗菌肽與抗生素飼喂肉雞的效果比較[J].廣東飼料，2004，13（2）：21 ～ 24.

[3]姜珊，王寶杰，劉梅，等.飼料中添加重組抗菌肽對(duì)吉富羅非魚(yú)生長(zhǎng)性能及免疫性能的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)，2011，18（6）：308 ～ 314.

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[5]宋理平，胡斌，王愛(ài)英，等.抗菌肽對(duì)凡納濱對(duì)蝦生長(zhǎng)和機(jī)體免疫的影響[J].廣東海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，30（3）：28 ～ 32.

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