侯小霞

兒童尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平的影響研究

侯小霞

目的探討兒童尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平與兒童生長發(fā)育的影響。方法采用雙抗體夾心法檢測尿液中8-羥基脫氧鳥苷的水平，同時收集兒童的身高、體重、頭圍、胸圍和年齡等指標(biāo)。結(jié)果尿液中8-羥基脫氧鳥苷水平，男童和女童之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義；7～8歲組兒童高于3～4歲組兒童，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論高年齡兒童處于一個較高的氧化應(yīng)激水平，并可能對兒童生長發(fā)育造成影響。

尿液；8-羥基脫氧鳥苷；年齡

在眾多的DNA氧化損傷中，8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)最常見，而且是一種高致突變性氧化損傷產(chǎn)物[1]。在體內(nèi)穩(wěn)定存在，為代謝的終產(chǎn)物，是目前國際上公認(rèn)的一種新型的評價DNA 氧化損傷和氧化應(yīng)激狀態(tài)的敏感指標(biāo)和生物標(biāo)志物。機(jī)體在氧化應(yīng)激因素的作用下，出現(xiàn)8-OHdG水平的增高，提示機(jī)體發(fā)生DNA損傷增加[2]。本實驗以兒童為研究對象，采集兒童尿液，收集有關(guān)體格發(fā)育指標(biāo)，檢測其中8-OHdG的水平，從而探討兒童尿液中8-OHdG水平與相關(guān)因素之間的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料本研究中，男性兒童70名，女性兒童49名，均來自于同一地區(qū)幼兒園。在取得父母及幼兒園老師同意后，進(jìn)行樣本采集和數(shù)據(jù)收集。

1.2尿液的采集和8-OHdG水平的檢測 取晨尿中段尿10 ml放入干凈的試管中，標(biāo)記姓名和編號，-20 ℃冰箱保存。應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人8-OHdG水平。主要試劑：人8-OHdG水平檢測試劑盒(廈門慧嘉生物)；主要儀器：全波長酶標(biāo)儀(美國熱電公司)，金屬恒溫加熱器(上?？蚌蝺x器設(shè)備有限公司)。用純化的人8-OHdG抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入人8-OHdG抗原，再與HRP標(biāo)記的人8-OHdG結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人8-OHdG呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人8-OHdG濃度。

1.3兒童體格發(fā)育指標(biāo)及相關(guān)數(shù)據(jù)收集 收集兒童性別、年齡等指標(biāo)，并進(jìn)行身高(cm)、體重(kg)、頭圍(cm)和胸圍(cm)的檢測，收集數(shù)據(jù)。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，偏正態(tài)分布用中位數(shù)表示，均數(shù)比較用非參數(shù)檢驗(K-S、M-W檢驗)，相關(guān)因素分析使用Spearman等級相關(guān)分析，以α=0.05作為檢驗標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

兒童尿液中8-OHdG水平經(jīng)M-W檢驗表明，男、女童尿中8-OHdG值比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；兒童尿中8-OHdG水平隨著年齡的增大而增高，7～8歲組兒童高于3～4歲組兒童，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1和圖1。

兒童尿液中8-OHdG水平與兒童的身高、體重、頭圍和胸圍之間，經(jīng)相關(guān)性檢驗表明，無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 不同年齡組兒童尿中8-OHdG比較

注：*P<0.05，與3～4歲組兒童8-OHdG水平比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義

圖1 不同年齡組兒童尿中8-OHdG比較

3 討論

本次研究中發(fā)現(xiàn)，兒童尿液中8-OHdG水平的平均值為412.38 ng/gCr，男、女童8-OHdG水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。根據(jù)兒童年齡分組并分析，實驗數(shù)據(jù)顯示，與3～4歲組相比，7～8歲組兒童尿中8-羥基脫氧鳥苷明顯增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。羥自由基和超氧陰離子能直接與DNA分子反應(yīng)，導(dǎo)致DNA鏈斷裂、堿基修飾和DNA 蛋白交聯(lián)等氧化性DNA 損傷，其中最主要的致突變性損傷反應(yīng)是鳥嘌呤上C8與-OH 結(jié)合，產(chǎn)生 8-OHdG[3]。尿液中8-OHdG 水平反映機(jī)體氧化應(yīng)激水平，因此本研究提示隨著兒童年齡的增大，機(jī)體DNA損傷增高，與低年齡兒童相比，高年齡兒童處于一個較高的氧化應(yīng)激水平，并可能對兒童生長發(fā)育造成影響。

[1] Arito Yamane, Takashi Kohno, Kohei Ito, et al.Differential ability of polymorphic OGG1 proteins to suppress mutagenesis induced by 8-hydroxyguanine in human cell in vivo. Carcinogenesis, 2004, 25(9) :1689-1694.

[2] Takiguchi M, Achanzar WE, Qu W, et al. Effects of cadmium on DNA-(Cytosine-5) methyltransferase activity and DNA methylation status during cadmium-induced cellular transformation. Exp Cell Res, 2003, 286(2):355-365.

[3] Deng WJ, LP, Liuc WK, et al, Atmospheric levels and cytotoxicity of PAHs and heavy metalsin TSP and PM2.5 at an electronic waste recycling site in southeast China. Atmospheric Environment, 2006, 40(36):6945-6955.

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