天津市寶坻區(qū)藥品檢驗(yàn)所（301800）楊小孟

益心舒膠囊由人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎、山楂7味中藥組成，是目前十分有效的治療冠心病心絞痛的藥物。其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十三冊(cè)》中，無含量測(cè)定指標(biāo)。黃芪為其主要成分，具有益氣固表作用[1]。為能控制制劑質(zhì)量，保證療效，本文采用HPLC法測(cè)定了其黃芪甲苷的含量。

1 儀器與試藥

島津HPLC-2010AHT型高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AG135型電子天平。黃芪甲苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110781-200613）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純；益心舒膠囊（貴州信邦制藥有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（40∶60）；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：10μL；檢測(cè)波長(zhǎng)：205nm。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷計(jì)算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液制備 精密稱取黃芪甲苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL含25μg的對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的樣品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.4g，精密稱定，加入三氯甲烷提取3次，每次30mL，棄三氯甲烷液；殘?jiān)铀柡偷恼〈继崛?次（30，30，20，20，10mL）并合并，加氨水洗滌2次，每次50mL，棄氨水洗液，分取正丁醇液，水浴蒸干；殘?jiān)右掖?mL溶解，通過D101型大孔樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm，長(zhǎng)12cm），50mL水洗脫，棄洗脫液，用80%乙醇70mL洗脫，收集洗脫液，蒸干；殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。取益心舒膠囊的陰性樣品，同法制備。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 取2.2項(xiàng)下3種溶液，按擬訂的色譜條件測(cè)定。結(jié)果表明陰性對(duì)照無干擾。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精取黃芪甲苷對(duì)照品20.21mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，分別精密量取1.0，2.5，5.0，7.5，10.0mL，置20mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精取l0μL進(jìn)樣，以峰面積為縱坐標(biāo)、對(duì)照品質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為Y=41.843X-4.2039，r=0.9999（n=5）。表明黃芪甲苷質(zhì)量濃度在0.04042～0.4042mg/mL之間與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 取同一份對(duì)照品溶液，按上述條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定黃芪甲苷峰面積得RSD為0.29%（n=6）。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣1次，測(cè)定黃芪甲苷峰面積得RSD為2.11%（n=6），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定含量。結(jié)果平均含量為2.37mg/粒，RSD為0.25%（n=6）。

附表 黃芪甲苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 分別稱取已知含量的樣品適量，精密加入對(duì)照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測(cè)定含量，計(jì)算回收率，見附表。

2.4 樣品含量測(cè)定 取供試品溶液和對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣10μL，以峰面積按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果分別為2.37、2.27、2.33mg/粒，平均2.32mg/粒。

3 討論

比較了以甲醇-水（30∶70）、甲醇-水（40∶60）、乙腈-水（30∶70）、乙腈-水（40∶60）為流動(dòng)相時(shí)的效果，發(fā)現(xiàn)后者為最佳流動(dòng)相。試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用三氯甲烷處理樣品時(shí)，雜質(zhì)干擾少，分離效果好，便于測(cè)定黃芪甲苷含量。