天津市寶坻區(qū)藥品檢驗所（301800）楊小孟

益心舒膠囊由人參、麥冬、五味子、黃芪、丹參、川芎、山楂7味中藥組成，是目前十分有效的治療冠心病心絞痛的藥物。其質(zhì)量標準收載于《衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第十三冊》中，無含量測定指標。黃芪為其主要成分，具有益氣固表作用[1]。為能控制制劑質(zhì)量，保證療效，本文采用HPLC法測定了其黃芪甲苷的含量。

1 儀器與試藥

島津HPLC-2010AHT型高效液相色譜儀；梅特勒-托利多AG135型電子天平。黃芪甲苷對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110781-200613）；甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑為分析純；益心舒膠囊（貴州信邦制藥有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 色譜柱：phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：乙腈-水（40∶60）；柱溫：40℃；進樣量：10μL；檢測波長：205nm。理論塔板數(shù)按黃芪甲苷計算應(yīng)不低于3000。

2.2 溶液制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1mL含25μg的對照品溶液。取裝量差異項下的樣品內(nèi)容物，研細，取約0.4g，精密稱定，加入三氯甲烷提取3次，每次30mL，棄三氯甲烷液；殘渣加水飽和的正丁醇提取5次（30，30，20，20，10mL）并合并，加氨水洗滌2次，每次50mL，棄氨水洗液，分取正丁醇液，水浴蒸干；殘渣加乙醇5mL溶解，通過D101型大孔樹脂柱（內(nèi)徑1.5cm，長12cm），50mL水洗脫，棄洗脫液，用80%乙醇70mL洗脫，收集洗脫液，蒸干；殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至100mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。取益心舒膠囊的陰性樣品，同法制備。

2.3 方法學考察

2.3.1 專屬性試驗 取2.2項下3種溶液，按擬訂的色譜條件測定。結(jié)果表明陰性對照無干擾。

2.3.2 線性關(guān)系考察 精取黃芪甲苷對照品20.21mg，置25mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，分別精密量取1.0，2.5，5.0，7.5，10.0mL，置20mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精取l0μL進樣，以峰面積為縱坐標、對照品質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標進行線性回歸，回歸方程為Y=41.843X-4.2039，r=0.9999（n=5）。表明黃芪甲苷質(zhì)量濃度在0.04042～0.4042mg/mL之間與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗 取同一份對照品溶液，按上述條件連續(xù)進樣測定黃芪甲苷峰面積得RSD為0.29%（n=6）。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，每隔一定時間進樣1次，測定黃芪甲苷峰面積得RSD為2.11%（n=6），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 重現(xiàn)性試驗 取同一批號樣品6份，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定含量。結(jié)果平均含量為2.37mg/粒，RSD為0.25%（n=6）。

附表 黃芪甲苷加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2.3.6 加樣回收試驗 分別稱取已知含量的樣品適量，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法制備溶液并依法測定含量，計算回收率，見附表。

2.4 樣品含量測定 取供試品溶液和對照品溶液，各進樣10μL，以峰面積按外標法計算含量。結(jié)果分別為2.37、2.27、2.33mg/粒，平均2.32mg/粒。

3 討論

比較了以甲醇-水（30∶70）、甲醇-水（40∶60）、乙腈-水（30∶70）、乙腈-水（40∶60）為流動相時的效果，發(fā)現(xiàn)后者為最佳流動相。試驗結(jié)果顯示，采用三氯甲烷處理樣品時，雜質(zhì)干擾少，分離效果好，便于測定黃芪甲苷含量。