李 翔，劉皈陽，馬建麗，周 亮，高 磊

銀梔口服液來自民間驗方銀梔湯，由金銀花、連翹、梔子、薄荷、牛蒡子、桔梗、甘草等多味中藥組成，具有辛涼解表、清熱肅肺的功能，主治外感風(fēng)熱。方中金銀花具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱的功效，綠原酸為其主要有效成分，具有抗菌、抗病毒等作用［1-2］。為了有效控制銀梔口服液的質(zhì)量，本試驗采用HPLC法測定方中君藥金銀花中綠原酸的含量，可以為建立該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供借鑒。

1 儀器與試藥

Agilent 1200型高效液相色譜儀;Mettler AE240電子天平。綠原酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號:0753-200111);銀梔口服液(10 mL/支，批號:120305、120312、120319);甲醇為色譜純，水為重蒸水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流動相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(20∶80);流速:1.0 mL/min;檢測波長:327 nm;柱溫:30℃;進(jìn)樣量:10 μL。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算不低于5 000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品10.92 mg，置于50 mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得218.4 μg/mL的對照品儲備溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取銀梔口服液1 mL，置于100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 陰性溶液的制備 按處方制備不含金銀花藥材的樣品，按“2.2.2”項下方法制成陰性溶液。

2.3 專屬性試驗 取對照品溶液、供試品溶液、陰性溶液各10 μL，按“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果陰性對照溶液對綠原酸的測定無干擾(見圖1)。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL，置于 10 mL 量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。取上述溶液，分別進(jìn)樣。以綠原酸濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=30.45 X+4.536(r=0.999 8，n=6)。結(jié)果表明，綠原酸在2.184～109.2 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果RSD為0.76%(n=6)，表明方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣測定峰面積。結(jié)果RSD為1.21%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

圖1 高效液相色譜圖

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品6份(批號:120305)，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，測定綠原酸含量。結(jié)果表明，綠原酸的平均含量為0.507 3 mg/mL，RSD 為1.80%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收試驗 分別精密稱取已知含量為0.507 3 mg/mL的樣品6份(批號:120305)，分別精密加入 218.4 μg/mL綠原酸對照品溶液1.2 mL，按“2.2.2”項下方法制備溶液，測定綠原酸含量，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 綠原酸加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.9 樣品含量測定 按“2.2.2”項下方法制備樣品溶液，依法測定樣品中綠原酸的含量，結(jié)果批號為120305、120312、120319的3批樣品中綠原酸的含量分別為0.507 3、0.523 8、0.537 2 mg/mL，RSD分別為1.80%、1.62%、1.55%(n=3)。

3 討論

3.1 目前，測定制劑中綠原酸含量的文獻(xiàn)較多，大多采用含磷酸溶液的流動相體系進(jìn)行分離測定，對色譜柱的壽命影響較大，且易引起基線的波動［3-6］。本試驗通過比較磷酸溶液和冰醋酸溶液組成的流動相體系發(fā)現(xiàn)，采用甲醇-冰醋酸溶液作為流動相即可避免綠原酸的色譜峰拖尾現(xiàn)象，通過進(jìn)一步優(yōu)化冰醋酸溶液的濃度，發(fā)現(xiàn)0.5%冰醋酸溶液可以滿足色譜系統(tǒng)適應(yīng)性的要求。

3.2 從3批次樣品的測定結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，不同批次銀梔口服液中綠原酸含量較為一致，說明該口服液的生產(chǎn)工藝穩(wěn)定，能夠保證產(chǎn)品質(zhì)量的可靠性。另外，方法學(xué)考察中重復(fù)性試驗、樣品溶液穩(wěn)定性、加樣回收率均符合要求，可以保證含量測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2010:205.

［2］吳衛(wèi)華，康楨，歐陽冬生，等.綠原酸的藥理學(xué)研究進(jìn)展［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18:691.

［3］高旺，張驥鵬.HPLC法測定消炎片中綠原酸的含量［J］.實用藥物與臨床，2009，12(3):201-202.

［4］陳珂，宋嵐，鄺明，等.高效液相色譜法測定杏杷止咳顆粒中綠原酸含量［J］.中國藥業(yè)，2011，20(1):26-27.

［5］師永花.雙波長RP-HPLC法測定清開靈膠囊中梔子苷和綠原酸的含量［J］.實用藥物與臨床，2011，14(4):300-303.

［6］徐英宏，關(guān)丁越，姜清華.治咽顆粒的鑒別及其綠原酸含量測定［J］，實用藥物與臨床，2011，14(6):694-698