周 浩，王 健，聶 旭，譚 軍，吳永堯

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，湖南 長沙410128）

神經(jīng)酰胺（Ceramide），即N－脂酰神經(jīng)鞘胺醇，是細(xì)胞膜的組成成分鞘磷脂的基本單位，也是體內(nèi)一類重要的生物活性物質(zhì)，具有屏障[1］、粘合、保濕[2］、提高免疫和防癌抗癌的作用[3］。結(jié)合態(tài)的神經(jīng)酰胺即鞘磷脂也具有很高的利用價值，可通過磷脂酶C的定向酶解獲得。天然神經(jīng)酰胺的分子不含紫外和熒光發(fā)色團，而且難以衍生，導(dǎo)致神經(jīng)酰胺的分析比較困難[4］。目前，從天然生物原料中提取的神經(jīng)酰胺類物質(zhì)主要有動物源神經(jīng)酰胺和植物源神經(jīng)酰胺[5，6］。動物源神經(jīng)酰胺因豬牛感染瘋牛病、口蹄疫等人畜共患病，其產(chǎn)品中殘留該類病毒而引起消費者普遍的憂慮，使得動物源神經(jīng)酰胺的應(yīng)用逐步萎縮。因此，較安全的植物源神經(jīng)酰胺成為研究熱點。

神經(jīng)酰胺在生物試樣中的含量極低，但魔芋中神經(jīng)酰胺含量較高[7］，是神經(jīng)酰胺的潛在重要來源。我國魔芋資源豐富，如果能將魔芋作為神經(jīng)酰胺的來源，將極大地提高魔芋的經(jīng)濟價值。

作者在此利用HPLC－ELSD法測定了4種魔芋中的神經(jīng)酰胺含量，擬為魔芋神經(jīng)酰胺的綜合利用提供理論依據(jù)。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

魔芋：分類學(xué)上屬于不同的種，品種待鑒定，分別編號M1～M4，M1葉柄無色、M2葉柄黃色、M3葉柄綠色、M4葉柄紅色。

亞硫酸鈉、無水乙醇、石油醚均為分析純；甲醇為色譜純。

超級恒溫水浴箱；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；水分測定儀；超聲波清洗器；低速離心機；Agilent 1200型高效液相色譜儀（包括梯度泵G1311A、手動進樣器G1328B、柱恒溫系統(tǒng)G1316A、紫外檢測器和色譜工作站等），美國Agilent公司；Alltech ELSD 3300型蒸發(fā)光散射檢測器，美國Alltech公司。

1.2 方法

1.2.1 魔芋粉的制備

將新鮮魔芋日曬脫水，再將其切片并用亞硫酸鈉溶液護色，置于45℃的烘箱中烘干，粉碎，即得魔芋粉。

1.2.2 魔芋神經(jīng)酰胺的提取及樣品溶液的制備

稱取25g魔芋粉于圓底燒瓶中，按料液比1∶10（g∶mL，下同）加入95%乙醇，在80℃下冷凝回流提取8h。離心（4000r·min－1，10min），濾紙過濾，并用50mL石油醚萃取3次。取石油醚層在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸干后加入少量石油醚，在超聲波清洗器上超聲后倒入小燒杯，待溶劑揮發(fā)后，即得魔芋神經(jīng)酰胺粗品。

準(zhǔn)確稱取魔芋神經(jīng)酰胺粗品0.5g，置于50mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得10 mg·mL－1樣品溶液。

1.2.3 含量測定

參照文獻[8］，采用 HPLC－ELSD法測定魔芋中神經(jīng)酰胺的含量。

色譜條件：色譜柱為 Agilent ZORBZX Eclipse XDB－C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相為甲醇－水；柱溫35℃；流速1mL·min－1；蒸發(fā)光散射檢測器漂移管的溫度40℃；氮氣流速1.5L·min－1；檢測靈敏度為2。

按下式計算魔芋神經(jīng)酰胺（本實驗測定的是CerⅡ含量，由于神經(jīng)酰胺是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的一類物質(zhì)，可能會有其它神經(jīng)酰胺類物質(zhì)未被檢出）的含量：

式中：x為峰面積的自然對數(shù)；y為神經(jīng)酰胺質(zhì)量（μg）的自然對數(shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 4種魔芋粉的含水量

實驗測定了4種魔芋粉的含水量，分別為M1 10.3%、M2 10.6%、M3 10.2%、M4 10.4%。

2.2 4種魔芋中的神經(jīng)酰胺粗品含量

在相同條件下，從4種不同種的魔芋中提取得到的魔芋神經(jīng)酰胺粗品的含量表現(xiàn)出差異，如表1 所示。

表1 4種魔芋神經(jīng)酰胺粗品含量Tab.1 The contents of ceramide crude from 4kinds of konjac

由表1 可知，M4魔芋中的神經(jīng)酰胺粗品含量最高，為3.288mg·g－1。

2.3 4種魔芋神經(jīng)酰胺含量及比較

采用HPLC－ELSD法測定4種魔芋M1、M2、M3、M4中的神經(jīng)酰胺含量，進樣量為20μL，結(jié)果見圖1。

圖1 4種魔芋神經(jīng)酰胺的HPLC－ELSD圖譜Fig.1 HPLC－ELSD Chromatograms of ceramide from 4kinds of konjac

由圖1可知，4種魔芋中均含有神經(jīng)酰胺，出峰效果較好。但由于魔芋神經(jīng)酰胺的脂肪酸部分長度不同，因而出峰的時間也略有差異。4種魔芋神經(jīng)酰胺的色譜峰面積分別為1457、1583、1612、1731，其中峰面積最大的是M4，為1731。

由峰面積計算得到4種魔芋神經(jīng)酰胺含量見圖2。

由圖2可知，M1魔芋中神經(jīng)酰胺含量為25.72 μg·g－1，M2魔芋中神經(jīng)酰胺含量為32.73μg·g－1，M3魔芋中神經(jīng)酰胺含量為25.44μg·g－1，M4魔芋中神經(jīng)酰胺含量為43.75μg·g－1，其中神經(jīng)酰胺含量最高的是M4。

3 結(jié)論

圖2 4種魔芋神經(jīng)酰胺的含量Fig.2 The contents of ceramide from 4kinds of konjac

采用HPLC－ELSD法測定了4種魔芋中的神經(jīng)酰胺含量并進行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，4種魔芋中均含有神經(jīng)酰胺，其含量與種類有較大的關(guān)系。其中M4中神經(jīng)酰胺含量最高，達到43.75μg·g－1。

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