許文龍，李齊云，佘亞輝，韓媛媛

（安徽省亳州市人民醫(yī)院檢驗科 236800）

臨床上幽門螺桿菌（Hp）的檢測方法很多，常用的有快速尿素酶實驗，14C、13C呼氣試驗。14C呼氣試驗因有放射性而漸被淘汰，13C較安全卻過于昂貴；而單一的尿素酶實驗又無法識別是否為產細胞毒素的Hp感染以及易出現(xiàn)假陰性，影響結果的準確性。本文采用蛋白芯片技術對上消化道疾病患者進行Hp血清學檢查，探討Hp抗體譜檢測在上消化道疾病診斷中的意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院門診與住院患者557例，因上消化道癥狀而行胃鏡檢查，其中胃潰瘍73例，男49例，女24例，年齡20～88歲，平均年齡49.3歲；十二指腸潰瘍32例，男26列，女6例，年齡19～71歲，平均年齡39.5歲；慢性胃炎258例；男114例，女144例，年齡11～76歲，平均年齡23.5歲。上消化道腫瘤組（均經病理證實）56例，男35例，女21例，年齡44～76歲，平均年齡61.3歲。另外138例健康體檢體檢者作為對照組。

1.2 血清Hp抗體檢查方法

1.2.1 標本采集和保存 空腹抽取靜脈血2mL置于普通生化管中，分離血清，如未能及時檢查則置于－20℃凍存。

1.2.2 采用試劑 由深圳欣康基因數(shù)碼科技有限公司提供的Hp蛋白檢測芯片試劑盒。

1.2.3 原理 Hp芯片抗體檢測試劑盒將Hp特異性重組蛋白包括細胞毒素相關蛋白（CagA）、空泡毒素A蛋白（VacA）、尿素酶（Ure）、熱休克蛋白60（Hsp60）和氮素還原酶（RdxA）以方陣形式固定于支持膜上，待檢標本中的特異性抗體（IgG）與抗原發(fā)生反應，便在膜上形成抗原－抗體免疫復合物，再用膠體金標記物（顯色劑）與該免疫復合物結合，最終形成肉眼可見的紅色斑點，借助芯片閱讀儀對待檢標本中的抗體做定性分析。1.2.4 操作步驟 嚴格按深圳欣康基因數(shù)碼科技有限公司提供的HP蛋白檢測芯片試劑盒說明書操作。

1.3 結果判斷 檢測5種 Hp抗體中以CagA、VacA、Ure、Hsp60抗體中任意一項陽性即判斷為Hp抗體陽性；以分泌CagA／VacA為Ⅰ型Hp，無分泌CagA／VacA為Ⅱ型Hp。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS15.0統(tǒng)計軟件，采χ2檢驗，多組總體率比較檢驗水準α＝0.05。

2 結 果

2.1 對照組、慢性胃炎、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、上消化道腫瘤各組的Hp抗體譜感染率比較見表1。Hp抗體譜感染率在各組間總體比較差異有統(tǒng)計學意義（χ2值為15.413，P 為0.004）；慢性胃炎組、上消化道腫瘤組Hp感染率與對照組比較差異均無統(tǒng)計學意義（χ2值分別為0.035、0.020，P分別為0.853、0.888）；胃潰瘍與十二指腸潰瘍組間及慢性胃炎組與上消化道腫瘤組Hp抗體譜感染率比較差異亦無統(tǒng)計學意義（χ2值分別為0.012、0.081，P分別為0.912、0.776）；潰瘍組 Hp抗體譜感染率明顯高于對照組與慢性胃炎組（χ2值分別為8.849、9.453，P 分別為0.003、0.002）。

表1 各組間Hp抗體譜感染率及Hsp60陽性率［n（%）］

2.2 Hsp60抗體在對照組、慢性胃炎組、胃潰瘍組、十二指腸潰瘍組、上消化道腫瘤組的陽性率分別為9.4%、1.75%、20.5%、3.1%、46.4%（見表1）。上消化道腫瘤組 Hsp60陽性率與其他4組比較差異均有統(tǒng)計學意義（χ2值分別為33.968、65.589、9.79、17.955；P 值 分 別 為 0.000、0.000、0.002、0.000）。

2.3 對照組、慢性胃炎、胃性潰瘍、十二指腸潰瘍、上消化道腫瘤各組的Ⅰ型和Ⅱ型Hp感染率比較見表2。胃潰瘍、十二指腸潰瘍、上消化道腫瘤組Ⅰ型和Ⅱ型Hp感染率明顯高于對照組與慢性胃炎組。

表2 各組間Ⅰ型、Ⅱ型Hp感染率比較［n（%）］

3 討 論

Hp是從慢性活動性胃炎患者的胃黏膜分離的一種革蘭陰性桿菌，一般情況下定植于胃黏膜，可引起慢性胃炎、消化性胃潰瘍等消化道疾病，并且是胃腺癌與胃淋巴瘤的誘發(fā)因素之一［1］。Hp在胃黏膜繁殖后，能產生豐富的尿素酶，有極強的分解尿素的作用，尿素分解后產生的氨對黏膜產生毒性作用，致使黏膜損傷，破壞胃黏膜，發(fā)生上消化道各種疾病。

Hp在人群中有較高的感染率。Hp感染人體后可呈現(xiàn)不同的臨床結果，這除了可能與宿主的個體差異有關以外，Hp菌株的不同可能是導致不同臨床結果的關鍵因素。由于菌株不同，其所含細胞毒素相關蛋白也不盡相同。一些Hp表達空泡毒素和細胞毒素它們在導致黏膜損傷中起重要作用［2］。現(xiàn)已表明Hp不同的抗體成分決定了其致病特點或與Hp感染的預后及耐藥密切相關［3］。據(jù)此特性臨床上把Hp分為2種類型，即分泌CagA／VacA為Ⅰ型，無分泌Cag A／VacA為Ⅱ型［4］。它們在胃和十二指腸疾病中造成的后果不一樣，Ⅱ型HP不產生細胞毒素，它雖然能覆蓋在部分胃黏膜上，并使人體產生相應的免疫應答（產生Hp抗體），但不能侵入胃上皮細胞，可長期無臨床癥狀。相反感染Ⅰ型Hp后，由于細胞毒素的作用造成胃上皮細胞空泡、損傷、壞死及潰瘍，因此感染此類Hp與胃、十二指腸潰瘍及胃部腫瘤可能有較密切的關系［5］。本文中上消化道疾病的Hp總陽性率為57.27%（319／557），與文獻［6］報告相似，表明Hp感染與上消化道疾病密切相關。Ⅰ型Hp感染率在消化性潰瘍組與上消化道腫瘤組均明顯高于對照組，顯示具有高毒力因子（CagA及VacA）的Hp是上消化道疾病的主要致病菌株。

Hsp是一種分子伴侶，能以分子模擬宿主自身抗原，逃避宿主免疫和（或）誘發(fā)自身免疫，同時其具有抗原特異性可引起抗感染免疫。目前至少已認識到4族Hsp，即Hsp90、Hsp70、Hs p60和小Hsp。研究表明Hp中存在Hsp60，它可能與Hp對胃黏膜上皮的黏附有關，而且參與蛋白質的細胞外裝配和（或）在宿主胃環(huán)境中保護尿素酶的活性［7－8］。本研究中上消化道腫瘤組Hsp60陽性表達率顯著高于慢性胃炎組、消化性潰瘍組及對照組，表明Hsp60的高表達可能與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和生物學行為有密切的關系。胃癌的形成、發(fā)展有如下模式：即淺表性胃炎－萎縮性胃炎－腸上皮化生－不典型增生－胃癌，其中腸上皮化生和不典型增生是胃黏膜良性病變向胃癌演變的前奏，屬于慢性增生性疾病，而在此過程中Hsp60陽性表達率呈逐漸上升趨勢［7］。

在人群中采用Hp檢測的血清學篩查，能夠及早發(fā)現(xiàn)各種消化性疾病患者，并得到早期治療。本組結果表明，Hp蛋白芯片血清學檢測可以為臨床判斷是否為產毒的Hp感染提供科學依據(jù)，對判斷預后有重要的臨床意義，很適合廣大基層醫(yī)院推廣應用。

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