熊 敏，胡 勇，徐世軍△，巨少華，張蔭杰，代 勇，王 飛，張廷模

(1.四川省中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，成都 611137;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都 611137)

感毒清顆粒由黃芪和射干2味中藥組成，具有清熱解表、益氣解毒功效，用于治療上呼吸道感染(熱毒壅肺，衛(wèi)氣不足)癥見易感冒、體倦乏力、發(fā)熱頭痛、咳嗽痰多、咽干咽痛、舌紅苔黃、脈浮而數(shù)等癥。課題組前期研究結(jié)果表明，感毒清顆粒具有良好的拮抗急性期炎癥和鎮(zhèn)痛作用［1］。本研究采用酚紅氣管排泌法、濃氨水致咳法和2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱模型及內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型，評(píng)價(jià)其祛痰、止咳和解熱作用，為其臨床治療上呼吸道感染提供藥效學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物 感毒清顆粒(1.5g原生藥/g)由成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥炮制與制劑系提供(批號(hào)20120314);鹽酸氨溴索口服液由黑龍江中桂制藥有限公司生產(chǎn)(批號(hào)120336);復(fù)方磷酸可待因溶液由南昌立健藥業(yè)有限公司生產(chǎn)(批號(hào)K2120713);對(duì)乙酰氨基酚片由哈藥集團(tuán)制藥六廠生產(chǎn)(批號(hào)120102);大腸桿菌內(nèi)毒素為Sigma Adrich公司產(chǎn)品。

1.1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)KM小鼠雌雄各半，體質(zhì)量20±2g;SPF級(jí)SD雄性大鼠，體質(zhì)量200±20g(合格證號(hào)SCXK(川)2008-24);家兔1.8～2.0kg，均購自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所(合格證號(hào)SCXK(川)2008-14)。

1.1.3 主要儀器 3001全自動(dòng)酶標(biāo)儀，Thermo Scientific;電子天平，北京賽多利斯天平有限公司，BS200S;MC-246型肛溫計(jì)，歐姆龍(大連)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 感毒清顆粒祛痰作用研究－對(duì)酚紅排泌量的影響 表1顯示，取KM小鼠50只隨機(jī)分為5組，每組10只。ig給藥，給藥體積為10ml/kg·d，連續(xù)5d，空白對(duì)照組ig等體積生理鹽水。于末次給藥后1h，ip0.5%酚紅溶液(每只0.5 ml)，30 min后處死動(dòng)物，仰位固定，頸部拉直，解剖分離氣管，在氣管下穿一絲線以固定氣管插管用。將氣管插管(頭部磨平的7號(hào)針頭代替)從口腔處伸入，通過甲狀軟骨處插入氣管內(nèi)約0.3cm結(jié)扎固定。1ml注射器吸取5%NaHCO3溶液0.5 mL，通過針頭來回灌氣管3次，如此反復(fù)3次，即來回9次，收集并混合3次灌洗液，靜置離心，取上清液于546 nm波長處測定吸光度。

1.2.2 感毒清顆粒止咳作用研究-對(duì)濃氨水引咳所致咳嗽次數(shù)的影響 表2顯示，將禁食不禁水12 h的小鼠置于500ml玻璃鐘罩內(nèi)，內(nèi)放一棉球，向棉球中注入200μL氨水刺激小鼠引發(fā)咳嗽，以小鼠腹肌強(qiáng)烈收縮，同時(shí)張嘴呼氣為準(zhǔn)。以1 min內(nèi)咳嗽次數(shù)大于或等于3次判定為咳嗽模型初步篩選成功。將篩選合格的小鼠隨機(jī)分為5組，每組12只(給藥同1.2.1)。末次給藥1h后，在棉球上滴加200μL濃氨水，立即蓋緊鐘罩蓋，觀察記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2min內(nèi)咳嗽次數(shù)，2min后打開蓋再觀察小鼠在外界環(huán)境1min內(nèi)的咳嗽次數(shù)，3min內(nèi)的咳嗽次數(shù)相加作為咳嗽反應(yīng)總數(shù)。

1.2.3 感毒清顆粒對(duì)2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的影響 表3顯示，每天測大鼠體溫2次，連續(xù)3d，取體溫差異不高于0.3℃者用于實(shí)驗(yàn)。將篩選合格的50只大鼠隨機(jī)分為5組，每組10只(給藥同1.2.1)。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日每小時(shí)測體溫1次共2次，取均數(shù)作為基礎(chǔ)體溫。末次給藥后1h，每只大鼠背部皮下注射 2，4-二硝基苯酚 1ml/100g(15mg/kg)，每20min測定體溫1次，連續(xù)測定3h，記錄體溫?cái)?shù)據(jù)并計(jì)算體溫增加值。

1.2.4 感毒清顆粒對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響 表4顯示，選取基礎(chǔ)肛溫在38.5～39.6的家兔30只，雌雄各半，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d隨機(jī)分為5組，每組6只。給藥同1.2.1。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日每隔30min測體溫1次共3次，取均數(shù)作為基礎(chǔ)體溫。用無熱原的生理鹽水將內(nèi)毒素配制成600ng/ml，現(xiàn)用現(xiàn)配。末次給藥后1h，按600ng/kg劑量每只家兔耳緣靜脈注射內(nèi)毒素，每1h測定體溫1次，連續(xù)測定6h，記錄體溫?cái)?shù)據(jù)并計(jì)算體溫增加值。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 感毒清顆粒祛痰作用

表1顯示，與空白對(duì)照組比較，感毒清顆粒中劑量組OD值明顯高于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

表1 感毒清顆粒對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響(±s)

表1 感毒清顆粒對(duì)小鼠氣管酚紅排泌量的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:*P＜0.05

組別 例數(shù)(只) 劑量g/kg OD值空白對(duì)照組10 0.14±0.03鹽酸氨溴索組 10 13.5mg 0.21±0.07＊＊感毒清顆粒 10 8.1 0.14±0.02 10 4.05 0.19±0.04*10 2.025 0.14±0.03

2.2 感毒清顆粒止咳作用

表2顯示，與空白組比較，感毒清顆粒高、中、低劑量組咳嗽潛伏期顯著延長，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，尤其低劑量組結(jié)果極顯著(P＜0.001);高、中、低劑量組的咳嗽次數(shù)與空白組比較顯著減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)。

表2 感毒清顆粒對(duì)小鼠咳嗽的影響(±s)

表2 感毒清顆粒對(duì)小鼠咳嗽的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01

組別例數(shù)(只)劑量(g/kg)咳嗽潛伏期(s)咳嗽次數(shù)空白對(duì)照組12 15.17±14.46 19.25±8.02磷酸可待因組 12 4.05mg 101.83±74.44＊＊ 4.50±6.05＊＊感 毒 清 顆 粒 12 8.1 74.25±67.54* 4.00±3.74＊＊12 4.05 66.00 ±43.36* 5.17 ±4.63＊＊12 2.025 106.00 ±69.37＊＊＊ 3.42±4.58＊＊

2.3 感毒清顆粒對(duì)發(fā)熱大鼠體溫的作用

表3顯示，與空白對(duì)照組比較，感毒清顆粒高、中、低劑量組在 2，4-二硝基苯酚皮下注射后140min、160min體溫增加值顯著低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);180min時(shí)僅感毒清高劑量組較空白對(duì)照組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其余各時(shí)間點(diǎn)感毒清顆粒各劑量組與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表3 感毒清顆粒對(duì)2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的影響(±s)

表3 感毒清顆粒對(duì)2，4-二硝基苯酚致大鼠發(fā)熱的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001

組不同時(shí)間點(diǎn)體溫增加值(℃)60min 180min空 白 對(duì) 照 組 10 — 37.28±0.33 0.82±0.47 1.13±0.26 0.88±0.16 1.14±0.28 0.97±0.18 1.22±0.22 1.14±0.32 1.18±別例數(shù)(只)劑量g/kg正常體溫(℃)20min 40min 60min 80min 100min 120min 140min 1 0.26 1.08±0.29對(duì)乙酰氨基酚組 10 0.210 37.52±0.18 0.06±0.28＊＊＊ 0.10±0.39＊＊＊ 0.52±0.44* 0.23±0.39＊＊＊ 0.50±0.49＊＊ 0.60±0.23＊＊ 0.44±0.30＊＊＊ 0.53±0.25＊＊＊ 0.24±0.43＊＊＊感 毒 清 顆 粒 10 6.300 37.54±0.37 0.44±0.65 0.80±0.49 0.74±0.42 0.87±0.57 0.71±0.41 0.93±0.50 0.59±0.45＊＊ 0.74±0.41＊＊ 0.58±0.36＊＊10 3.150 37.31±0.28 0.55±0.31 0.78±0.53 1.03±0.34 0.97±0.34 0.91±0.36 0.96±0.49 0.81±0.24* 0.67±0.42＊＊ 0.91±0.22 10 1.575 37.52±0.30 0.79±0.37 1.15±0.37 0.95±0.22 1.10±0.25 0.77±0.21 0.94±0.36 0.75±0.32* 0.84±0.29*0.99±0.34

2.4 感毒清顆粒對(duì)發(fā)熱家兔體溫的作用

表4顯示，感毒清顆粒中劑量組與空白對(duì)照組比較，在家兔耳緣靜脈注射內(nèi)毒素4h時(shí)間點(diǎn)體溫顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在5h時(shí)間點(diǎn)高、中劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，到6h時(shí)間點(diǎn)僅高劑量組較空白組有明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。其余各時(shí)間點(diǎn)感毒清顆粒各劑量組與空白對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

咳嗽、咯痰和發(fā)熱是上呼吸道感染最常見的伴隨癥狀。目前認(rèn)為快適應(yīng)感受器 (rapidn adaption receptor，RAR)纖維是引起咳嗽反射主要的迷走傳入神經(jīng)亞型［2］，痰液是由于呼吸道發(fā)生炎癥病變時(shí)呼吸道液體成分改變而形成，包含黏液、異物、病原微生物、各種炎癥細(xì)胞及壞死脫落的黏膜上皮細(xì)胞等成分。痰液刺激呼吸道黏膜則引起咯痰;發(fā)熱則是外熱源刺激產(chǎn)生內(nèi)熱原，引起體溫調(diào)定點(diǎn)上移，產(chǎn)熱和散熱平衡被打破后的結(jié)果。中醫(yī)認(rèn)為，上呼吸道感染是由外邪侵襲所致，外邪束肺，肺失宣肅，一則導(dǎo)致“水之上源”功能失調(diào)，水聚成痰;二則痰液阻塞呼吸道，肺氣上逆而咳嗽;外邪侵襲，正邪相爭則發(fā)熱。感毒清顆粒具有清熱解表、益氣解毒的功效，適用于上呼吸道感染之熱毒壅肺、衛(wèi)氣不足證。黃芪具有抗病毒、提高機(jī)體免疫功能等藥理作用［3～5］，射干具有抗炎、抗病毒、抗過敏、止咳等作用［6］。本次研究結(jié)果表明，感毒清顆粒中劑量能夠促進(jìn)呼吸道酚紅的分泌量，與正常對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，高、中、低劑量組咳嗽潛伏期較空白對(duì)照組顯著延長，但3min內(nèi)咳嗽總數(shù)顯著減少(P＜0.001)，提示感毒清顆粒具有一定的止咳、祛痰作用;感毒清顆粒高、中、低劑量組在2，4-二硝基苯酚皮下注射后140min、160min體溫增加值顯著低于空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);180min時(shí)僅感毒清高劑量組較空白對(duì)照組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。在家兔耳緣靜脈注射內(nèi)毒素后，與空白對(duì)照組比較，感毒清顆粒中劑量組在4h時(shí)間點(diǎn)體溫升高值明顯低于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，在5h時(shí)間點(diǎn)高、中劑量組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，到6h時(shí)間點(diǎn)時(shí)高劑量組較空白組有明顯降低，其結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，提示感毒清具有一定解熱作用，推測其解熱作用可能不是直接效應(yīng)，可能與提高機(jī)體免疫功能有關(guān)。

表4 感毒清顆粒對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響(±s)

表4 感毒清顆粒對(duì)內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱的影響(±s)

注:與空白對(duì)照組比較:*P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001

組別例數(shù)(只)劑量1h 2h 3h 4h 5h 6h空 白 對(duì) 照 組 6 39.17±0.19 1.18±0.23 1.23±0.19 1.68±0.43 2 g/kg 基礎(chǔ)體溫 體溫增加值℃.05±0.16 1.70±0.18 1.12±0.15對(duì)乙酰氨基酚組 6 0.15 39.37±0.11 0.91±0.07 1.16±0.15 1.48±0.28 1.44±0.23* 1.09±0.32＊＊ 0.48±0.38*感 毒 清 顆 粒 6 4.5 39.13±0.17 1.05±0.32 1.23±0.37 1.63±0.45 1.77±0.37 1.23±0.34* 0.60±0.39*6 2.25 39.22±0.34 1.28±0.36 1.13±0.81 1.63±0.98 1.50±0.87* 1.27±0.49* 0.70±0.64 6 1.125 39.23±0.11 1.11±0.28 1.31±0.16 1.79±0.20 1.79±0.15 1.41±0.22 0.64±0.46

［1］熊敏，張蔭杰，徐世軍，等.感毒清顆?？寡祖?zhèn)痛作用研究［J］.中藥藥理與臨床，2012，28(3):89-91.

［2］Sant’Ambrogio G，Widdicombe J.Reflexes from airway rapidly adapting receptors［J］.Respir Physiol，2001，125(1-2):33-45.

［3］趙文，任永鳳.新疆黃芪抗病毒作用研究［J］.中國藥學(xué)雜志，2001，36(1):23-25.

［4］劉玉蓮，楊從忠.黃芪藥理作用概述［J］.中國藥業(yè)，2004，13(10):79.

［5］熊敏，張蔭杰，徐世軍.黃芪抗病毒作用研究進(jìn)展［J］.中藥與臨床，2012，3(4):50-53.

［6］齊建紅，李宏衛(wèi).123射干的化學(xué)成分、藥理作用及臨床應(yīng)用［J］.國外醫(yī)藥·植物藥分冊，2006，21(3):111-113.