王丹妮，姜 楓

(1.河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院艾滋病臨床研究中心，鄭州 450000;2.國(guó)家中醫(yī)藥管理局艾滋病重點(diǎn)研究室(扶正排毒)，鄭州 450000;3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院，廣西中醫(yī)(中西醫(yī)結(jié)合)艾滋病研究中心，南寧 530011)

無(wú)癥狀HIV感染期之“無(wú)癥狀”是指尚未出現(xiàn)艾滋病發(fā)病的典型癥狀。此期正邪相爭(zhēng)激烈，一旦邪盛正衰則各種疾病紛至沓來(lái)［1］。我們從“十五”科技攻關(guān)時(shí)便提出將無(wú)癥狀HIV感染期作為中醫(yī)藥治療艾滋病的黃金切入點(diǎn)［2］，使用扶正排毒片以培元解毒法為治療艾滋病無(wú)癥狀期的基本法則，以期達(dá)到提高患者生存質(zhì)量、延緩發(fā)病甚至終生帶毒不發(fā)病的全新理念，經(jīng)臨床驗(yàn)證療效確切［3］。為進(jìn)一步了解其對(duì)無(wú)癥狀HIV感染者免疫功能調(diào)節(jié)的影響，對(duì)32例患者治療前后CD4+計(jì)數(shù)和血清白細(xì)胞介素8(Interleukin-8，簡(jiǎn)稱IL-8)、可溶性白細(xì)胞介素2受體(soluble Interleukin-2 receptor，簡(jiǎn)稱 sIL-2R)水平變化進(jìn)行檢測(cè)，并與健康體檢者比較，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

治療組為培元解毒法組，32例來(lái)源于2009年6月在河南省南陽(yáng)市宛城區(qū)收集的未接受高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法的無(wú)癥狀HIV感染者，臨床診斷均符合國(guó)家衛(wèi)生部2005年頒布的《艾滋病診療指南》無(wú)癥狀HIV感染期診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］。培元解毒法治療組中男性17例，女性15例，年齡分布為32～65歲，平均(43.38±8.89)歲。服用中藥扶正排毒片(藥品批號(hào)L2006Z002)每次5片，每日3次，溫開(kāi)水沖服，共服用6個(gè)月。治療前后分別采集血漿標(biāo)本。22名健康對(duì)照的血漿標(biāo)本全部來(lái)自河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院體檢中心，其中男性13例，女性9例，年齡28～57歲，平均年齡(48.95±9.44)歲，無(wú)重要臟器疾患及各種病毒感染，肝、腎功能試驗(yàn)正常。2組在性別構(gòu)成、年齡上基線一致(年齡t=0.441，P=0.661;性別x2=0.188，P=0.665)，具有可比性。

1.2 觀察指標(biāo)及方法

CD4+淋巴細(xì)胞水平檢測(cè)使用美國(guó)BD公司生產(chǎn)的FACS Calibur流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。IL-8及sIL-2R水平檢測(cè)應(yīng)用熱電上海儀器有限公司生產(chǎn)的MK3型酶標(biāo)儀，于450nm處讀取數(shù)值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)量濃度制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找相應(yīng)的值。以上檢測(cè)由國(guó)家中醫(yī)藥管理局艾滋病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室工作人員負(fù)責(zé)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，取α=0.05水準(zhǔn);基礎(chǔ)值的均衡性分析采用t檢驗(yàn)和χ2檢驗(yàn)，對(duì)數(shù)值變量采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，治療組療前療后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，治療組和對(duì)照組比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)并做相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 培元解毒法治療組治療前后CD4+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)變化比較

表1顯示，32例患者治療后CD4均數(shù)由治療前的(368.63±111.54)個(gè)/mm3上升為(412.72±159.63)個(gè)/mm3。治療組32例，有效15例，穩(wěn)定10例，無(wú)效7例，總有效率78.13%。

2.2 治療前后血清IL-8水平變化比較

表2顯示，治療前治療組血清IL-8水平明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.05);治療6個(gè)月后與治療前比較明顯下降(P＜0.05)，但仍高于健康對(duì)照組;治療后與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 治療前后血清sIL-2R水平變化比較

表2顯示，治療前治療組血清sIL-2R水平明顯高于健康對(duì)照組(P＜0.05);治療6個(gè)月后與治療前比較雖有下降但仍高于健康對(duì)照組，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);治療后與健康對(duì)照組比較，差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.4 直線相關(guān)分析

治療前sIL-2R與CD4+淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)呈負(fù)相關(guān)，CD4與 sIL-2R療前相關(guān)度(r=－0.461，P=0.008＜0.05)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。

表1 培元解毒組治療前后CD4+計(jì)數(shù)水平(個(gè)/mm3，±s)及有效率比較

表1 培元解毒組治療前后CD4+計(jì)數(shù)水平(個(gè)/mm3，±s)及有效率比較

注:培元解毒組治療后與治療前CD4+計(jì)數(shù)平均升高44.09個(gè)/mm3，有效率78.13%

例數(shù) 治療前 治療后 有效 穩(wěn)定 無(wú)效 有效率(%)培元解毒組32 368.63±111.54 412.72±159.63 15 10 7 78.13 t=－1.888 P =0.068

表2 健康對(duì)照組與培元解毒組治療前后IL-8、sIL-2R(±s)(pg/ml)

表2 健康對(duì)照組與培元解毒組治療前后IL-8、sIL-2R(±s)(pg/ml)

注:治療組治療后與治療前比較:*P=0.004＜0.05，＊＊P=0.867＞0.05

IL-8 sIL-2R組 別 例數(shù) 治療前 治療后 治療前 治療后培元解毒組 32 8.61±5.25 6.03±5.05*1267.91±612.28 1257.01±436.31＊＊健康對(duì)照組 22 5.50±2.54 839.35±380.97 2組P值比較0.013 0.649 0.003 0.001

3 討論

培元解毒治則是基于病因病機(jī)辨證提出的，是通過(guò)國(guó)家“973”重點(diǎn)課題資助項(xiàng)目“艾滋病中醫(yī)病因及發(fā)病機(jī)制的研究”驗(yàn)證的。艾毒是一種新發(fā)疫毒，經(jīng)血絡(luò)進(jìn)入人體，在體內(nèi)化濕生熱，表現(xiàn)為毒、濕、熱等病邪特征。艾毒直接損傷并漸進(jìn)性地消耗人體元?dú)?，?dǎo)致多臟腑之氣虧損，進(jìn)而氣化失常，繼發(fā)痰飲、瘀血、毒聚等實(shí)邪。早期即表現(xiàn)為虛實(shí)夾雜證候，實(shí)質(zhì)為本虛標(biāo)實(shí)。其虛實(shí)交錯(cuò)、互為因果，終致變證叢生，命元諸臟衰竭，陰陽(yáng)離決而亡。因此，艾毒入絡(luò)是艾滋病的直接病因，伏而傷元是其核心病機(jī)，培元解毒是其基本治則［5、6］。扶正排毒片由黃芪、西洋參、女貞子、山茱萸、白花蛇舌草、連翹、生白術(shù)、防風(fēng)、甘草等組成。黃芪與西洋參合用，在藥性上一涼一溫，從歸經(jīng)上涵蓋心、肺、脾、肝、腎，通過(guò)補(bǔ)益五臟之氣從而達(dá)到“培元”之效果。連翹、白花蛇舌草、山茱萸三藥合用，歸經(jīng)既考慮到五臟、三焦，更重要的是三藥分別入小腸、大腸、膀胱，使?jié)駸岬靡詮亩闩懦?，從而起到“清熱解毒利濕”之功效?，F(xiàn)代藥理研究顯示，西洋參、黃芪、連翹、白花蛇舌草等合用可增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，抗HIV病毒、抗腫瘤等。在以前的臨床研究［3］和本次研究中［7］已觀察到，培元解毒中藥干預(yù)無(wú)癥狀HIV感染者在癥狀體征、免疫學(xué)指標(biāo)、生存質(zhì)量等方面的療效，且臨床用藥安全，但對(duì)該藥的作用機(jī)理尚未開(kāi)展深入研究。我們?cè)噲D從免疫激活角度尋找突破口，因此本研究通過(guò)對(duì)無(wú)癥狀HIV感染者治療前后CD4+計(jì)數(shù)和血清IL-8、sIL-2R水平進(jìn)行探索。

人體感染HIV后出現(xiàn)的免疫學(xué)異?？梢愿爬椋?1］:① CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量減少;② CD4+T淋巴細(xì)胞功能障礙;③異常免疫激活。異常免疫激活可以造成CD4+T細(xì)胞的功能喪失和數(shù)量耗竭［8］，因此增加CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量和功能，抑制異常免疫激活是很有必要的。

HIV主要侵犯人CD4+淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致其數(shù)量上的減少和功能缺陷，CD4+是維護(hù)機(jī)體免疫功能的重要細(xì)胞，是免疫反應(yīng)的中心細(xì)胞，其數(shù)量及功能變化是評(píng)價(jià)疾病發(fā)展和藥物療效的重要指標(biāo)。本研究CD4+計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，治療后CD4+計(jì)數(shù)與療前在α=0.05水準(zhǔn)上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。但治療6個(gè)月后CD4+計(jì)數(shù)平均升高44.09/mm3，提示扶正排毒片具有穩(wěn)定或提高感染者CD4+計(jì)數(shù)的作用。

酶聯(lián)免疫檢測(cè)結(jié)果顯示，治療前培元解毒治療組的IL-8、sIL-2R水平顯著高于健康對(duì)照組(P=0.013或0.003＜0.05)，證實(shí)無(wú)癥狀HIV感染者確實(shí)存在異常免疫激活現(xiàn)象，這與Sodora DL［9］提出的人體感染HIV后出現(xiàn)重要的免疫學(xué)異常改變與異常免疫激活是一致的。IL-8是一種多源性炎性細(xì)胞因子，對(duì)中性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞有強(qiáng)烈趨化作用，并釋放活性物質(zhì)，加強(qiáng)免疫反應(yīng)，造成組織損傷。檢測(cè)結(jié)果顯示，無(wú)癥狀HIV感染者血清IL-8在療前與健康對(duì)照組在α=0.05的水平上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且血清IL-8水平明顯高于非治療組，與以往研究報(bào)道急性炎癥應(yīng)答一致［10］。其升高的機(jī)理可能是無(wú)癥狀HIV感染者本身也可以刺激單核細(xì)胞、上皮細(xì)胞等分泌IL-8，使血清中IL-8水平升高，是否還有其他原因?qū)е翴L-8水平升高尚待進(jìn)一步的研究與探討。sIL-2R是1985年發(fā)現(xiàn)的重要免疫抑制因子，在許多T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)性疾病中是增加的［11］。檢測(cè)結(jié)果顯示，無(wú)癥狀HIV感染者血清sIL-2R在療前與健康對(duì)照組在α=0.05的水平上差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血清sIL-2R水平高于健康對(duì)照組，與以往研究報(bào)道一致［12］。其升高的機(jī)理可能是無(wú)癥狀HIV感染者免疫功能受損時(shí)，激活的T淋巴細(xì)胞對(duì)IL-2Rα 鏈的表達(dá)失去控制［13，14］，活化的 T 淋巴細(xì)胞膜mIL-2Rα鏈成分脫落于血清及其他體液中，造成sIL-2R水平增高。

治療后數(shù)據(jù)顯示，IL-8水平明顯下降與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004＜0.05)，說(shuō)明培元解毒法對(duì)血清IL-8有較好的干預(yù)效果。治療后sIL-2R水平略有下降，與治療前比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.867＞0.05)，但仍高于健康對(duì)照組(P=0.001＜0.05)，說(shuō)明異常免疫激活中，sIL-2R與無(wú)癥狀HIV感染者更加密切，與其有關(guān)的細(xì)胞免疫參與其發(fā)病的全過(guò)程，可以作為了解無(wú)癥狀HIV感染者體內(nèi)細(xì)胞免疫狀態(tài)、治療效果及預(yù)后判斷的重要指標(biāo)之一。

CD4與 sIL-2R前相關(guān)度(r=－0.461，P=0.008＜0.05)呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，這與馮鮮妮等報(bào)道［12］sIL-2R隨著HIV感染者CD4的下降而進(jìn)行性增高，CD4與sIL-2R呈負(fù)相關(guān)(r=－0.656)是一致的。說(shuō)明細(xì)胞因子充分參與了T細(xì)胞的活化，并在T細(xì)胞激活中發(fā)揮著重要作用，且能夠彼此提供預(yù)后的信息。

據(jù)報(bào)道，在許多免疫系統(tǒng)被激活的炎癥性疾病中有變化，且與機(jī)體免疫狀態(tài)、病情輕重及預(yù)后密切相關(guān)。本文從免疫激活的角度入手，研究中醫(yī)藥治療艾滋病療效機(jī)制是一個(gè)新的熱點(diǎn)。檢測(cè)無(wú)癥狀HIV感染者血清IL-8、sIL-2R水平變化，對(duì)了解病情、指導(dǎo)臨床實(shí)踐和療效判定均具有重要意義，可以作為了解無(wú)癥狀HIV感染者體內(nèi)細(xì)胞免疫狀態(tài)、治療效果及預(yù)后判斷的參考指標(biāo)之一，同時(shí)說(shuō)明培元解毒法立論的正確性。

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