翁厚光，曹維克，張迎梅，吳尚農(nóng)

（南京醫(yī)科大學附屬淮安第一醫(yī)院，江蘇 淮安223300）

原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）是一種病因尚不明確、慢性進行性膽汁淤積性自身免疫性肝臟疾病?？赡茉谝欢ㄟz傳背景下，由于持續(xù)性感染（細菌、病毒、真菌等）、環(huán)境因素或毒物作用等，導致免疫調(diào)節(jié)紊亂和自身免疫反應。病理學特點為匯管區(qū)炎癥及免疫介導的肝內(nèi)膽管的破壞，最終造成肝纖維化、肝硬化及肝衰竭［1］。臨床上多見于40－60歲女性，實驗室檢查除堿性磷酸酶（ALP）、γ－谷氨酰轉肽酶（GGT）等明顯升高及抗線粒體亞型－丙酮酸脫氫酶復合物（抗AMA－M2抗體）陽性外。還有抗M2－3E（BPO）抗體、抗早幼粒細胞性白血病（PML）抗體、抗核包膜蛋白（GP210）抗體、抗多核點（SP100）抗體等自身抗體陽性。本文擬對62例經(jīng)病理檢查確診為PBC的患者進行自身抗體聯(lián)合檢測并分析其臨床意義，以提高對本病的早期診斷。

1 資料與方法

1．1 研究對象 收集我院2005年3月至2010年5月原發(fā)性膽汁性肝硬化患者62例血清標本，其中男6例，女56例，年齡38－65歲，平均年齡51歲；血清γ－谷氨酰轉肽酶（GGT）（483．0±75．3）U／L、堿性磷酸酶（ALP）（538．0±83．3）U／L。排除：（1）病毒性肝炎；（2）肝內(nèi)外占位、梗阻及原發(fā)性硬化性膽管炎；（3）藥物性及酒精性肝損害；（4）肝豆狀核變性及血色病。PBC診斷標準符合2009年美國肝病學會PBC診斷指南［2］。同時收集乙肝后肝硬化患者30例（疾病對照組）及健康體檢者50例（正常對照組）血清標本。病毒性肝炎病原學分型符合2000年9月西安會議病毒性肝炎防治方案中診斷標準［3］。正常對照組所有對象均無心、肝、肺等器官疾患，肝功能檢測無異常。PBC患者與兩對照組年齡、性別差異無顯著性。

1．2 檢測項目及檢測方法 免疫印跡法檢測包括：抗AMA－M2抗體、抗 M2－3E抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體、抗LKM－1抗體、抗LC－1抗體、抗SLA／LP抗體等自身抗體。試劑為德國歐蒙醫(yī)學實驗診斷股份公司產(chǎn)品。操作按試劑盒說明進行。結果判定：用標準對照膜條圖觀察特定區(qū)域膜條，清晰可見著色者判為陽性。

1．3 肝臟穿刺活檢組織病理學檢查 B超引導下穿刺，標本長1．5－2．0cm，鏡下包括至少6個匯管區(qū)，10%甲醛固定，石蠟包埋，HE及Masson染色。由我院病理科經(jīng)驗豐富的主任醫(yī)師采用統(tǒng)一標準一次性閱片。

1．4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS15．0統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2．1 各種自身抗體陽性率檢測結果 見表1。

抗AMA－M2抗體對PBC診斷的敏感度82．3%，特異度91．2%；抗 M2－3E抗體對PBC診斷的敏感度90．3%，特異度93．8%；抗SPl00抗體對PBC診斷的敏感度35．5%，特異度98．8%；抗PML抗體對PBC診斷的敏感度29．0%，特異度98．8%；抗GP210抗體對PBC診斷的敏感度41．9%，特異度97．5%，由此說明，抗 AMA－M2抗體、抗3E抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體的聯(lián)合檢測對PBC的診斷有著較高的應用價值，對于PBC的篩查可起到重要作用。

表1 各種自身抗體陽性檢出率 ［%（例）］

2．2 自身抗體陽性和陰性患者肝功能衰竭的發(fā)生率 62例PBC患者中，抗GP210抗體陽性患者肝功能衰竭的發(fā)生率明顯高于抗體陰性患者（P＜0．05）。而抗 AMA－M2 抗 體、抗 SPl00 抗體、抗PML抗體陽性和陰性患者組之間肝功能衰竭發(fā)生率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05）。見表2。

表2 各種自身抗體與肝功能衰竭發(fā)生率 （%）

3 討論

PBC屬于自身免疫性肝病之一，近年來隨著國內(nèi)外對此病的研究和診斷技術的提高以及臨床醫(yī)生對該病認識程度的加深，PBC在我國肝病患者中檢出比例逐年增多。其早期可無癥狀，部分患者僅有乏力、納差等非特異性表現(xiàn)。對該病早期的積極治療不僅可以延緩病程的發(fā)展，而且一定程度上可以改善預后。很多患者發(fā)現(xiàn)確診時，已達到后期嚴重的肝硬化及其并發(fā)癥。因此早期診斷至關重要。

抗線粒體抗體M2亞型是PBC的特異性抗體。AMA－M2的靶抗原主要是抗線粒內(nèi)膜上的丙酮酸脫氫酶復合體（PDC－E2）、酮戊二酸脫氫酶復合體（OGDC－E2）和支鏈二氧酸脫氫酶復合體（BCOADC－E2），3個靶抗原（BPO）聯(lián)合檢測，其敏感性和特異性都會升高［4］。本研究發(fā)現(xiàn)，在PBC的診斷中以天然M2抗原和BPO融合蛋白M2－3E為靶抗原的免疫印跡法比傳統(tǒng)的僅以PDC為靶抗原的免疫印跡法有更高的敏感性和特異性。此結果與文獻報道一致［5］。

核點型抗核抗體主要的靶抗原包括：①SP100蛋白，主要存在于PBC患者中的一種轉錄激活蛋白；②早幼粒細胞白血病蛋白（PML），為細胞轉化和生長抑制蛋白，異常表達在早幼粒細胞白血病細胞，最早在急性早幼粒白血病患者的白血病細胞中發(fā)現(xiàn)，是和維甲酸受體融合的蛋白。據(jù)文獻報道，PBC中抗SP100抗體的陽性率大約為35%，在排除了其他疾病的可能性，并且符合PBC的臨床表現(xiàn)的情況下，特別是對于抗線粒體抗體陰性的患者來說，抗SP100抗體對PBC的診斷具有高度的特異性；約90%的PBC患者可同時檢測到抗SP100抗體和抗PML抗體，兩者具有相同的敏感性和特異度，且出現(xiàn)抗SP100抗體和抗PML抗體的PBC患者病情進展快，預后較差。以上說明，在PBC中這種特殊的抗SP100抗體和抗PML抗體實際上預示了PBC的早期診斷，提高了PBC檢出率，并且具有高度特異性，是檢測PBC的重要診斷標志［6，7］。本研究結果顯示：抗SP100抗體和抗PML抗體的敏感性分別為35．5%和29．0%、特異度均為98．8%，與文獻報道基本一致。

GP210為核孔復合物的主要相關糖蛋白，核孔區(qū)域是PBC抗體識別核包膜自身抗原的另一個區(qū)域，25%的PBC患者存在抗核包膜蛋白自身抗體，GP210抗體診斷PBC的特異性為99%，被認為是PBC的高特異性抗體［8，9］。核孔復合體具有將核質(zhì)轉運至細胞質(zhì)及維持細胞功能的作用，從理論上分析，該位點受損可直接影響細胞功能并加重病情，因此抗GP210抗體與PBC的嚴重程度和預后具有更為緊密的相關性。抗GP210抗體與嚴重的界面性肝炎和小葉炎癥有關，陽性提示易進展為肝衰竭［10］。本次研究結果表明，抗GP210抗體的敏感度41．9%、特異度97．5%，抗GP210抗體陽性患者中肝功能衰竭的發(fā)生率為30．8%，明顯高于抗GP210抗體陰性患者，僅為2．8%，與文獻報道相符。而與PBC相關的自身抗體：抗AMA－M2抗體、抗SPl00抗體、抗PML抗體陽性與陰性患者中肝功能衰竭的發(fā)生率差異無統(tǒng)計學意義（P＞0．05），表明它們與該病的預后并不相關。因此抗GP210抗體不僅可協(xié)助早期診斷PBC，對該病的預后亦有重要意義。

綜上所述，抗AMA－M2抗體、抗 M2－3E抗體、抗SP100抗體、抗PML抗體、抗GP210抗體檢測在PBC患者血清中具有很高的特異度和相當?shù)拿舾卸龋勺鳛镻BC診斷的高度特異性抗體，聯(lián)合檢測極大地增加了PBC的診斷率，使臨床不容易漏診。將使更多的PBC患者得到早期診斷和正確治療，并為進一步開展PBC發(fā)病機制及臨床研究奠定基礎。

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