陶文雁，黃可欣，石 搏，黃可敬，張 艷

（1．通遼市科左后旗人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼028007；2．吉林大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院形態(tài)學(xué)實驗中心；3．吉林省長春市中心血站；4．內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院）

異氟醚是臨床上常用的吸入麻醉藥之一［1］，它有麻醉誘導(dǎo)、蘇醒快、無致吐作用、循環(huán)穩(wěn)定、肌松良好、降低顱內(nèi)壓、擴張冠狀動脈、有利于心肌缺血的患者等優(yōu)點，但臨床上常有患者抱怨麻醉手術(shù)后學(xué)習(xí)記憶能力下降。目前異氟醚單純麻醉后是否與學(xué)習(xí)記憶能力下降有關(guān)尚不明確，本實驗旨在通過研究異氟醚單純麻醉后對成年大鼠學(xué)習(xí)記憶和腦組織活性的影響，為異氟醚進一步廣泛應(yīng)用于臨床奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1．1 實驗動物和主要試劑 240±20g健康雄性Wistar大鼠30只，由吉林省藥品檢驗所提供（合格證號960101032）；TchE、MAO、LPO 和SOD試劑盒購于南京建成生物有限公司。

1．2 實驗儀器 Morris水迷宮（成都泰盟科技有限公司），722分光光度計（南京實驗儀器設(shè)備公司），F(xiàn)－MCI氣體監(jiān)測儀（芬蘭 Datex－Ohmeda 公司），BenViewT8 監(jiān) 護 儀 （芬 蘭 Datex－Ohmeda 公司）。

1．3 實驗分組及實驗方法 健康成年雄性Wistar大鼠30只，隨機分為2組，空白對照組15只和異氟醚麻醉組15只。麻醉組給予2%異氟醚和40%氧氣誘導(dǎo)及維持麻醉3h，對照組單純吸入含40% 氧氣的空氧混合氣體3h；大鼠麻醉干預(yù)結(jié)束24h后開始每天上午水迷宮訓(xùn)練連續(xù)7d，第8d進行Morris水迷宮測試，測試潛伏期、經(jīng)過平臺次數(shù)和平臺象限停留時間；測試結(jié)束后處死大鼠取腦組織，采用生化方法檢測乙酰膽堿酯酶（TchE）、單胺氧化酶（MAO）、超氧化物歧化酶（SOD）和脂質(zhì)過氧化物活性（LPO）。

1．4 麻醉方法 將大鼠置于自制的透明麻醉箱中，箱內(nèi)裝有干燥劑和二氧化碳吸附劑。麻醉箱位于半緊閉呼吸環(huán)路中，在大鼠放入之前箱內(nèi)預(yù)充2%異氟醚，氧氣濃度40%，并對麻醉箱中氧氣、二氧化碳、異氟醚等氣體的濃度進行持續(xù)監(jiān)測。麻醉過程中保持大鼠右側(cè)臥位，以避免誤吸和保持呼吸道通暢；通過BenViewT8監(jiān)護儀監(jiān)測大鼠腳趾脈搏、氧飽和度及心率；觀察呼吸幅度和頻率，保持口唇與腳趾黏膜顏色紅潤。麻醉過程保持大鼠自主呼吸，不對大鼠進行任何有創(chuàng)操作。麻醉結(jié)束后，將大鼠拿出麻醉箱，吸入空氣，自然蘇醒。所有大鼠順利完成以上操作，無意外發(fā)生。

1．5 指標檢測

1．5．1 逃避潛伏期 每天上午8點開始測試，連續(xù)測試4天，分別順時針從水池東南西北4個入水點將大鼠背向平臺放入水池，觀察并記錄大鼠找到并爬上平臺所需的時間，即逃避潛伏期。60s內(nèi)找不到平臺者，將其引上平臺，每游完一次休息至少15s。

1．5．2 經(jīng)過平臺次數(shù)和平臺象限停留時間 潛伏期測試結(jié)束后，撤去平臺，將大鼠從原平臺相對的位置背向平臺放入池中，通過系統(tǒng)記錄并分析大鼠在60s內(nèi)的游泳軌跡，計算大鼠經(jīng)過平臺所在位置的次數(shù)和在平臺象限游泳時間。

1．5．3 乙酰膽堿酯酶（TchE）和單胺氧化酶（MAO） 取腦組織勻漿，按試劑盒操作測定TchE和MAO活性。

1．5．4 超氧化物歧化酶（SOD）和脂質(zhì)過氧化物含量（LPO） 取腦組織勻漿，按試劑盒操作測定LPO和SOD含量。

1．6 統(tǒng)計學(xué)分析 各指標實驗數(shù)據(jù)均以ˉx±s表示，應(yīng)用SPSS13．0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，采用t檢驗分析。

2 結(jié)果

2．1 逃避潛伏期的結(jié)果 異氟醚麻醉組與對照組比較無顯著差異（P＞0．05），見表1。

2．2 經(jīng)過平臺次數(shù)和平臺象限停留時間的結(jié)果 異氟醚麻醉組與對照組比較無顯著差異（P＞0．05），見表1。

表1 各組大鼠逃避潛伏期、平臺經(jīng)過次數(shù)和平臺象限停留時間的比較

2．3 乙酰膽堿酯酶（TchE）和單胺氧化酶（MAO）活性結(jié)果 異氟醚麻醉組與對照組比較無顯著差異（P＞0．05），見表2。

2．4 超氧化物歧化酶（SOD）和脂質(zhì)過氧化物活性（LPO）含量結(jié)果 異氟醚麻醉組與對照組比較無顯著差異（P＞0．05），見表2。

表2 各組大鼠乙酰膽堿酯酶、單胺氧化酶、超氧化物歧化酶和脂質(zhì)過氧化物活性的比較

3 討論

學(xué)習(xí)指人和動物獲得外界知識的神經(jīng)過程；記憶指將獲得信息處理、組合、儲存和讀出的神經(jīng)過程［2］。學(xué)習(xí)和記憶是相互依存，使人和動物的行為對特定的環(huán)境條件發(fā)生適應(yīng)性變化［3］。吸入麻醉藥異氟醚是常用的麻醉劑，我們在日常工作中經(jīng)常會被患者或家屬問及麻醉后是否會影響患者的智力。因此研究麻醉藥對麻醉后學(xué)習(xí)記憶的影響具有重要意義。在本實驗中，麻醉組和對照組比較測試潛伏期、經(jīng)過平臺次數(shù)和平臺象限停留時間均無顯著差異（P＞0．05），此結(jié)果提示單純異氟醚全身麻醉不影響成年大鼠麻醉后學(xué)習(xí)記憶能力。本研究結(jié)果與Butterfield［4］等關(guān)于異氟醚重復(fù)麻醉對大鼠麻醉后認知功能影響的研究結(jié)果一致，該研究認為單純麻醉不會導(dǎo)致大鼠認知能力受損。本實驗中，我們僅使用異氟醚麻醉大鼠和采用無創(chuàng)監(jiān)測，大鼠在麻醉過程中保留自主呼吸，避免了不同藥物、氣管插管和手術(shù)等有創(chuàng)操作及術(shù)后疼痛對麻醉后學(xué)習(xí)記憶的影響。

膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿是重要的促進學(xué)習(xí)記憶的神經(jīng)遞質(zhì)之一，TchE是他的水解酶，直接參與植物神經(jīng)調(diào)節(jié)、大腦思維、記憶等重要功能，其活性變化可間接反應(yīng)腦內(nèi)乙酰膽堿的代謝情況［5］；MAO能催化體內(nèi)單胺類物質(zhì)的氧化脫氨基作用，其活性大小與腦組織單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平密切相關(guān)［6］；同時SOD是機體內(nèi)清除活性氧／自由基的第一道防線，LPO反映了機體脂質(zhì)受活性氧／自由基攻擊受損的程度，SOD是以氧自由基為底物的酶，有抗疲勞、抗衰老、抗氧化、抗腫瘤、抗炎癥等重要作用；因此通過LPO和SOD含量的測定能反應(yīng)機體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度和氧自由基含量［7］；本實驗的研究結(jié)果顯示，麻醉組和對照組比較，腦組織TchE、MAO、SOD和LPO活性亦無顯著差異（P＞0．05），因此綜上所述，在本實驗條件下，異氟醚對成年大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力及腦組織活性無明顯影響，由于動物實驗的局限性及學(xué)習(xí)記憶能力受到多因素的影響，異氟醚對學(xué)習(xí)記憶的影響仍需進一步研究。

［1］謝小娟，袁江永．異氟醚麻醉對腦內(nèi)ERK1／2和PKCγ磷酸化水平的影響［J］．細胞與分子免疫學(xué)志，2009，25．（9）：847．

［2］王躍春．Y型電迷宮在大鼠學(xué)習(xí)記憶功能測試中的合理運用［J］．中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005，14（1）：69．

［3］王躍春．大鼠Y型迷宮測試法的篩選與優(yōu)化［J］．中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005，14（1）：50．

［4］Butterfield NN，Graf P，Ries C，et al．The effect of repeated isoflurane anesthesia on spatial and psychomotor performance in young and aged mice［J］．Anesth Analg，2004，98（5）：1305．

［5］宋 艷，張 莉，郜 翔，等．背景音樂對成年大鼠空間長時學(xué)習(xí)記憶的影響［J］．西安交通大學(xué)學(xué)報，2008，29（2）：134．

［6］Haslam C，Cook M ．Striking a chord with amnesic patients：Evidence that song facilitates memory［J］．Neurocase，2002，8（6）：453．

［7］黃可欣，李冬梅，聶毓秀，等．口服低劑量硝酸鑭對小鼠心臟抗氧化能力的影響［J］．微量元素與健康研究，2003，20（4）：1．