姜素芳，胡姣艷 ，何麗華，李紅蘋

（湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410013）

鹽酸青藤堿（sinomenine hydrochloride）具有抗炎、抗心率失常、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)咳等作用，主治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等各種風(fēng)濕病以及心率失常，臨床療效確切[1]。該藥口服制劑的胃腸道不良反應(yīng)較大，生物利用度低，注射劑半衰期短，需頻繁給藥[2]。因此，凝膠、帖片等透皮給藥制劑在給藥方式上有著一定的優(yōu)勢。但普通的透皮給藥系統(tǒng)中，致密的角質(zhì)層嚴(yán)重阻礙了藥物的透皮速率和透皮量，因此研究強(qiáng)效安全的透皮促進(jìn)方法成為目前透皮研究的熱點。醇質(zhì)體是由磷脂、乙醇、水組成的新型的具有脂質(zhì)體雙分子層結(jié)構(gòu)的囊泡給藥載體，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)醇質(zhì)體可促進(jìn)藥物穿透皮膚并能增加藥物在皮膚中的蓄積[3-4]。為此，本試驗將鹽酸青藤堿制成醇質(zhì)體凝膠劑，并制定了初步的質(zhì)量控制方法。

1 .儀器與試藥

鹽酸青藤堿(HCSN，湖南正清制藥有限公司，含量 98.7%)；卵磷脂(德國Lipoid公司)；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為自制重蒸餾水。探針式超聲儀（美國Branson公司）；78HW-1型恒溫磁力攪拌器 (江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)；1101型高效液相色譜儀(美國 安捷倫)。

2 處方與制備

2.1 鹽酸青藤堿醇質(zhì)體的制備

采用注入法制備：稱取處方量的鹽酸青藤堿和磷脂，用無水乙醇溶解，置于磁力攪拌器上，在密閉條件下邊攪拌邊緩慢細(xì)流注入磷酸鹽緩沖液，繼續(xù)攪拌30分鐘，于冰水浴中探頭式超聲30 s(超聲3 s，停 2 s)，以 0.22 μm 的微孔濾膜濾過，即得鹽酸青藤堿醇質(zhì)體。

2.2 正交試驗篩選處方和工藝

根據(jù)單因素考察結(jié)果，選擇對醇質(zhì)體的制備影響較大的三個主要因素：磷脂與鹽酸青藤堿的質(zhì)量比（A）、磷酸鹽緩沖液（PBS）的 PH 值（B）、乙醇體積分?jǐn)?shù)（C）進(jìn)行正交設(shè)計，每個因素取三個水平，以包封率（E%）為考察指標(biāo)，按 L9（34）安排正交試驗。因素水平見表1，結(jié)果見表2。

表1 因素與水平

表2 L9（34）正交設(shè)計表及實驗結(jié)果

由表2可知，各影響因素的影響大小依次為：A＞C＞B。最佳的工藝組合為A3C1B2，即磷脂與鹽酸青藤堿的質(zhì)量比為10:1；乙醇體積分?jǐn)?shù)為30%；磷酸鹽緩沖液pH值為6.8。在此優(yōu)化條件下制備3批鹽酸青藤堿醇質(zhì)體，測得藥物平均包封率為62.8%。

2.3 鹽酸青藤堿醇質(zhì)體凝膠的制備：稱取0.5g卡波姆934,置于10mL蒸餾水中，于室溫放置過夜，充分溶脹，加三乙醇胺調(diào)pH至中性使成凝膠狀，即得空白凝膠基質(zhì)。將已制備的醇質(zhì)體混懸液與空白凝膠基質(zhì)以1:1的比例研和均勻，即得含鹽酸青藤堿0.2%的醇質(zhì)體凝膠。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀

本品為淡黃色透明凝膠，凝膠均勻細(xì)膩，稠度適宜，涂展性好。

3.2 pH值

取本品2g，加20mL水，攪勻，測定3批樣品的pH值分別為 6.82，6.87，6.86，符合相關(guān)規(guī)定。

3.3 含藥醇質(zhì)體形態(tài)觀察

將鹽酸青藤堿醇質(zhì)體樣品用30%乙醇溶液稀釋適當(dāng)?shù)谋稊?shù)，用磷鉬酸負(fù)染色法染色后，固定于銅絲網(wǎng)格上，置于透射電子顯微鏡下觀察，醇質(zhì)體為近球狀小囊泡，形態(tài)圓整，粒徑小而均勻。鹽酸青藤堿醇質(zhì)體透射電鏡照片見圖1。

圖1 鹽酸青藤堿醇質(zhì)體電鏡照片（×20000）

3.4 含量測定

3.4.1 色譜條件

高效液相色譜法的色譜條件為：Hypersil GOLD C18柱 (250 mm×4.6 mm，5 μm)； 流動相為乙腈-0.01mol/LNaH2PO4(15:85)；柱溫為30℃；體積流量為1 mL/min；檢測波長為266 nm；進(jìn)樣量為20 μL。此條件下輔料對藥物測定無干擾，方法可行。空白醇質(zhì)體凝膠和鹽酸青藤堿醇質(zhì)體凝膠的色譜行為見圖2。

圖2 高效液相色譜圖

3.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取干燥至恒重的鹽酸青藤堿對照品10mg,置50mL棕色容量瓶中,用流動相溶解并稀釋至刻度,得濃度為0.2 mg/mL的對照品儲備液。分別精密吸取儲備液 0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL于10 mL棕色容量瓶中,加流動相至刻度,搖勻,得濃度為 5、10 、20 、30 、40 、60 、80μg/mL的系列溶液,分別取20μL進(jìn)樣,以濃度 (C)為橫坐標(biāo),峰面積 (A)為縱坐標(biāo),回歸,得回歸方程:A=17.354 C+2.307,r=0.9999,線性范圍為5～80μg/mL。

3.4.3 回收率試驗

分別精密稱取高，中，低已知含量的鹽酸青藤堿醇質(zhì)體，加至空白凝膠中，攪拌均勻，即得不同濃度的鹽酸青藤堿醇質(zhì)體凝膠，分別取凝膠約0.5g，按"3.4.4"項下方法處理，測定低、中、高濃度的回收率，結(jié)果詳見表3。

表3 回收率實驗結(jié)果（n=6）

3.4.4 樣品含量測定

準(zhǔn)確稱定鹽酸青藤堿醇質(zhì)體凝膠0.5g，置于25ml容量瓶中，加無水乙醇適量，超聲并振搖使基質(zhì)分散、鹽酸青藤堿溶解，再用無水乙醇稀釋至刻度，過濾，取20μL續(xù)濾液進(jìn)樣，另精密稱取鹽酸青藤堿對照品適量，用無水乙醇配成濃度為40μg/mL的對照品溶液，同法測定，以外標(biāo)法計算含量。結(jié)果三批樣品的標(biāo)示百分含量分別為97.36%，99.08%，98.65%。

3.5 醇質(zhì)體包封率測定

精密吸取1mL醇質(zhì)體混懸液置于透析袋中,封口，將透析袋浸入20 mL pH6.8磷酸鹽緩沖液中，置于25℃恒溫水浴中振蕩，每2h更換1次透析介質(zhì)，將所換出的透析液取20μL進(jìn)樣分析，計算鹽酸青藤堿游離藥物累積透出量W游。另取相同濃度鹽酸青藤堿水合介質(zhì)溶液1 mL于透析袋,同上平行操作，8h已透出100%，按8 h透析完全,計算包封率=(1-W游/W總)×100%，結(jié)果，三批樣品的包封率分別為61.2%，63.3%和63.8%。

3.6 初步穩(wěn)定性實驗

取鹽酸青藤堿醇質(zhì)體凝膠10g，裝入帶刻度的離心管中，以2500r/min離心20min。觀察樣品是否出現(xiàn)分層現(xiàn)象。另將樣品10g裝于俱塞瓶內(nèi)，置于60℃烘箱中，恒溫6h進(jìn)行耐熱穩(wěn)定性實驗；置于-20℃冰箱內(nèi)6h進(jìn)行耐寒實驗，重新考察其PH值、含量、性狀和外觀等指標(biāo)是否有明顯變化[13]。結(jié)果離心后樣品未見分層現(xiàn)象。經(jīng)耐熱、耐寒實驗后的樣品置于常溫下考察1mo，其PH值、含量、性狀和外觀等指標(biāo)均無明顯變化。

4 討論

脂質(zhì)體用于皮膚給藥已有20多年的歷史，一般認(rèn)為普通脂質(zhì)體應(yīng)用后，不能增加藥物的透皮速率，僅能增加藥物在皮膚內(nèi)的滯留。醇質(zhì)體作為一種新型的具有囊泡結(jié)構(gòu)的經(jīng)皮滲透載體，具有更多優(yōu)于脂質(zhì)體的特點[5]。本實驗在將鹽酸青藤堿制備成醇質(zhì)體時，通過離體透皮試驗，發(fā)現(xiàn)其透皮速率和透皮量均遠(yuǎn)高于普通脂質(zhì)體，因而可望有效促進(jìn)鹽酸青藤堿的經(jīng)皮吸收。但其混懸液藥物容易泄露，不宜貯存，且乙醇較易揮發(fā)，因此進(jìn)一步將醇質(zhì)體制備成凝膠，以提高制劑的穩(wěn)定性。

本文采用注入法制備鹽酸青藤堿醇質(zhì)體，操作簡單，流程時間短，重現(xiàn)性好。所得醇質(zhì)體粒徑小而均勻。制備過程中發(fā)現(xiàn)將鹽酸青藤堿溶于乙醇比將其溶于PBS可顯著提高包封率，同時乙醇以及磷脂的濃度對所形成醇質(zhì)體的粒徑及包封率都有較大的影響，乙醇比例越高，醇質(zhì)體粒徑越小，磷脂濃度越大，醇質(zhì)體粒徑越大，包封率越高。

[1]劉強(qiáng),周莉玲,李銳.青藤堿的研究概況 [J].中草藥,1997,(4):247.

[2]周莉玲，李銳，周華，等.青藤堿制劑藥動學(xué)相關(guān)性研究 .中成藥，1996，18(9)∶1.

[3]FANG YP,TSAIYH,WU PC,etal.Compadson of 5-aminolevu-linic acid-encapsulated liposome versus ethosome for skin delivery for photodynamic therapy[J].IntJ Pham,2008,356(1-2):144.

[4]Maghraby G M,Willims A C,Barry B W.Interactions of surfactants(edge activators)and skin penetration enhancers with liposome[J].Int J Pham,2004,276(1/2):143.

[5]Elsated M M,Abdallah O Y,Naggar V F,et al.Deformable liposomes and ethosomes:mechanism of enhanced skin delivery[J].Int J Pharm,2006,322(1～2):60.