郝云芳，張潞，倪艷，李先榮

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西 太原 030012)

復(fù)方景葛膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

郝云芳，張潞，倪艷，李先榮*

(山西省中醫(yī)藥研究院，山西 太原 030012)

目的：建立復(fù)方景葛膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：采用薄層色譜法(TLC)對處方中紅景天、刺五加進(jìn)行定性鑒別，采用紫外可見分光光度法(UV-Vis)對制劑中的總皂苷進(jìn)行含量測定，采用高效液相色譜法(HPLC)對制劑中的葛根素進(jìn)行定量測定。結(jié)果：TLC能定性檢出紅景天、刺五加，斑點清晰，且陰性對照無干擾；UV-Vis法測定每100 g復(fù)方景葛膠囊中總皂苷的含量為20.897 g(n=3)；HPLC法測定葛根素含量在0.0796～1.592 μg線性良好，r=0.999 9；平均加樣回收率為99.39%，RSD=1.54%。結(jié)論：所建立的定性、定量檢測方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重現(xiàn)性好，能有效地控制復(fù)方景葛膠囊的質(zhì)量。

復(fù)方景葛膠囊；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；薄層色譜法；紫外可見分光光度法；高效液相色譜法

復(fù)方景葛膠囊是正在研究的中藥復(fù)方制劑，由刺五加、葛根、紅景天等中藥組成，具有緩解體力疲勞、提高缺氧耐受力、增強免疫力的功效[1]。根據(jù)藥物性質(zhì)和應(yīng)用特點，將其研制成膠囊劑并采用HPLC測定其有效成分含量，進(jìn)行質(zhì)量控制。方中君藥刺五加具有益氣健脾，補腎安神的功能，其主要標(biāo)志性成分為總皂苷；臣藥葛根具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)，解酒毒的功能，其主要標(biāo)志性成分為葛根素；紅景天具有益氣活血，通脈平喘功能，其主要標(biāo)志性成分為紅景天苷或總皂苷[2]，與方中其他藥味合為佐使。

為了方便、快速地檢測復(fù)方景葛膠囊的質(zhì)量，作者采用TLC對方中紅景天、刺五加進(jìn)行了定性鑒別，并建立了總皂苷和葛根素的含量測定方法。

1 儀器與試藥

Agilent高效液相色譜儀，Agilent化學(xué)工作站；TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；BP211D型電子天平(德國賽多利斯)；SE202F型電子天平(奧豪斯儀器有限公司)。

葛根素對照品(批號：110752-200912，供含量測定用)、蘆丁對照品(批號：100080-200707，供含量測定用)、人參皂苷Re對照品(批號：110754-201123，供含量測定用)、紅景天對照藥材(批號：120304)、刺五加對照藥材(批號：120703)均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純(天津市四友精細(xì)化學(xué)品有限公司)，水為去離子水，其余試劑均為分析純。復(fù)方景葛膠囊(自制，批號：1207073，1206100，1204096)。

2 薄層色譜鑒別

2.1 紅景天[3]

取3個批次復(fù)方景葛膠囊各1份，每份1 g，置具塞錐形瓶中，分別加甲醇20 mL，超聲處理30 min，放冷，濾過，用少量甲醇分次洗滌容器及殘渣，洗液與濾液合并，揮干，殘渣加水20 mL溶解，置分液漏斗中，加石油醚(60～90 ℃)振搖提取3次，每次20 mL，棄去石油醚液，水層加乙酸乙酯振搖提取3次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，揮干，殘渣加甲醇5 mL使溶解，置氧化鋁柱(中性氧化鋁5 g，用水濕法裝柱，加15 mL水預(yù)洗)上，加70%甲醇30 mL洗脫，收集洗脫液，揮干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，離心，取上清液，作為供試品液。

另取紅景天對照藥材1 g、缺紅景天陰性制劑1 g，按上述供試品處理方法得對照藥材溶液、陰性對照液。再取紅景天苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB)試驗，分別吸取上述6份溶液5 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)位置上，顯相同的黃色斑點；而陰性制劑在相同位置無此斑點存在。薄層鑒別色譜圖見圖1。

1～3.復(fù)方景葛膠囊；4.紅景天對照藥材；5.紅景天苷對照品；6.缺紅景天陰性對照品圖1 紅景天TLC圖

2.2 刺五加

取3個批次復(fù)方景葛膠囊各1份，每份5 g，按《中國藥典》2010版一部刺五加鑒別項下內(nèi)容處理[4]，得3份供試品溶液。另取刺五加對照藥材5 g，同法制成對照藥材溶液。再取缺刺五加陰性制劑5 g，同法制成陰性藥材試液。按照薄層色譜法(《中國藥典》2010版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述5份溶液各10 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(19∶1∶0.3)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在于對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；而陰性制劑在相同位置無此斑點存在。薄層鑒別色譜圖見圖2。

1～3.復(fù)方景葛膠囊；4.刺五加對照藥材；5.缺刺五加陰性對照品圖2 刺五加TLC圖

3 總皂苷的含量測定[5]

3.1 試樣處理

將本品研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加少量水，超聲處理30 min，再用水定容至100 mL，搖勻放置，吸取上清液1.0 mL，進(jìn)行柱層析。

3.2 柱層析

層析柱(15 mm×200 mm)，內(nèi)裝3 g D-101凈品型大孔吸附樹脂，上加1 g中性氧化鋁，先用25 mL濃度為70%乙醇洗柱，棄去洗脫液，再用25 mL水洗柱，棄去洗脫液；精確加入1.0 mL已處理好的試樣溶液，用25 mL水洗柱，棄去洗脫液；再用25 mL濃度為70%乙醇洗脫總皂苷，收集洗脫液于蒸發(fā)皿中，置于60 ℃水浴蒸干，以此作顯色用。

3.3 顯色

在上述已揮干的蒸發(fā)皿中準(zhǔn)確加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，轉(zhuǎn)動蒸發(fā)皿，使殘渣全部溶解，再加0.8 mL高氯酸，混勻后，移入試管中，60 ℃水浴上加熱10 min，取出，冰浴冷卻后，準(zhǔn)確加入冰醋酸5.0 mL，搖勻后，以1 cm比色皿中于560 nm處與標(biāo)準(zhǔn)管一起進(jìn)行比色測定。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)管

吸取人參皂苷Re對照品溶液(0.99 mg·mL-1)200 μL，從“柱層析…”起與試樣相同操作，測定吸光度值。

3.5 計算

以人參皂苷Re為基準(zhǔn)計算復(fù)方景葛膠囊中總皂苷的含量。經(jīng)計算，測得每100 g復(fù)方景葛膠囊中總皂苷的含量為20.897 g(n=3)。

4 葛根素的含量測定[5]

4.1 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-水 (25∶75)；流速：1.0 mL·min-1；測定波長：250 nm；柱溫：室溫；理論塔板數(shù)按葛根素峰計算不低于2 000。

4.2 供試品溶液的制備

取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約0.5 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱定重量，超聲處理30 min(250 W，50 kHz)，取出放冷，補足減失的重量，0.45 μm微孔濾膜過濾，作為供試品溶液。

4.3 陰性制劑溶液的制備

按全方比例稱取缺葛根的其他中藥，按制劑工藝制備成粉末，取約0.5 g，精密稱定，其余步驟同供試品溶液的制備方法。

4.4 線性關(guān)系的考察

精密稱取葛根素對照品，加30%乙醇制成每1 mL 含79.6 μg的溶液，分別精密吸取1，2，5，10，15，20 μL進(jìn)樣，依法測定，以葛根素含量(μg)為橫坐標(biāo)(X)，峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：Y=4.231 4X-38.844，(r=0.999 9)，因此在0.079 6～1.592 μg具有良好的線性關(guān)系。

4.5 穩(wěn)定性試驗

取同一批樣品(批號：1207073)，按供試品溶液的制備方法制備，每隔2 h測定1次，共測6次，結(jié)果表明，供試品液中葛根素在10 h內(nèi)穩(wěn)定，RSD=1.83%，表明供試品在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

4.6 精密度試驗

取同一批樣品(批號：1207073)，按供試品溶液的制備方法制備，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，計算RSD=1.08%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

4.7 重復(fù)性試驗

取同一批樣品(批號：1207073)，研細(xì)，混勻，取約0.5 g，精密稱定，按供試品溶液制備方法制備，平行制備6份，測定含量，每份測2次，取平均值。經(jīng)計算得平均含量為5.76 mg·g-1，RSD=0.62%(n=6)。

4.8 加樣回收率試驗

取約0.25 g供試品(批號：1207073)，共6份，精密稱定，分別精密添加一定量的對照品，按供試品溶液制備方法制備，測定葛根素峰面積并計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

4.9 樣品測定

按以上所建立的HPLC含量測定方法，對3批樣品中葛根素進(jìn)行含量測定。按供試品溶液的制備方法操作，精密吸取供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，每份測定2次，取平均值，計算樣品中葛根素的含量，結(jié)果見表2。

表1 葛根素加樣回收率試驗

表2 3批復(fù)方景葛膠囊樣品中葛根素的含量測定 /mg·g-1

5 討論

復(fù)方景葛膠囊具有緩解體力疲勞、提高缺氧耐受力、增強免疫力等功效，建立總皂苷和葛根素的含量測定方法可有效控制藥品的質(zhì)量，是品質(zhì)評價的一項重要指標(biāo)。實驗研究結(jié)果表明，所采用的方法簡便、靈敏，重現(xiàn)性及穩(wěn)定性均良好，方法可靠，適于作為復(fù)方景葛膠囊中總皂苷和葛根素的定量方法，可為其進(jìn)一步研究開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

[1] 季宇彬，耿欣，汲晨鋒.紅景天研究進(jìn)展[J].天津中醫(yī)藥，2007，(1)：81-85.

[2] 白鴻 保健食品功效成分檢測方法[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2011：30-53.

[3] 王毓杰.藏藥紅景天及其復(fù)方抗缺氧有效成分研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2006.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：192-193.

[5] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范[S].2003：306-307.

StudiesonQualityStandardofFufangJinggeCapsule

HAO Yun-fang，ZHANG Lu，NI Yan，LI Xian-rong*

(ShanxiInstituteofTraditionalChineseMedicine，Taiyuan030012，China)

Objective：To establish the quality standard for Fufang Jingge Capsule.Methods：The qualitative identification of Rhodiolae Crenulatae Radix et Rhizoma and Acanthopanacis Senticosi Radix et Rhizoma Seu Caulis was carried out by TLC，the content of total saponins was determined by UV-Vis and the content of puerarin was determined by HPLC.Results：The relevant spots on TLC plates were clear without any interference by the blank reference.The content of total saponins of per 100 g Fufang Jingge Capsule was 20.897 g(n=3).The content of puerarin showed a good linearity in the range of 0.079 6-1.592 μg.The average recovery rate was 99.39%，RSD was 1.54%.Conclusion：Established qualitative and quantitative methods were simple，accurate，reliable and reproducible，and can be effectively used for the quality standard of Fufang Jingge Capsule.

Fufang Jingge Capsule；Quality standard；TLC；UV-Vis；HPLC

2013-01-31)

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李先榮，E-mail:xrli-01@163.com