李跟旺，劉效栓，焦正花，楊沛霖

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

消定膏皮膚刺激性及致敏性研究△

李跟旺，劉效栓，焦正花*，楊沛霖

(甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050)

目的：研究消定膏對(duì)家兔完整皮膚的刺激性及其對(duì)皮膚的致敏性。方法：家兔去毛后左側(cè)區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照區(qū)，涂以蒸餾水0.5 mL；右側(cè)區(qū)域?yàn)榻o藥區(qū)，涂以0.5 g消定膏，每天涂抹1次，連續(xù)7 d，觀察及記錄紅斑及水腫等情況，并按皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分研究其對(duì)完整皮膚的刺激性；通過(guò)與高致敏物2、4-二硝基氯苯比較研究其致敏性。結(jié)果：在連續(xù)貼敷消定膏第4天和第5天開始出現(xiàn)輕度紅斑，貼敷第5天開始出現(xiàn)輕度水腫，停藥后48 h逐漸恢復(fù)，對(duì)皮膚無(wú)過(guò)敏反應(yīng)；消定膏過(guò)敏發(fā)生率為0%，無(wú)皮膚過(guò)敏反應(yīng)。結(jié)論：消定膏對(duì)家兔完整皮膚具輕度刺激性，對(duì)皮膚無(wú)致敏反應(yīng)。

消定膏；刺激性；致敏性

消定膏是甘肅省中醫(yī)院骨科常用純中藥制劑，主要由大黃、兒茶、紫荊皮等5味中藥組成，具有活血散瘀，消腫止痛的功效，同時(shí)有改善局部炎性疼痛及外傷性瘀血腫痛的作用。其臨床療效確切，不良反應(yīng)小，在我院臨床應(yīng)用已有40余年，備受臨床醫(yī)生和患者的歡迎，取得了一定的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。作者在臨床療效確切的基礎(chǔ)上，對(duì)其刺激性及相關(guān)致敏性進(jìn)行研究，為醫(yī)院制劑申報(bào)新藥提供理論依據(jù)，使其具有廣泛的實(shí)用性、先進(jìn)性和科學(xué)性。

1 材料

1.1 藥品與試劑

消定膏(棕褐色膏狀物，批號(hào)：20070506，由甘肅省中醫(yī)院提供)；2、4-二硝基氯苯(上海試劑一廠，批號(hào)：0060301)，臨用前用分析純丙酮配制成1%的致敏濃度和0.1%的激發(fā)濃度。

1.2 動(dòng)物

健康白色家兔4只，體重2.5～3.0 kg，雌雄兼有，合格證號(hào)：甘醫(yī)動(dòng)字第14-004號(hào)；白色豚鼠，雌雄各半，體重250～300 g，合格證號(hào)：醫(yī)動(dòng)字14-003號(hào)，均由蘭州生物制品研究所動(dòng)物室提供。室溫18～25 ℃，相對(duì)濕度40%～60%。

2 方法

2.1 消定膏對(duì)家兔多次皮膚刺激性試驗(yàn)[1-5]

將4只家兔預(yù)養(yǎng)3 d。試驗(yàn)前24 h，將家兔脊柱兩側(cè)被毛剪掉，用硫化鈉-淀粉-肥皂粉(3∶7∶1)的比例用水配成糊狀，脫毛，用清水清洗干凈；不損傷表皮，去毛范圍左、右各約3 cm×3 cm。去毛24 h后每只動(dòng)物左側(cè)區(qū)域?yàn)榭瞻讓?duì)照區(qū)，涂以蒸餾水0.5 mL；右側(cè)區(qū)域?yàn)榻o藥區(qū)，涂以0.5 g消定膏，涂抹面積2.5 cm×2.5 cm。涂抹后用一層玻璃紙和兩層紗布覆蓋，再用無(wú)刺激膠布和繃帶加以固定。每天涂抹1次，連續(xù)7 d，每次涂抹后至少保留4 h。從第2天開始，每次去除藥物1 h以及再次貼敷前觀察并記錄紅斑及水腫，涂敷部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)，皮膚粗糙或皮膚菲薄情況及其發(fā)生時(shí)間及消退時(shí)間，并按皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。末次貼敷后，在去除藥物后1，24，48，72 h肉眼觀察并記錄涂敷部位有無(wú)紅斑和水腫等情況。空白對(duì)照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)同樣處理、觀察。

計(jì)算每一觀察時(shí)點(diǎn)各組積分均值，然后計(jì)算觀察期限內(nèi)每天每只動(dòng)物刺激積分均值，每天每只動(dòng)物刺激積分均值=每天每只動(dòng)物各時(shí)點(diǎn)刺激評(píng)分總和/每天每只動(dòng)物評(píng)分次數(shù))，按表1～2的皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)價(jià)[6]。

表1 皮膚刺激及致敏性反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.2 皮膚致敏反應(yīng)試驗(yàn)[7]

將豚鼠30只，預(yù)養(yǎng)3 d后，隨機(jī)分為3組，分別為消定膏組、陽(yáng)性對(duì)照組(2、4-二硝基氯苯)、陰性對(duì)照組(0.9%氯化鈉溶液)，每組10只。試驗(yàn)前24 h，將豚鼠背部左側(cè)或右側(cè)脫毛，用清水清洗干凈，不損傷表皮，去毛范圍左、右均約3 cm×3 cm。

取消定膏0.2 g，涂抹于豚鼠左側(cè)背部脫毛區(qū)，涂抹后用兩層紗布和一層玻璃紙覆蓋，再用無(wú)刺激膠布封閉固定6 h。陽(yáng)性對(duì)照組涂抹1% 2、4-二硝基氯苯0.2 mL，陰性對(duì)照組涂抹0.9%氯化鈉溶液0.2 mL，涂抹后處理方法同受試物組。試驗(yàn)第7天和第14天以同樣方法各重復(fù)1次，共計(jì)3次。于末次致敏后14 d，再次將受試物0.2 g涂于豚鼠右側(cè)脫毛區(qū)，方法同前。6 h后去掉受試物，即刻觀察，然后于24，48，72 h再次觀察皮膚過(guò)敏反應(yīng)情況，并按表3皮膚過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各時(shí)間進(jìn)行評(píng)分[8]。同時(shí)密切觀察動(dòng)物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身過(guò)敏反應(yīng)。陽(yáng)性對(duì)照組涂抹0.1% 2，4-二硝基氯苯0.2 mL，陰性對(duì)照組涂抹0.9%氯化鈉溶液，觀察方法同受試物組。

致敏反應(yīng)發(fā)生率=有過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物數(shù)(不論程度輕重)/動(dòng)物總數(shù)×100%。按表3皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)推斷受試物的致敏性。

表3 皮膚致敏性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1 消定膏對(duì)家兔皮膚刺激反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果

在試驗(yàn)觀察期內(nèi)，根據(jù)皮膚刺激性強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，在連續(xù)貼敷消定膏第4天和第5天分別有2只家兔開始出現(xiàn)輕度紅斑，并逐漸加重；貼敷第5天開始出現(xiàn)輕度水腫。停藥后48 h逐漸恢復(fù)?？瞻讓?duì)照區(qū)未出現(xiàn)上述刺激癥狀，涂抹及觀察期內(nèi)未見動(dòng)物全身異常反應(yīng)，試驗(yàn)結(jié)果見表4。

表4 消定膏對(duì)家兔多次皮膚刺激性試驗(yàn)結(jié)果(n=4)

根據(jù)皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：每天每只動(dòng)物刺激積分均值0.5～2.99時(shí)，為輕度刺激性。本試驗(yàn)結(jié)果表明，消定膏多次連續(xù)涂抹給藥后每天每只動(dòng)物完整皮膚刺激積分均值為1.40，可判消定膏對(duì)家兔的完整皮膚均有輕度刺激作用。

3.2 消定膏對(duì)豚鼠皮膚過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果

消定膏組與陰性對(duì)照組致敏激發(fā)接觸后觀察，陽(yáng)性對(duì)照組自激發(fā)給藥6 h后，即刻觀察動(dòng)物有出現(xiàn)輕度紅斑、明顯紅斑或嚴(yán)重紅斑，同時(shí)伴有輕度水腫、中度水腫或重度水腫，皮膚隆起1 mm，輪廓清楚等不同程度的過(guò)敏反應(yīng)，總積分35分；24 h開始消退，總積分為27分；48 h總積分18分；72 h后總積分為12分，致敏率100%。陽(yáng)性對(duì)照2、4-二硝基氯苯過(guò)敏發(fā)生率為100%，為極度致敏性；消定膏過(guò)敏發(fā)生率為0%，無(wú)皮膚過(guò)敏反應(yīng)，見表5。

表5 消定膏對(duì)豚鼠皮膚過(guò)敏反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

消定膏屬活血散瘀、消腫止痛的中藥膏劑，在骨外科領(lǐng)域用于跌打損傷，消腫止痛，療效確切。

本試驗(yàn)通過(guò)豚鼠皮膚過(guò)敏試驗(yàn)，以高致敏物2、4-二硝基氯苯為陽(yáng)性對(duì)照，觀察消定膏皮膚用藥的過(guò)敏性反應(yīng)。致敏試驗(yàn)的研究發(fā)現(xiàn)消定膏對(duì)皮膚無(wú)致敏性，使用較為安全可靠。通過(guò)消定膏對(duì)家兔皮膚刺激性試驗(yàn)及對(duì)豚鼠皮膚的致敏試驗(yàn)研究，確定消定膏對(duì)家兔完整皮膚有輕度刺激作用，對(duì)皮膚無(wú)致敏性。

[1] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物刺激性和溶血性研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005.

[2] 胡楠楠，王雪峰，趙雪，等.敷胸巴布貼制劑對(duì)健康家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志，2012,39(6)：1168-1169.

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[7] 許景川.蜂膠提取物對(duì)口腔黏膜刺激和皮膚致敏作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].海峽藥學(xué)，2010，22(12)：27-28.

[8] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.中藥、天然藥物免疫毒性(過(guò)敏性、光敏性反應(yīng))研究的技術(shù)指導(dǎo)原則[S].2005.

TheSkinIrritationandSensitizationResearchofXiaodingGao

LI Gen-wang,LIU Xiao-shuan,JIAO Zheng-hua,YANG Pei-lin

(GansuProvinceHospitalofTCM,Lanzhou730050,China)

Objective： To study skin irritation and sensitization of Xiaoding Gao with rabbit.Methods： After removing rabbit hair,the left side is blank controlled area,coated with distilled water 0.5 mL； The right is medicine area and coated with 0.5 g Xiaoding Gao,once daily,continuous 7 d,observe and record erythema,edema indicators,rate according to the ‘skin stimulation reactions rating criteria’. Skin sensitization of Xiaoding Gao is compared with 2,4-two nitro chlorobenzene,which is highly allergic.Results： After continuous applying Xiaoding Gao,mild erythema was appeared at 4thor 5thday,mild edema was found at 5thday. 48 h after discontinuation of Xiaoding Gao,erythema and edema disappeared gradually,and there wae no skin allergic reaction. The allergic rate of Xiaoding Gao is 0%.Conclusion： Xiaoding Gao has little skin irritation and no sensitization effect to complete rabbit skin.

Xiaoding Gao； Irritation； Sensitization

2012-07-16)

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2003～2010年甘肅省中醫(yī)藥管理局中醫(yī)藥科研項(xiàng)目(2003-GZK-16)

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焦正花，E-mail：939410984@qq.com