李然偉，任 明，張 明，溫都蘇，劉祿成

（吉林大學(xué)第二醫(yī)院 泌尿外科，吉林 長春130041）

（ChinJLabDiagn，2013，17：1037）

缺氧誘導(dǎo)因子－1α（hypoxia－inducible factor 1 alpha，HIF－1α）由Semenza等［1］于1992年在缺氧誘導(dǎo)的細(xì)胞核的提取物中發(fā)現(xiàn)。在正常情況下處失活狀態(tài)，在低氧條件下開始表達(dá)，且隨缺氧時(shí)間延長而增加，成為促進(jìn)腫瘤發(fā)展和轉(zhuǎn)移的正調(diào)節(jié)因子［2］。甚至有報(bào)道認(rèn)為，針對(duì)HIF－1α用藥不但能抑制腫瘤生長，還可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療的敏感性［3，4］。本研究旨在探討HIF－1α在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)和臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般材料 2009年3月至2012年3月本院泌尿外科手術(shù)切除并經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)的膀胱移行細(xì)胞癌標(biāo)本30例，術(shù)前均未接受腫瘤相關(guān)治療并采用同一種術(shù)式。另取15例距離腫瘤組織邊緣10 cm以外的正常膀胱組織，將新鮮標(biāo)本用生理鹽水沖洗干凈后置－80℃液氮罐備用。免疫組織化學(xué)染色和濃縮型二氨基聯(lián)苯胺（DAB）試劑盒購自北京中杉金橋公司，人HIF－1α單克隆抗體購自Epitomics公司。

1.2 標(biāo)本染色與結(jié)果判定 采用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白——過氧化酶（SP）法常規(guī)染色，用磷酸鹽緩沖液（PBS）代替抗陰性對(duì)照，細(xì)胞著色者為陽性細(xì)胞。根據(jù)著色細(xì)胞數(shù)和著色程度進(jìn)行綜合評(píng)判。HIF－1α蛋白著色定位在細(xì)胞膜或細(xì)胞核，呈黃褐色。著色細(xì)胞計(jì)數(shù)：連數(shù)3個(gè)高倍視野無著色細(xì)胞時(shí)為陰性（－），著色但染色淺時(shí)為陽性（＋）；著色且深時(shí)為強(qiáng)陽性（＋＋＋）；介于兩者之間時(shí)為中度陽性（＋＋）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)數(shù)資料用例數(shù)及百分率表示，組間比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 膀胱癌組織、正常膀胱組織中HIF－1α陽性表達(dá)率的比較

HIF－1α在30例膀胱癌組織中23例（76.7%）呈陽性表達(dá)，而15例正常膀胱組織中僅1例陽性表達(dá)。HIF－1α在膀胱癌組織中的表達(dá)顯著高于膀胱正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

2.2 HIF－1α在膀胱癌組織不同病理分級(jí)中的表達(dá)差異 如表1所示，在不同病理分級(jí)中HIF－1α的陽性表達(dá)程度不同，組間差異比較：雖G1和G2相比，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但G1和G3對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。比較結(jié)果提示，隨著分級(jí)增高，即惡性程度上升，其陽性表達(dá)率和陽性表達(dá)程度增強(qiáng)。

表1 HIF－1α在30例膀胱癌組織不同病理分級(jí)中的表達(dá)情況

3 討論

膀胱癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，闡明膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展和復(fù)發(fā)機(jī)制及其影響因素是目前腫瘤研究的重要課題。很多基礎(chǔ)和臨床研究已證明，膀胱癌的生長轉(zhuǎn)移是一個(gè)十分復(fù)雜的多基因，多因素參與的過程，明確相關(guān)基因的作用，研究其發(fā)生、發(fā)展機(jī)制，篩選膀胱癌生物學(xué)標(biāo)志物并構(gòu)建瞄準(zhǔn)其靶位治療的基因制劑對(duì)于明確機(jī)制，遏制生長，改進(jìn)治療有著極其重要的意義。研究認(rèn)為HIF－1α在多種惡性腫瘤組織中過表達(dá)，并被證實(shí)其既能促進(jìn)腫瘤生長也與化療耐藥和患者不良預(yù)后有關(guān)［5，6］。已成為當(dāng)前腫瘤基礎(chǔ)理論研究和臨床實(shí)際治療研究的熱點(diǎn)之一。

組織細(xì)胞正常時(shí)，HIF－1α處于失活狀態(tài)。當(dāng)細(xì)胞增殖處于低氧狀態(tài)時(shí)，HIF－1α轉(zhuǎn)運(yùn)到核內(nèi)，促進(jìn)細(xì)胞增殖，加速腫瘤生長，且隨缺氧時(shí)間延長其轉(zhuǎn)錄，翻譯水平呈指數(shù)增加［7］。我們?cè)?0例膀胱癌組織的23例中檢測到HIF－1α高表達(dá)，其活性增強(qiáng)與膀胱癌的生長和惡性度相關(guān)。這與在其他惡性腫瘤中HIF－1α的過表達(dá)激活了的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）基因加速癌細(xì)胞血管生成的生物學(xué)行為，使腫瘤細(xì)胞很快適應(yīng)缺氧微環(huán)境，促進(jìn)腫瘤生長的文獻(xiàn)報(bào)道一致［8］。

本研究的30例膀胱癌組織中HIF－1α陽性表達(dá)率為76.7%，高于15例正常膀胱組織，并且膀胱癌細(xì)胞中HIF－1α的表達(dá)陽性強(qiáng)度G3級(jí)顯著高于G1級(jí)，說明HIF－1α的過表達(dá)在膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展，以及惡性度和預(yù)后至關(guān)重要。Liao等［9］通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，膀胱癌細(xì)胞中HIF－1α過表達(dá)可誘導(dǎo)VEGF的高水平表達(dá)。VEGF是活性最強(qiáng)、特異性最高的促血管生成因子，而血管生成在腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中有重要作用。HIF－1α間接促血管形成的作用最終會(huì)加速腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移和腫瘤的侵襲性。在大鼠卵巢癌動(dòng)物模型的研究中發(fā)現(xiàn)，HIF－1α過表達(dá)加速腫瘤的侵襲性，并增加轉(zhuǎn)移率，而通過反義HIF－1α抑制其活性則可大大延緩腫瘤侵襲時(shí)間，降低轉(zhuǎn)移機(jī)會(huì)。提示基因制劑抑制HIF－1α表達(dá)來治療腫瘤值得期待。

本文作者通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測膀胱癌組織和膀胱正常組織中HIF－1α蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示HIF－1α在膀胱癌組織的表達(dá)率明顯高于膀胱正常組織（P＜0.01），且隨著癌細(xì)胞病理分級(jí)的增加其表達(dá)水平上升，說明HIF－1α可作為判斷膀胱生長轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后的重要指標(biāo)之一，這為進(jìn)一步研究HIF－1α在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展機(jī)制中的作用和靶向HIF－1α治療臨床膀胱癌提供了一定參考和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

［1］Semenza GL，Wang GL.A nuclear factor induced by hypoxia via de novo protein synthesis binds to the human erythropoietin gene enhancer at a site required for transcriptional activation［J］.Mol Cell Biol，1992，12（12）：5447.

［2］Adams JM，Difazio LT，Rolandelli RH，et al.HIF－1：a key mediator in hypoxia［J］.Acta Physiol Hung，2009，96：19.

［3］Liu F，Wang P，Jiang X，et al.Antisense hypoxia－inducible factor alpha gene therapy enhances the therapeutic efficacy of doxorubicin to combat hepatocellular carcinoma［J］.Cancer Sci，2010，99（10）：2055.

［4］Chai CY，Chen WT，Huang WC，et al.Hypoxia－inducible factor－1 alpha expression correlates with focal macrophage infiltration，angiogenesis and unfavourable prognosis in urothelial carcinoma［J］.J Clin Pathol，2011，61（5）：658.

［5］Blouw B，Song H，Tihan T，et al.The hypoxia response of tumor is dependent on their microenvironment［J］.Cancer Cell，2009，4：133.

［6］Oh SH，Woo JK，Jin Q，et al.Identification of novel antiangiogenic anticancer activities of deguelin targeting hypoxia－inducible factor－1alpha［J］.Int J Cancer，2010，122（1）：5.

［7］Liu W，Shen SM，Zhao XY，et al.Targeted genes and interacting proteins of hypoxia inducible factor－1［J］.Int J Biochem Mol Biol，2012，3：165.

［8］Dang DT，Chun SY，Burkitt K，et al.Hypoxia－inducible factor－1 target genes as indicators of tumor vessel response to vascular endothelial growth factor inhibi－tion［J］.Cancer Res，2009，68（6）：1872.

［9］Liao D，Corle C，Seagroves TN，et al.Hypoxia－inducible factor－1alpha is a key regulator of metastasis in a transgenic model of cancer initiation and progression［J］.Cancer Research，2010，67：563.