和秀芳 （云南省香格里拉縣動(dòng)物衛(wèi)生檢疫監(jiān)督所 674400）

徐文必 （云南省宣威市格宜鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站）

李海昌 張 佳 王生奎 肖 嘯 （云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院 云南 昆明）

黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉的代謝產(chǎn)物，特曲霉也能產(chǎn)生黃曲霉毒素，但產(chǎn)量較少.產(chǎn)生的黃曲霉毒素主要有B1,B2,G1,G2以及另外兩種代謝產(chǎn)物M1,M2。1993年黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織(WHO)的癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為1類致癌物, 是一種毒性極強(qiáng)的劇毒物質(zhì).黃曲霉毒素的危害性在于對(duì)人及動(dòng)物肝臟組織有破壞作用，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黃曲霉毒素B1最為多見，其毒性和致癌性也最強(qiáng)[1]。食物污染可發(fā)生于植物生長(zhǎng)期或收割后儲(chǔ)存或加工過程中。黃曲霉毒素(AFB1)主要在細(xì)胞色素作用下轉(zhuǎn)化為具有細(xì)胞毒性的親電子和芳基化代謝產(chǎn)物，特別是AFB1有害的8,9-環(huán)氧化物快速生成通過耗竭細(xì)胞內(nèi)GSH而損傷肝細(xì)胞脫毒作用。肝細(xì)胞內(nèi)還原型谷胱甘肽(GSH)的耗竭不僅損傷AFB1的脫毒作用，還可通過環(huán)氧化物介導(dǎo)的直接損傷而引起繼發(fā)性氧化損傷。聚積的AFB1與細(xì)胞酶、蛋白質(zhì)和DNA進(jìn)行不可逆結(jié)合，從而損傷代謝、基因轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成[2]。另外，在幾個(gè)物種還發(fā)現(xiàn)了致肝癌作用。不同物種對(duì)黃曲霉毒素敏感性不同，以犬敏感性為高，犬對(duì)黃曲霉毒素所致的急性和亞急性肝病可能反映了其肝細(xì)胞GSH濃度較低，以及GSH-S-轉(zhuǎn)移酶的個(gè)體間差異[3]。不同動(dòng)物對(duì)黃曲霉毒素B1敏感性不同，以犬敏感性為高。在犬上關(guān)于黃曲霉中毒的報(bào)道很少，僅有仝宗喜[4]2010年《養(yǎng)犬》和董翠蓮[5]2012在上海畜牧獸醫(yī)通訊上發(fā)表的《霉菌毒素中毒對(duì)犬肝腎功能的影響》發(fā)表過兩篇關(guān)于玉米霉菌毒素對(duì)犬的危害和防治措施的文章。黃曲霉毒素主要損害的是犬的肝臟及腎臟，可以通過對(duì)比健康犬和中毒犬血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，堿性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸等生理生化指標(biāo)的變化規(guī)律，評(píng)價(jià)黃曲霉毒素對(duì)犬肝臟及腎臟功能的影響，進(jìn)而得出黃曲霉毒素對(duì)犬的危害，為防止及治療犬黃曲霉毒素中毒提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選20只飼喂過金標(biāo)試紙檢測(cè)黃曲霉素B1陽(yáng)性的麥麩和玉米面犬，根據(jù)臨床癥狀的明顯程度分為中度中毒組、重度中毒組每組10只；另選 10只健康犬作為對(duì)照組。

1.1.2 試驗(yàn)儀器及試劑 離心沉淀器(上海手術(shù)器械廠磁極牌，80-2型)，全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞公司，序列號(hào)XA-16000600)，黃曲霉素快速檢測(cè)試紙卡(上?？祆`生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)6110816314)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)分組 選擇10只未飼喂過玉米糠麩飼料臨床無中毒癥狀的健康犬作為對(duì)照組，分別編號(hào)為1～10號(hào)；病犬根據(jù)臨床癥狀進(jìn)行分組，將10只有玉米糠麩飼料飼喂史，出現(xiàn)精神萎靡，嘔吐，腹瀉等中度中毒癥狀的犬作為中度中毒組，分別編號(hào)為11～20號(hào)；將10只有玉米糠麩飼料飼喂史，出現(xiàn)精神極度沉郁，腹瀉便血，嘔吐物中帶血絲，小便赤黃，黃疸，腹水等重度中毒癥狀的犬只作為重度中毒組，分別標(biāo)號(hào)為21～30號(hào)。

1.2.2 采集飼料做檢測(cè) 對(duì)中毒犬只的飼料進(jìn)行采集，用黃曲霉毒素快速檢測(cè)試紙卡對(duì)中毒犬只的飼料經(jīng)行檢測(cè)。取5g以上有代表性的飼料樣品磨碎，準(zhǔn)確稱取2g均勻粉末試樣加入到離心管中，向離心管中準(zhǔn)確加入2ml純水和乙酸乙酯8ml，將瓶蓋密封，放入離心機(jī)中離心。以3000r/min離心2min，取上2ml清液，吹干濾液，參照表格，根據(jù)殘留限量取相應(yīng)體積稀釋液復(fù)溶杯底固體，此溶解液為檢測(cè)液，滴入黃曲霉素快速檢測(cè)試紙卡。經(jīng)檢測(cè)中毒犬只所食用的玉米糠麩為被黃曲霉毒素B1污染的飼料，檢測(cè)成陽(yáng)性。試紙卡是利用特定的抗原抗體反應(yīng)原理，采用實(shí)現(xiàn)包被的特異性抗體捕捉檢測(cè)對(duì)象中的對(duì)黃曲霉毒素成分，進(jìn)而通過觀察測(cè)試線和控制線的顯色反應(yīng)來達(dá)到判定檢測(cè)對(duì)象中的黃曲霉毒素污染程度的目的。

圖1 陰性

圖2 陽(yáng)性

測(cè)試結(jié)果如圖所示，左邊的為陰性，右邊的為中毒犬只玉米糠麩飼料的檢測(cè)結(jié)果，為陽(yáng)性。

1.2.3 血樣的采集和處理 采用前臂內(nèi)靜脈采血法，每只犬采血3ml，所采血樣放入負(fù)壓儲(chǔ)血管保存，放入離心機(jī)中離心，以3000r/min離心2min，分離血清，取上層血清移入各試劑杯中(最少取0.5ml血清易檢測(cè))，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)。

1.2.4 檢測(cè)指標(biāo) 待測(cè)血清做生化指標(biāo)檢測(cè)，主要檢測(cè)谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，堿性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析 使用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，全部數(shù)據(jù)采用平均值對(duì)比和F檢驗(yàn)與q檢驗(yàn)，結(jié)果用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 各組犬血液生化指示

見表1。

表1 各組犬血液生化指標(biāo)平均數(shù)比較

由表1可知犬在黃曲霉毒素中毒后血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶，堿性磷酸酶，尿素氮，肌酐，尿酸均有不同程度的升高。說明，黃曲霉毒素會(huì)對(duì)犬的肝臟以及腎臟的功能產(chǎn)生影響。

2.1 各組生化指標(biāo)的比較結(jié)果

見表2。

由表2可知，谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、尿素氮4項(xiàng)指標(biāo)3組之間均差異極顯著(P<0.01)，對(duì)于肌酐，中度中毒組與重度中毒組之間差異不顯著(P≥0.05)，兩組與對(duì)照組均有顯著差異(P<0.05)，對(duì)于尿酸，中度中毒組與重度中毒組之間差異不顯著(P≥0.05)，兩組與對(duì)照組均有顯著差異(P<0.05)。

表2 各生化指標(biāo)分析

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，犬黃曲霉毒素B1中毒后，肝腎功能均受到較大的影響，影響程度與中毒程度有關(guān)。黃曲霉毒素B1主要損害肝臟，表現(xiàn)為肝細(xì)胞核腫脹、脂肪變性、出血、壞死及膽管上皮、纖維組織增生。同時(shí)腎臟也可受損害，主要表現(xiàn)為腎曲小管上皮細(xì)胞變性、壞死，有管型形成。谷丙轉(zhuǎn)氨酶，谷草轉(zhuǎn)氨酶和堿性磷酸酶是大多存在于肝細(xì)胞內(nèi)，肝臟是毒素的靶器官,當(dāng)黃曲霉毒素傾入機(jī)體，經(jīng)胃腸道吸收進(jìn)入門脈血液，黃曲霉毒素(AFB1)主要在細(xì)胞色素P450(CYP450)作用下轉(zhuǎn)化為具有細(xì)胞毒性的親電子和芳基化代謝產(chǎn)物，特別是AFB1有害的8,9-環(huán)氧化物快速生成通過耗竭細(xì)胞內(nèi)GSH而損傷肝細(xì)胞脫毒作用造成肝臟的損傷，中毒畜禽的肝細(xì)胞發(fā)生嚴(yán)重顆粒變性、脂肪變性、水泡變性、透明變性，這三種酶因此升高。而尿素氮，是哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì)在肝臟里分解代謝的最終產(chǎn)物尿素中的氮，由腎臟排出體外，當(dāng)肝腎受到黃曲霉毒素B1的侵害時(shí)，腎小球損傷，導(dǎo)致腎小球?yàn)V過率降低，動(dòng)物體內(nèi)的尿素氮排不出體外，尿酸也是相同，因此造成體內(nèi)尿素氮的升高和尿酸的升高。肌酐一般很少像尿素氮一樣受諸多因素影響，使得結(jié)果不準(zhǔn)確，所以肌酐檢測(cè)腎臟疾病比尿酸更為好。肌酐主要由腎小管濾過，腎小管不在重吸收，再?gòu)哪蛑信懦?，根?jù)國(guó)際腎臟關(guān)注協(xié)會(huì)把犬貓腎病和腎衰竭根據(jù)肌酐多少分為了四個(gè)階段，而犬黃曲霉素B1中毒的肌酐屬于腎病和腎衰竭的第一階段[6]。而且根據(jù)數(shù)據(jù)的出黃曲霉素B1對(duì)肝臟的損傷大于對(duì)腎臟的損傷。

4 結(jié)論

（1）犬黃曲霉素B1中毒導(dǎo)致急慢性肝炎、中毒性肝炎，肝實(shí)質(zhì)受到損害，腎功能衰竭，肝腎功能受到嚴(yán)重?fù)p傷，隨著中毒程度的不同，所測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)間有明顯差異。（2）犬黃曲霉素B1中毒的治療原則以保肝護(hù)腎為主，并根據(jù)臨床癥狀對(duì)癥治療。黃曲霉素B1中毒對(duì)犬肝腎功能影響極大，且治愈率較低，有嚴(yán)重后遺癥。因此防止犬黃曲霉毒素B1中毒應(yīng)以預(yù)防和控制為主，注意飼料的安全性，選用來源好的原材料；必要時(shí)在飼料中適量添加質(zhì)量較好的脫霉劑和防霉劑；在飼料中添加益生菌、微量元素和維生素，增強(qiáng)機(jī)體免疫力，緩解黃曲霉毒素對(duì)動(dòng)物的危害[7]。

[1]舒曉燕.飼料中霉菌毒素的危害及控制[J].畜牧業(yè), 2005, 4(11):60-61.

[2]汪小舟, 祝陽(yáng).黃曲霉素的毒害及防除[J].現(xiàn)代食品科技, 2005(2): 2.

[3]賀星亮, 李剛, 朱玉.犬黃曲霉毒素中毒[J].中國(guó)工作犬業(yè) 2008 (9).

[4]仝宗喜, 張廣強(qiáng), 霍磊.玉米霉菌毒素對(duì)犬的危害和防治措施[J].養(yǎng)犬, 2010 (1): 13-14

[5]董翠蓮, 肖嘯.霉菌毒素中毒對(duì)犬肝腎功能的影響[J].上海畜牧獸醫(yī)通訊, 2012(2): 42-43

[6]周桂蘭, 高得儀(主編).犬貓疾病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)與診斷手冊(cè)[M].北京: 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社, 2010.

[7]谷子林, 李素敏, 劉亞娟.飼料霉菌毒素對(duì)家兔的危害及其調(diào)控研究[A].河北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院.2008.432-433