王躍紅

長(zhǎng)春市雙陽(yáng)區(qū)中醫(yī)院，吉林長(zhǎng)春 130600

臨床上應(yīng)用的丹參飲口服液為丹參、砂仁、檀香3味中藥材經(jīng)提取分離、濃縮制成的一種口服液，主要功效為活血祛瘀、行氣止痛，主要用于治療氣滯血瘀引起的心胃諸痛。臨床效果比較理想[1]。本次研究中出于對(duì)丹參飲口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒定方法進(jìn)行分析探討的目的，分別采取薄層色譜、紫外-可見(jiàn)分光光度法、高效液相色譜法對(duì)丹參進(jìn)行鑒別、對(duì)丹參素鈉含量進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)匯報(bào)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

實(shí)驗(yàn)中所用儀器包括我實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的高效液相色譜儀、紫外分析儀、雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)；還會(huì)用到電子天平、脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器等。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥材與試劑

本次實(shí)驗(yàn)中所用藥材包括丹參、檀香和砂仁藥材，丹參飲口服液。所用試劑包括：丹參素鈉對(duì)照品，甲醇為色譜純，水為實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的純化水，其他所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 丹參的薄層鑒別

對(duì)照品：丹參素鈉加甲醇制成濃度為2 mg/mL溶液；對(duì)照藥材溶液：1 g丹參藥材經(jīng)水煎煮后，放冷，過(guò)濾后經(jīng)鹽酸條pH值至2.0,經(jīng)20 mL乙酸乙酯提取，蒸干，殘?jiān)?jīng)1 mL甲醇溶解待用；供試品溶液：20 mL丹參飲口服液，經(jīng)超聲處理后，經(jīng)鹽酸條pH至2.0,過(guò)濾，濾液經(jīng)乙酸乙酯提取，蒸干，殘?jiān)屑? mL甲醇溶液待用。另設(shè)陰性對(duì)照品，即不含有丹參藥材的丹參飲口服溶液[2]。

薄層色譜展開(kāi)劑為：氯仿-丙酮-甲酸（10:4:2），薄層板為硅膠G板。實(shí)驗(yàn)時(shí)，吸取10 uL上述所制備的四種溶液，分別點(diǎn)在同一塊硅膠G薄層板上，在上述展開(kāi)劑中展開(kāi)，而后經(jīng)氨蒸汽顯色，在紫外燈下進(jìn)行檢視。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，供試品與對(duì)照品在相同的位置存在同顏色的熒光斑點(diǎn)，并且陰性對(duì)照組無(wú)明顯干擾。詳見(jiàn)下圖。

2.2 紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)丹參素鈉的含量進(jìn)行檢測(cè)

對(duì)照品：丹參素鈉對(duì)照品0.0083 g，在25 mL的棕色量瓶中，加甲醇定容，準(zhǔn)確吸取2 mL，在25 mL容量瓶中經(jīng)甲醇定容，搖勻后待用；供試品：精密量取丹參飲口服液5 mL，蒸干后將殘?jiān)?jīng)甲醇溶解，在50 mL經(jīng)甲醇定容，搖勻后過(guò)濾，吸取濾液5 mL在100 mL容量瓶中加甲醇定容，搖勻后既得供試品溶液[3]。

實(shí)驗(yàn)時(shí)，采用3 mL的甲醇溶液進(jìn)行參比，經(jīng)紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)展開(kāi)基線校準(zhǔn)，而后不改變參照池，取對(duì)照品3 mL，放置在空置的樣品池中，經(jīng)紫外－可見(jiàn)光譜展開(kāi)測(cè)定；紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)的相關(guān)參數(shù)為：掃描范圍在210~300 nm之間，中速采樣間隔為1 nm。最終結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在282 nm處，丹參素鈉紫外－可見(jiàn)光譜圖存在最大吸收峰，陰性樣品未出現(xiàn)吸收峰。在282 nm處對(duì)3批供試品的吸光度進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果分別為0.609,0.613,0,624，RSD為0.8%。這一結(jié)果證實(shí)，該檢測(cè)方法準(zhǔn)確可靠。最終計(jì)算得到該批樣品每1 mL中含有丹參素鈉吸光度不低于0.6。

2.3 高效液相色譜法對(duì)丹參素鈉含量進(jìn)行檢測(cè)

所用色譜柱為：Inertsil ODS-C18柱，規(guī)格為250 mm×4.6 mm，5 um。柱溫為40℃，流動(dòng)相為：甲醇－1%的冰乙酸=13:87，檢測(cè)時(shí)采取二元梯度洗脫法，流速控制在1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm,進(jìn)樣量為10 uL。

表1 加樣回收實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

對(duì)照品：精稱丹參素鈉對(duì)照品0.0083 g，經(jīng)甲醇在25 mL棕色量瓶中溶解后定容，所得溶液濃度為0.332 mg/mL，待用；供試品：精密吸取丹參飲口服液適量，經(jīng)0.45 um的微孔濾膜過(guò)濾后待用[4]。

在實(shí)驗(yàn)時(shí)，分別吸取上述所制備的對(duì)照品和供試品溶液10uL,注入到液相色譜儀后，測(cè)定結(jié)果，在線性實(shí)驗(yàn)中所得丹參素鈉回歸方程為A=105C-649876，（n=5），丹參素鈉在0.83~6.64 ug內(nèi)具有良好的線性關(guān)系；精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，峰面積均值為1448754，RSD為1.15%，證實(shí)實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好；穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，峰面積平均值為1410772，RSD為3.19%，證實(shí)供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性；重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參素鈉的平均含量為0.18mg/g，RSD為1.03%，證實(shí)分析方法的重復(fù)性良好；加樣回收實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參素鈉的平均回收率為97.26%，RSD為1.15%。證實(shí)分析方法準(zhǔn)確可靠。詳見(jiàn)表1。

3 討論

在臨床上丹參經(jīng)常用來(lái)對(duì)婦科病、缺血性中風(fēng)、冠心病、動(dòng)脈粥樣硬化等疾病展開(kāi)治療，活性成分包括脂溶性、水溶性兩類，脂溶性成分包括：隱丹參酮、丹參酮、丹參酮ⅡA等。最近幾年，在國(guó)內(nèi)外對(duì)丹參的脂溶性成分展開(kāi)了諸多的實(shí)驗(yàn)研究，在丹參中分離得到二萜醌類化合物超過(guò)40種，并且存在有不同的藥理作用[5]。對(duì)于傳統(tǒng)中醫(yī)藥臨床治療工作而言，丹參多數(shù)采取水煎的方式，也就是說(shuō)應(yīng)用的多位水溶性成分，因此對(duì)丹參的水溶性成分展開(kāi)實(shí)驗(yàn)研究的意義更大。曾有相關(guān)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，丹參的水溶性成分包括丹參素、迷迭香酸、原兒茶醛、紫草酸以及丹酚酸（A、B、C、D、E、F、G）等。近幾年研究制成的丹參飲口服液在臨床中得到了廣泛的應(yīng)用，其對(duì)氣滯血瘀引起的心胃諸痛具有良好的臨床治療效果[6]。本次研究中出于對(duì)丹參飲口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒定方法進(jìn)行分析探討的目的，分別采取薄層色譜、紫外－可見(jiàn)光譜以及高效液相色譜法對(duì)丹參飲口服液中丹參素鈉的含量展開(kāi)了檢測(cè)和鑒別，最終發(fā)現(xiàn)，本次實(shí)驗(yàn)中所建立的丹參素鈉高效液相色譜法具有較強(qiáng)的專屬性，且其重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單，結(jié)果可靠，在丹參飲口服液質(zhì)量控制中具有重要作用，值得關(guān)注。

[1] 蒲清榮,陳玉蘭,黃銳,等.丹參飲口服液水提取工藝研究[J].藥物評(píng)價(jià)研究,2012,35(4):270-271.

[2] 朱榮,朱斌.婦女痛經(jīng)丸質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)鑒定研究[J].臨床合理用藥,2012,5(2B):27-28.

[3] 劉省存,凡小慶,陳先亮,等.不同產(chǎn)地丹參的紫外光譜[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2011,28(2):573-574.

[4] 李化,于艷秋,楊濱.黃酮化合物與Fe（Ⅱ）絡(luò)合反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)研究[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜,2010,16(17):99-100.

[5] 李海燕,李振國(guó),宋漢敏,等.HPLC測(cè)定冠心生脈口服液中丹參素鈉的含量[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(12):78-79.

[6] 周靜,李惠芬,王洪志,等.丹參水溶性成分與脂溶性成分抑菌作用的考察[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2008,19(9):2130.