葉 洪，林永輝，楊 方，劉正才，盧聲宇，藍(lán)錦昌

(1.福建省出入境檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，福建福州350001;2.福建農(nóng)林大學(xué)食品科學(xué)學(xué)院，福建 福州350002)

近年來合成麝香中作為一種“假持久性有機(jī)污染物”［1］受到國內(nèi)外廣泛關(guān)注，包括環(huán)境激素［2］、遺傳毒性［3］、生理生態(tài)毒性［4］、微生物毒性［5］和影響酶活［6］等，其危害具有持久性.目前研究人員已在大氣［7］、土壤［8］、污水污泥［9］以及魚蝦貝類［10－11］等生物樣品體內(nèi)檢測到合成麝香，甚至在人體血液［12－13］、母乳［14］和脂肪組織［15］中也檢測到合成麝香化合物.人體內(nèi)的合成麝香主要是來自化工產(chǎn)品和高蓄積可食性的生物體，因此探索食品尤其魚蝦貝類等易富集合成麝香的水產(chǎn)品中合成麝香的檢測方法很有必要.我國對(duì)水產(chǎn)品中合成麝香的研究較少，對(duì)目前禁用的葵子麝香、西藏麝香、傘花麝香和限用的二甲苯麝香的研究尚未見報(bào)道.本文采用超聲波有機(jī)溶劑萃取，通過硅膠柱固相萃取法凈化，并采用氣相色譜－質(zhì)譜(GC-MS)檢測水產(chǎn)品中9種合成麝香.

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀7890A-5975C(GC-MS)為美國Agilent公司產(chǎn)品;漩渦振蕩器XW-80A為上海精科公司產(chǎn)品;超聲波儀KQ500DE為昆山超聲波儀器有限公司產(chǎn)品;臺(tái)式離心機(jī)TDL-5-A為上海安亭科學(xué)儀器廠產(chǎn)品;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀2004HK15為上海申生科技有限公司產(chǎn)品;氮吹儀HGC-36A為浙江森森實(shí)業(yè)有限公司產(chǎn)品;硅膠柱L3860為中國bestown公司產(chǎn)品.

薩利麝香(ADBI)、粉檀麝香(AHMI)、葵子麝香(MA)、特拉斯麝香(ATII)、佳樂麝香(HHCB)、二甲苯麝香(MX)、吐納麝香(AHTN)、傘花麝香(MM)、西藏麝香(MT)以及內(nèi)標(biāo)物熒蒽-D10(純度99.5%)均購于德國Dr.Ehrenstrofer公司;正己烷(色譜純)為美國SIGMA公司產(chǎn)品;二氯甲烷(分析純)為國藥集團(tuán)化學(xué)試品.

標(biāo)準(zhǔn)混合液:準(zhǔn)確移取9種標(biāo)準(zhǔn)品麝香，經(jīng)正己烷稀釋，配制成200 μg·L－1混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，于4℃下保存;準(zhǔn)確移取內(nèi)標(biāo)物，經(jīng)正己烷稀釋，配制成2 μg·mL－1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于4℃下保存.標(biāo)準(zhǔn)曲線:用正己烷配制成外標(biāo)濃度分別為 0.5、1、2、5、10、50、100 μg·mL－1，內(nèi)標(biāo)濃度均為 20 μg·L－1的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液.

1.2 氣相色譜及質(zhì)譜條件

1.2.1 氣相色譜條件 色譜柱為19091S-433 HP-5MS(30 m×0.25 mm×0.25 μm)色譜柱毛細(xì)管，色譜柱升溫程序:初溫80℃，保持2 min后以10℃·min－1速度升至170℃，然后以1℃·min－1升至180℃，最后以30℃·min－1升至270℃，保持7 min.進(jìn)樣口溫度250℃，進(jìn)樣量1 μL，不分流進(jìn)樣，載氣為氦氣(99.999%).

1.2.2 質(zhì)譜條件 EI離子源，電子能量為70 eV，離子源溫度230℃，質(zhì)譜儀接口溫度280℃，溶劑延遲4 min，選擇離子掃描模式(SIM)，目標(biāo)分析物的保留時(shí)間和檢測離子見表1.

表1 9種合成麝香和內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)譜條件Table 1 Mass spectrometry conditions for 9 kinds of synthetic musk and internal standard matter

1.3 樣品前處理

取約2 g均質(zhì)樣品于離心管中，準(zhǔn)確加入1.00 mL 20 μg·L－1內(nèi)標(biāo)液、20 mL正己烷，漩渦混勻;超聲提取30 min，4500 r·min－1離心5 min;取上清液10 mL過已采用5 mL二氯甲烷、10 mL正已烷預(yù)處理的硅膠SPE柱;經(jīng)4 mL二氯甲烷洗脫(全過程過柱流速不大于2 mL·min－1)，收集濾液，氮吹至近干;用正己烷定容至1.00 mL，過0.2 μm 微孔濾膜，采用GC-MS測定.

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品提取條件的優(yōu)化

人工合成麝香具有很強(qiáng)的脂溶性，易溶于非極性有機(jī)溶劑，選取正己烷、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、環(huán)己烷、二氯甲烷為提取溶劑進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，提取的回收率分別為89.4% －95.6%、82.3% －94.3%、83.9% －91.1%、81.9% －89%、84.7% －90.4%、80.7% －90.5%(圖 1).結(jié)果表明，正己烷提取效果最好，且所含雜質(zhì)較少，故選取正己烷為提取溶劑.

圖1 提取溶劑對(duì)回收率的影響(n=6)Fig.1 Effect of extraction solvents on recovery rate(n=6)

以正己烷為提取溶劑，9種合成麝香在提取時(shí)間為15、30、45 min的回收率分別為74.7% －85.9%、89.4% －95.6%和 90.1% －95.5%，選取樣品超聲提取時(shí)間為 30 min.

2.2 固相萃取凈化條件的優(yōu)化

經(jīng)C18柱、HLB柱、Envi-Carb柱、Si-OH柱、JR-AL-N柱的凈化后9種合成麝香的回收率見表2.從表2可知:5個(gè)柱子中硅膠柱的極性最強(qiáng)，對(duì)合成麝香的吸附性最小，故硅膠柱易于洗脫，回收率高，其他小柱對(duì)合成麝香的吸附性強(qiáng)，故回收率低，結(jié)果表明硅膠柱的凈化效果最好，9種麝香的回收率都接近80%，且含雜質(zhì)少，故選取硅膠柱為固相萃取柱.

表2 不同固相萃取柱添加回收試驗(yàn)的回收率(n=6)Table 2 Recoveries of different SPE cartridges in recovery test(n=6)

考察不同體積(2、4、6 mL)正己烷、環(huán)己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷的洗脫效果，結(jié)果表明，4 mL二氯甲烷的洗脫效果最佳，對(duì)9種合成麝香均能完全洗脫，故選取4 mL二氯甲烷為洗脫液.

2.3 方法的線性范圍和檢出限

采用SIM模式對(duì)9種合成麝香含量均為10 μg·L－1的混合標(biāo)樣(內(nèi)標(biāo)物熒蒽-D10濃度為10 μg·L－1)進(jìn)行檢測，麝香對(duì)應(yīng)峰的分離效果好，易于檢測，可通過各種合成麝香特征離子的峰面積對(duì)目標(biāo)分析物進(jìn)行定量分析，結(jié)果如圖2所示.

圖2 9種合成麝香的色譜圖Fig.2 Total ion chromatograms(TIC)of nine kinds of synthetic musk

在氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀的最佳條件下，進(jìn)樣1 μL，對(duì)0.5－100 mg·L－1的混合標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行分析，得到各目標(biāo)物的線性方程、相關(guān)系數(shù)和檢出限(表3)，其中儀器的檢出限按信噪比等于3計(jì)算.

2.4 回收率和精密度

采用內(nèi)標(biāo)法對(duì)樣品進(jìn)行定量分析，采用前處理方法熒蒽-D10的回收率為82.8% －91.6%.

對(duì)黃姑魚、真鯛魚和蝦3個(gè)樣品進(jìn)行回收試驗(yàn)，添加1.00 mL 10 μg·L－1合成麝香混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(相當(dāng)于10 μg·kg－1的樣品添加量)，通過內(nèi)標(biāo)法定量，樣品的平均回收率和標(biāo)準(zhǔn)偏差見表4.從表4可以看出，3種樣品的9種目標(biāo)物的平均回收率為84.1% －116.4%，標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.8% －9.5%.

表3 合成麝香的標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)及儀器檢出限Table 3 Parameters of calibration and instrumental LOD of synthetic musk

表4 3種樣品中合成麝香的測定及加標(biāo)回收結(jié)果(n=6)Table 4 Results of the determination and spiked recoveries of synthetic musk in three samples(n=6)

2.5 樣品分析

采用本方法對(duì)本地市場上黃姑魚、真鯛魚和蝦3個(gè)樣品進(jìn)行檢測分析.結(jié)果表明，3個(gè)水產(chǎn)品樣品中均含有佳樂麝香和吐納麝香，黃姑魚樣品中檢出 53.09 μg·kg－1佳樂麝香和 19.27 μg·kg－1吐納麝香(圖3);真鯛魚樣品中檢出 59.85 μg·kg－1佳樂麝香和 3.62 μg·kg－1吐納麝香;蝦樣品中檢出 96.37 μg·kg－1佳樂麝香和 23.61 μg·kg－1吐納麝香.

圖3 黃姑魚樣品譜圖Fig.3 TIC of SM from Nibea albiflora samples

3 小結(jié)

采用正己烷超聲波振蕩提取樣品，通過硅膠固相萃取柱凈化，并采用氣相色譜－質(zhì)譜(GC-MS)檢測，對(duì)水產(chǎn)品樣品中的9種合成麝香進(jìn)行定性定量分析，結(jié)果表明，該方法簡單易行，準(zhǔn)確可靠，回收率高.

［1］MATAMOROS V，BAYONA J M.Elimination of pharmaceuticals and personal care products in subsurface flow constructed wetlands［J］.Environment Science Technology，2006，40:5811 －5816.

［2］SEINEN W，LEMMEN J G，PIETERS R H，et al.AHTN and HHCB show weak estrogenic-but no uterotrophic activity［J］.Toxicology Letters，1999，111:161 －168.

［3］CARLSSON G，ORN S，ANDERSSON P L，et al.The impact of musk ketone on reproduction in zebra fish(Danio rerio)［J］.Marine Environmental Research，2000，50:237 －241.

［4］FUKAYAMA M Y，EASTERDAY O D，SERAFINO P A，et al.Sub chronic inhalation studies of complex fragrance mixtures rats and hamsters［J］.Toxicology Letters，1999，111:175 －187.

［5］ABRAMSSON-ZETTERBERG L，SLANINA P.Macro-cyclic musk compounds－ an absence of genotoxicity in the Ames test and the in vivo Micronucleus assay［J］.Toxicology Letters，2002，135:155 －163.

［6］LEHMAN-MCKEEMAN L D，CAUDILL D，VASSALLO J D，et al.Effects of musk xylene and musk ketone on rat hepatic cytochrome P450 enzymes［J］.Toxicology Letters，1999，111:105 － 115.

［7］REGUEIRO J，GARCIA-JARES C，LLOMPART M，et al.Development of a method based on sorbent trapping followed by solid-phase micro-extraction for the determination of synthetic musk in indoor air［J］.Journal of Chromatography A，2009，1216(14):2805－2815.

［8］胡正君，史亞利，蔡亞岐.加速溶劑萃取氣相色譜質(zhì)譜法測定污泥、底泥及土壤樣品中的合成麝香［J］.分析化學(xué)研究簡報(bào)，2010，38(6):885 －888.

［9］ZHENG X Y，SHENG G Y，XIONG Y，et al.Determination of polycyclic musk in sewage sludge from Guangdong，China using GC-EI-MS［J］.Chemosphere，2005，60(6):817 －823.

［10］WAN Y，WEI W Q，HU J Y，et al.Levels，tissue distribution，and age related accumulation of synthetic musk fragrances in chinese sturgeon:comparison to organ chlorines［J］.Environment Science Technology，2007，41(2):424 －430.

［11］胡正君，史亞利，蔡亞岐.加速溶劑萃取/氣相色譜質(zhì)譜法測定魚類樣品中的多環(huán)麝香［J］.環(huán)境化學(xué)，2011，30(1):362－265.

［12］胡正君，史亞利，蔡亞岐.氣相色譜－質(zhì)譜法測定人體血液樣品中合成麝香［J］.環(huán)境化學(xué)，2010，29(3):530－535.

［13］HUTTER H P，WALLNER P，MOSHAMMER H，et al.Blood concentrations of polycyclic musk in healthy young adults［J］.Chemosphere，2005，59(4):487 －92.

［14］LIGNELL S，DARNERUD P O，AUNE M，et al.Temporal trends of synthetic musk compounds in mothers'milk and associations with personal use of perfumed products［J］.Environment Science Technology，2008，42(17):6743 －6748.

［15］KANNAN K，REINER J L，YUN S H，et al.Polycyclic musk compounds in higher tropic level aquatic organisms and humans from the united states［J］.Chemosphere，2005，61(5):693 － 700.