范永熙 (高密市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，山東 高密 261500)

胃癌是消化系統(tǒng)較為常見的一種惡性腫瘤〔1〕，對早期胃癌進(jìn)行手術(shù)是唯一可行的根治方法〔2〕。當(dāng)前胃癌的檢查方法多為胃鏡以及活檢，雖然一定程度可以發(fā)現(xiàn)腫瘤的存在，但多在患者出現(xiàn)明顯癥狀后才考慮進(jìn)行檢測，一旦確診往往病情已進(jìn)入中晚期〔3〕。因此，尋找一種簡單、準(zhǔn)確、并能在早期提示惡性病變的方法就成為了目前的迫切任務(wù)。本研究應(yīng)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)對胃癌患者病變組織中鳥苷酸環(huán)化酶C信使核糖核酸(GC-C mRNA)進(jìn)行檢測，探討其與外周血微轉(zhuǎn)移及病情判斷的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 60例胃癌患者及30例相應(yīng)遠(yuǎn)癌正常胃黏膜組織標(biāo)本均來自我院2010年1月至2012年6月外科手術(shù)切除的標(biāo)本。60例胃癌患者中，男42例，女18例，年齡60～83〔平均(72.1±9.7)〕歲。對術(shù)后腫瘤大小進(jìn)行分組，其中＜5 cm者32例、≥5 cm者28例;根據(jù)分化程度進(jìn)行分組，其中29例為中、高分化腺癌，31例為低分化腺癌。另外，本組中28例為腸型胃癌、32例為彌漫型胃癌;41例患者出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。胃癌分期:Ⅰ～Ⅱ期26例、Ⅲ～Ⅳ期34例。

1.2 實(shí)時定量PCR方法 經(jīng)過培養(yǎng)的細(xì)胞，利用TRIzo1提取總RNA后使用RT-PCR試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，最后使用SYBR Green熒光染料進(jìn)行實(shí)時定量PCR擴(kuò)增，反應(yīng)條件為50℃5 min，95℃ 3 min，95℃ 20 s，60℃ 1 min。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)和方差因素分析。

2 結(jié)果

2.1 GC-C mRNA在胃癌組織以及遠(yuǎn)癌胃黏膜組織中的表達(dá)比較 GC-C mRNA在遠(yuǎn)癌胃黏膜組織中不存在表達(dá)，而在胃癌組織中的表達(dá)陽性率(50例)及表達(dá)水平(40.95±25.20)均明顯升高，與遠(yuǎn)癌胃黏膜組織比較有顯著差異(均P＜0.01)。

2.2 GC-C mRNA在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析 根據(jù)性別、年齡、腫瘤大小、Lauren分型、TNM分期、分化程度、淋巴轉(zhuǎn)移等情況分別進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)腸型胃癌的表達(dá)水平明顯高于彌漫型胃癌(P＜0.01)，與其他因素?zé)o明顯關(guān)系。見表1。

表1 GC-C mRNA在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析(±s)

表1 GC-C mRNA在胃癌組織中表達(dá)的相關(guān)性分析(±s)

項(xiàng)目 n GC-C mRNA t值 P值＜70 25 41.52±28.36 0.27 ＞0.05≥70 35 39.82±20.51性別 男 42 38.66±33.66 0.56 ＞0.05女 18 43.53±23.41腫瘤大小(cm) ＜5 32 38.04±17.63 0.72 ＞0.05≥5 28 42.49±29.62 Lauren分型 腸型 28 51.30±26.26 3.75 ＜0.01彌漫型 32 30.33±16.49 TNM分期 Ⅰ～Ⅱ期 26 41.41±28.33 0.10 ＞0.05Ⅲ～Ⅳ期 34 42.12±26.90分化程度 低分化 31 40.77±25.63 0.36 ＞0.05中、高分化 29 38.51±22.51淋巴轉(zhuǎn)移 有 41 38.25±25.62 0.56 ＞0.05無年齡(歲)19 42.01±20.08

3 討論

目前，對于胃癌的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但認(rèn)為遺傳和環(huán)境是胃癌發(fā)病的兩大重要相關(guān)因素〔4〕。多基因改變、多因素參與、多階段發(fā)生是目前遺傳和環(huán)境導(dǎo)致胃癌發(fā)生的最基本原因〔5〕。Correa學(xué)說認(rèn)為胃癌的發(fā)生過程中伴隨著多種基因異常，例如蛋白質(zhì)、酶以及基因等的改變〔6〕。GC-C屬于N-連接糖蛋白受體，是一次性跨膜蛋白，正常情況下僅存在于腸黏膜細(xì)胞，不在腸外組織中表達(dá)〔7〕。Park等〔8〕通過檢測發(fā)現(xiàn)胃腺癌組織以及癌旁組織中GC-C mRNA的陽性檢測率分別為88.89%和85.71%，而健康正常人的胃黏膜中不表達(dá)GC-C mRNA。

胃癌是我國最常見惡性腫瘤之一，早期診斷具有重要意義。隨著分子生物學(xué)、生物信息學(xué)和功能蛋白質(zhì)組學(xué)等相關(guān)領(lǐng)域的科技進(jìn)步，蛋白標(biāo)志物具有良好的發(fā)展前景〔9〕。研究認(rèn)為〔10〕，GC-C以及CDP二?；沼秃铣擅?CDX2)的異常表達(dá)均與胃黏膜癌變的發(fā)生有密切關(guān)系，兩者共同參與了人胃腺癌致癌過程的調(diào)控。因此，檢測GC-C以及CDX2能夠幫助臨床醫(yī)師對早期胃癌以及胃癌前病變進(jìn)行診斷。在一些胃癌的實(shí)驗(yàn)研究中已經(jīng)表明〔8〕，通過體外培養(yǎng)的胃癌細(xì)胞株(SGC-7901)進(jìn)行PCR檢測可以發(fā)現(xiàn)GC-C mRNA的表達(dá)程度明顯上升。而通過靶向GC-C mRNA的siRNA能夠有效抑制SGC-7901的生長與繁殖，從而達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞以及防止其轉(zhuǎn)移的目的。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，胃癌患者GC-C mRNA呈現(xiàn)較高的表達(dá)，而GC-C mRNA在遠(yuǎn)癌胃黏膜組織則未見有任何的表達(dá);而且，腸型胃癌中的表達(dá)明顯高于彌漫型胃癌。這也說明GC-C在腸型胃癌的發(fā)生、發(fā)展中扮演了重要的角色。

綜上，在胃黏膜癌變過程中，GC-C mRNA的異常表達(dá)是胃癌發(fā)生的早期表現(xiàn)。因此，可通過PCR技術(shù)對高危人群胃黏膜組織的GC-C mRNA進(jìn)行測定來早期發(fā)現(xiàn)胃癌，從而幫助患者早期治療，最終提高胃癌患者的近期與遠(yuǎn)期生存率。

1 宗祥云，師英強(qiáng)，孫孟紅，等.大腸癌患者外周血中鳥苷酸環(huán)化酶C的表達(dá)及其意義〔J〕.中國癌癥雜志，2005;15(4):339-42.

2 毛振彪，許 鐘，張健鋒，等.鳥苷酸環(huán)化酶C和尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2在胃癌及癌前病變組織中的表達(dá)及意義〔J〕.中華消化雜志，2008;28(10):673-7.

3 朱惠君，許 鐘，毛振彪，等.鳥苷酸環(huán)化酶C和尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2蛋白在胃癌及癌前病變組織中的表達(dá)〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2008;88(48):3418-21.

4 張健鋒，薛世民，張 弘，等.胃癌患者外周血中鳥苷酸環(huán)化酶C信使RNA的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2012;92(6):371-5.

5 宗祥云，師英強(qiáng)，孫孟紅，等.鳥苷酸環(huán)化酶C在大腸癌淋巴結(jié)中表達(dá)的意義〔J〕.外科理論與實(shí)踐，2004;9(5):407-10.

6 毛振彪，許 鐘，張健鋒，等.胃癌組織中GC-C和CDX2 mRNA的表達(dá)及臨床意義〔J〕.江蘇醫(yī)藥，2009;35(2):176-8.

7 張健鋒，印紅軍，張 弘，等.穩(wěn)定干擾鳥苷酸環(huán)化酶C基因表達(dá)的人胃腺癌細(xì)胞株的篩選和建立〔J〕.胃腸病學(xué)，2011;16(7):429-31.

8 Park J，Schulz S，Haaf J，et al.Ectopic expression of guanylyl cyclase C in adenocarcinomas of the esophagus and stomach〔J〕.Cancer Epidemiol，Biomarkers Prev，2002;11(8):739-44.

9 劉洪義，邢 金，所 劍.Twist基因沉默對人胃癌SGC7901細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2012;32(16):3464-6.

10 毛振彪，王唯一，張冬雷，等.實(shí)時熒光定量PCR檢測大腸癌患者外周血鳥苷酰環(huán)化酶C基因及其臨床意義〔J〕.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2005;26(11):1252-5.