劉莉如 楊開倫 滑 靜 王曉霞 劉亭婷

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊 830052;2.北京農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，北京 102206;3.首都師范大學(xué)，北京 100048)

當(dāng)前，細(xì)菌性感染和細(xì)菌性疾病呈上升趨勢(shì)，耐藥性細(xì)菌，如耐藥性結(jié)核桿菌、大腸桿菌和被稱為“超級(jí)細(xì)菌”耐甲氧西林金葡菌(MRSA)等對(duì)人和動(dòng)物造成的危害日趨嚴(yán)重，這種現(xiàn)狀急需改善，而抗菌肽(antimicrobial peptides，ABPs)對(duì)細(xì)菌具有強(qiáng)烈的抑制作用，在飼料中長(zhǎng)期添加抗菌肽，細(xì)菌不易獲得耐藥性，使用效果穩(wěn)定，屬無(wú)毒副作用、無(wú)殘留、無(wú)致細(xì)菌耐藥性的一類環(huán)保型飼料添加劑?？梢酝ㄟ^(guò)向海蘭褐仔公雞基礎(chǔ)飼糧中添加天蠶素抗菌肽(cecropin)，達(dá)到徹底替代飼用抗生素的使用的目的，對(duì)降低抗生素殘留，生產(chǎn)綠色、安全、營(yíng)養(yǎng)的畜禽產(chǎn)品，促進(jìn)健康養(yǎng)殖的發(fā)展具有重要意義。前人對(duì)抗菌肽的研究主要集中在分離純化、鑒定、抗微生物活性等方面，在動(dòng)物生產(chǎn)方面，尤其在海蘭褐仔公雞黏膜免疫方面的研究，目前罕見(jiàn)報(bào)道。有關(guān)在飼糧中分別添加適量抗生素和不同水平抗菌肽，研究?jī)烧邔?duì)海蘭褐仔公雞各試驗(yàn)指標(biāo)的影響，進(jìn)一步比較畜禽飼糧中抗菌肽與抗生素的添加效果，進(jìn)而確定適宜添加量的文獻(xiàn)更是鮮見(jiàn)。為此，本文旨在通過(guò)在海蘭褐仔公雞飼糧中添加不同水平天蠶素抗菌肽，研究其對(duì)小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)、免疫活性細(xì)胞數(shù)量的影響，為進(jìn)一步研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)所用天蠶素抗菌肽主要成分為枯草芽孢桿菌，含量≥1×109CFU/g，由國(guó)家飼料工程技術(shù)研究中心研制，北京中農(nóng)穎泰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。試驗(yàn)所用抗生素為金霉素。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)選用336只1日齡海蘭褐仔公雞(購(gòu)自北京農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院種雞場(chǎng))，平均體重為(39.14±0.17)g，3層籠養(yǎng)。飼喂期內(nèi)，試驗(yàn)雞只自由采食飲水，其他免疫和消毒措施遵照雞場(chǎng)正常程序進(jìn)行，每天觀察雞群健康狀況，并記錄試驗(yàn)數(shù)據(jù)。飼養(yǎng)試驗(yàn)在中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院南口中試基地雞舍進(jìn)行。

1.3 試驗(yàn)分組設(shè)計(jì)

將試驗(yàn)選用的336只1日齡健康海蘭褐仔公雞隨機(jī)分為7個(gè)處理(表1)，每個(gè)處理4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12只雞，各處理初始體重差異不顯著(P＞0.05)。飼養(yǎng)試驗(yàn)期為42 d。

1.4 試驗(yàn)飼糧

以玉米-豆粕型飼糧為基礎(chǔ)飼糧，飼糧按雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)(NY/T 33—2004)配制。

表1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)Table1 Experimental design

表2 基礎(chǔ)飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table2 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.5 組織切片制作方法

組織切片制作方法為:1)取材及固定;2)修塊;3)脫水、硬化;4)透明;5)浸蠟;6)包埋;7)塑型和切片;8)展片;9)烘片;10)染色。

1.6 常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)組織染色程序流程

常規(guī)HE組織染色程序流程為:1)組織切片常規(guī)脫蠟[二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯∶無(wú)水乙醇(1∶1)，5 min];2)無(wú)水乙醇和梯度酒精下行(無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ，5 min→95%、80%、70%酒精，2 min);3)蘇木精染色，6 min;4)蒸餾水漂洗，1 min;5)1%鹽酸酒精分色，5 s;6)自來(lái)水藍(lán)化，25 min;7)伊紅染色，3 s;8)梯度酒精上行(70%、80%酒精，2 min)，95%酒精、無(wú)水乙醇Ⅰ、無(wú)水乙醇Ⅱ，5 min;9)透明[二甲苯∶無(wú)水乙醇(1∶1)、二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ，5 min];10)封固為中性樹膠封片。

1.7 糖原及多糖高碘酸-Schiff氏液(PAS)染色程序流程

PAS染色程序流程為:1)石蠟組織切片，常規(guī)脫蠟程序同HE組織染色程序流程1)～2)步驟;2)蒸餾水過(guò)洗2次;3)高碘酸氧化液處理10 min;4)充分蒸餾水洗;5)Schiff氏液染色10 min;6)流水沖洗30 s至2 min，對(duì)于著色較深的切片可適當(dāng)縮短時(shí)間;7)用Mayer明礬-蘇木精液染細(xì)胞核3～5 min;8)0.5%鹽酸乙醇液分化30 s;9)自來(lái)水浸洗2 min;10)無(wú)水乙醇Ⅰ，5 min;11)無(wú)水乙醇Ⅱ，5 min;12)二甲苯∶無(wú)水乙醇(1∶1)，5 min;13)二甲苯Ⅰ，5 min;14)二甲苯Ⅱ，5 min;15)封固為中性樹膠封片。

待中性樹脂干燥后，用光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。觀察海蘭褐仔公雞小腸黏膜基本形態(tài)結(jié)構(gòu);其中，HE染色觀察腸黏膜上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞，PAS染色觀察杯狀細(xì)胞。

1.8 組織切片讀取方法

在OLYMPUS生物顯微鏡10倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行石蠟切片的觀察、取圖，在組織切片上選取典型視野進(jìn)行拍照，使用Motic 2.0通用圖像分析軟件測(cè)量小腸絨毛高度、隱窩深度、黏膜厚度以及肌層厚度，觀察和測(cè)量海蘭褐仔公雞十二指腸、空腸和回腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞、杯狀細(xì)胞的分布和數(shù)量。

1.9 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析

利用Excel軟件對(duì)各重復(fù)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用SPSS 17.0軟件ANOVA進(jìn)行顯著性分析，并采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較。測(cè)定結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由圖1可以看出，經(jīng)HE染色后，光鏡下觀察，添加量為350 mg/kg的抗菌肽Ⅴ組海蘭褐仔公雞小腸黏膜結(jié)構(gòu)較為完整，層次分明，腸黏膜上皮表面的紋狀緣結(jié)構(gòu)清晰，腸絨毛排列較緊密。腸黏膜上皮細(xì)胞輪廓清晰，排列緊密，染色鮮明。柱狀細(xì)胞呈高柱狀，單層排列，胞漿豐富，胞核橢圓形，位于細(xì)胞基部。杯狀細(xì)胞呈現(xiàn)高腳杯狀，分散在柱狀細(xì)胞之間。而對(duì)照組的黏膜結(jié)構(gòu)不夠完整，偶見(jiàn)腸絨毛頂端脫落現(xiàn)象，有的絨毛較細(xì)，尤其是十二指腸。

圖1 抗菌肽Ⅴ組空腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)顯微照片F(xiàn)ig.1 Photomicrographs of mucosal morphology of jejunum in ABPs groupⅤ

2.1.1 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞十二指腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表3可以看出，隨著飼糧中天蠶素抗菌肽添加量的不斷增加，十二指腸絨毛高度呈現(xiàn)升高趨勢(shì)，其中抗菌肽Ⅴ組十二指腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、抗生素組、抗菌肽Ⅰ組(P＜0.05)，與對(duì)照組、抗生素組相比分別提高了24.88%和19.52%?？咕蘑?、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組之間絨毛高度不存在顯著性差異(P＞0.05)。

十二指腸隱窩深度各處理之間不存在顯著性差異(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組十二指腸黏膜厚度顯著高于其他各處理(P＜0.05)，分別比對(duì)照組提高了15.83%、25.74%，而其他各處理之間不存在顯著性差異(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組十二指腸肌層厚度顯著高于對(duì)照組、抗生素組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅰ、Ⅱ組和抗生素組與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)，各抗菌肽組之間同樣差異不顯著(P＞0.05)。但抗菌肽Ⅴ組肌層厚度數(shù)值最高，比對(duì)照組提高了64.98%，比抗生素組提高了37.43%。

2.1.2 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞空腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表4可以看出，抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組空腸絨毛高度與對(duì)照組、抗菌肽Ⅰ組差異顯著(P＜0.05)，與對(duì)照組相比，分別提高了19.51%、24.08%，但與抗生素組差異不顯著(P＞0.05)?？咕蘑蠼M顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，但與抗生素組也差異不顯著(P＞0.05)?？咕蘑颉ⅱ?、Ⅳ、Ⅴ組之間同樣不存在顯著性差異(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組空腸隱窩深度顯著低于對(duì)照組、抗菌肽Ⅰ組(P＜0.05)，與抗生素組不存在顯著性差異(P＞0.05)，抗菌肽Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組之間同樣差異不顯著(P＞0.05)。

抗生素組及抗菌肽Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組空腸黏膜厚度均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，且抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組也顯著高于抗生素組和其他抗菌肽組(P＜0.05)，且抗菌肽Ⅴ組又顯著高于抗菌肽Ⅳ組(P＜0.05)。

空腸肌層厚度各處理之間差異不顯著(P＞0.05)。

表3 抗菌肽對(duì)仔公雞十二指腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table3 Effects of ABPs on mucosal morphology of duodenum of young roosters μm

表4 抗菌肽對(duì)仔公雞空腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table4 Effects of ABPs on mucosal morphology of jejunum of young roosters μm

2.1.3 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞回腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表5可以看出，抗菌肽Ⅴ組回腸絨毛高度顯著高于對(duì)照組、抗菌肽Ⅰ組(P＜0.05)，比對(duì)照組提高了13.31%，但與抗生素組之間不存在顯著性差異(P＞0.05)，抗菌肽Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組之間差異不顯著(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅴ組回腸隱窩深度顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)，且與抗菌肽Ⅰ、Ⅱ組差異顯著(P＜0.05)，與抗生素組不存在顯著性差異(P＞0.05)，抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組之間同樣差異不顯著(P ＞0.05)。

抗菌肽Ⅴ組回腸黏膜厚度顯著高于對(duì)照組、抗菌肽Ⅰ組(P＜0.05)，比對(duì)照組提高了20.86%，但與抗生素組之間不存在顯著性差異(P＞0.05)，抗菌肽Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組之間差異也不顯著(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組回腸肌層厚度顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，分別比對(duì)照組提高了46.23%、52.60%，與抗生素組差異不顯著(P＞0.05)，且各抗菌肽組之間不存在顯著性差異(P＞0.05)，但肌層厚度有逐漸升高的趨勢(shì)。

表5 抗菌肽對(duì)仔公雞回腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table5 Effects of ABPs on mucosal morphology of ileum of young roosters μm

2.2 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞黏膜免疫相關(guān)細(xì)胞數(shù)量的影響

2.2.1 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量及分布的影響

HE染色結(jié)果顯示，海蘭褐仔公雞十二指腸、空腸(圖2)、回腸絨毛上均有上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞分布。上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞多位于上皮細(xì)胞基側(cè)膜附近，少數(shù)位于上皮核層和頂層，以小型細(xì)胞為主，核大，呈圓形，深染，胞漿少。固有層內(nèi)也有淋巴細(xì)胞分布。

圖2 抗菌肽Ⅴ組空腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)顯微照片F(xiàn)ig.2 Photomicrographs of morphology of intraepithelial lymphocytes in jejunum in ABPs groupⅤ

由表6可以看出，各抗菌肽組十二指腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量與對(duì)照組相比差異不顯著(P＞0.05)，抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組顯著高于抗菌肽Ⅱ組(P＜0.05)，與抗生素組之間不存在顯著性差異(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅴ組空腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，而與抗生素組差異不顯著(P＞0.05)，各抗菌肽組之間差異不顯著(P＞0.05)，但上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量有逐漸增多的趨勢(shì)。

回腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量各處理之間差異不顯著(P＞0.05)。

上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞以小型細(xì)胞為主，胞核大而圓，深染，胞漿少。腸段不同，上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量差異很大。

由表6可以看出，海蘭褐仔公雞十二指腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量最多，空腸次之，回腸則數(shù)量最少。

2.2.2 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞小腸杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響

抗菌肽Ⅴ組空腸杯狀細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)顯微照片見(jiàn)圖3。PAS染色呈桃紅色陽(yáng)性反應(yīng)，杯狀細(xì)胞分布于腸絨毛上皮細(xì)胞間，高腳杯狀，頂部胞質(zhì)為大量糖原顆粒擁塞而膨隆，底部纖細(xì)，有小而深染的不規(guī)則核與少量嗜堿性胞質(zhì)。不同的腸段杯狀細(xì)胞的數(shù)量也有所不同。杯狀細(xì)胞的數(shù)量從十二指腸到回腸呈逐漸增多趨勢(shì)。

由表7可以看出，抗菌肽Ⅴ組十二指腸杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組和抗菌肽Ⅰ、Ⅱ組(P＜0.05)，與抗生素組差異不顯著(P＞0.05)?？咕蘑蟆ⅱ?、Ⅴ組之間差異不顯著(P＞0.05)，但杯狀細(xì)胞數(shù)量有逐漸增多趨勢(shì)。

抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組空腸杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅴ組又顯著高于抗生素組和抗菌肽Ⅰ、Ⅱ組(P＜0.05)，抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組之間差異不顯著(P＞0.05)。

抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組回腸杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組和抗生素組(P＜0.05)，且抗菌肽Ⅳ、Ⅴ組顯著高于抗菌肽Ⅰ、Ⅱ組(P＜0.05)。

表6 抗菌肽對(duì)仔公雞小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響Table6 Effects of ABPs on the number of intraepithelial lymphocytes in small intestine of young roosters 個(gè)

圖3 抗菌肽Ⅴ組空腸杯狀細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)顯微照片F(xiàn)ig.3 Photomicrographs of morphology of goblet cells in jejunum in ABPs groupⅤ

3 討論

3.1 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞小腸黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

小腸是碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)等主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化吸收的重要場(chǎng)所，小腸內(nèi)黏膜結(jié)構(gòu)與功能的完整性是養(yǎng)分消化吸收、動(dòng)物正常生長(zhǎng)和生產(chǎn)的基本保證，若腸黏膜發(fā)育不良或受損將嚴(yán)重影響動(dòng)物的生長(zhǎng)、發(fā)育及免疫功能等，所以維持正常的小腸結(jié)構(gòu)與功能尤為重要。

絨毛形態(tài)的變化直接影響絨毛的表面積，進(jìn)而影響機(jī)體吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的能力。小腸絨毛變長(zhǎng)、變粗或排列緊密會(huì)使小腸接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的面積增大，有利于微生物的定植和對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的利用，從而促進(jìn)小腸消化和吸收。微生物及其代謝產(chǎn)物能夠引起腸壁厚度的增加，使更多的固有膜延伸到腸絨毛中央[1-2]。絨毛變短時(shí)，成熟的絨毛細(xì)胞減少，對(duì)養(yǎng)分的吸收能力低[3]，腸絨毛強(qiáng)勁有規(guī)律的擺動(dòng)也有助于排斥有害菌群的定植。隱窩，即腸腺，是由絨毛基部的上皮陷入固有層內(nèi)形成的管狀腺體，隱窩內(nèi)未分化細(xì)胞是絨毛細(xì)胞的再生來(lái)源，隱窩基部不斷有細(xì)胞向絨毛頂部遷移、分化，形成具有吸收功能的絨毛細(xì)胞，以補(bǔ)充絨毛上皮的正常脫落，而隱窩深度則反映了細(xì)胞生成率。如果此過(guò)程減慢，則基部的細(xì)胞生成率降低，隱窩變淺。因而隱窩的深淺對(duì)保持腸絨毛的完整形態(tài)和正常機(jī)能有重要作用[4]，而黏膜的厚薄與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程有關(guān)，由此影響小腸的吸收功能。Caspary[5]報(bào)道指出，絨毛高度增加后會(huì)使小腸接觸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的面積增大，從而增強(qiáng)小腸對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收?？奠o靜等[6]研究結(jié)果表明，非洲鴕鳥皮膚抗菌肽可增強(qiáng)雛雞的的消化吸收功能，從而促進(jìn)雛雞的生長(zhǎng)發(fā)育以及改善雛雞盲腸黏膜結(jié)構(gòu)。Bao等[7]研究了豬抗菌肽(PABP)對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能和腸道免疫的影響，結(jié)果表明，PABP處理的肉仔雞體重和日增重顯著增加，腸黏膜深度和厚度顯著增加，血清堿性磷酸酶活性顯著提高，血清分泌型免疫球蛋白A(SIgA)比例顯著增加。本試驗(yàn)結(jié)果表明，除十二指腸隱窩深度、空腸肌層厚度各處理之間無(wú)顯著性差異外，飼糧中添加不同水平天蠶素抗菌肽可不同程度地提高海蘭褐仔公雞小腸黏膜絨毛高度、黏膜厚度和肌層厚度以及降低隱窩深度，從而有效改善了其小腸黏膜結(jié)構(gòu)。

表7 抗菌肽對(duì)仔公雞小腸杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響Table7 Effects of ABPs on the number of goblet cells in small intestine of young roosters 個(gè)

3.2 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響

作為腸道屏障的重要組成部分，腸黏膜機(jī)械屏障包括黏膜上皮、上皮之間的連接結(jié)構(gòu)、上皮的基膜、細(xì)胞表面的細(xì)胞。上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞是腸黏膜免疫系統(tǒng)中最先接觸抗原的免疫活性細(xì)胞，位于腸絨毛上皮細(xì)胞之間，在上皮內(nèi)15%的細(xì)胞為淋巴細(xì)胞，上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞在腸道黏膜屏障中發(fā)揮重要的作用。馬衛(wèi)明[8]研究結(jié)果表明，豬小腸抗菌肽可以增加雛雞腸道內(nèi)上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞的數(shù)量，試驗(yàn)組雞十二指腸、空腸和回腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果表明，適量天蠶素抗菌肽可以增加蛋用仔公雞十二指腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量，抗菌肽Ⅴ組空腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著高于對(duì)照組，各處理之間回腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量差異不顯著，但隨著天蠶素抗菌肽添加量的增加，其數(shù)量亦有逐漸增加的趨勢(shì)，這與上述研究結(jié)果基本一致。另外本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)海蘭褐蛋用仔公雞十二指腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量最多，空腸次之，回腸則數(shù)量最少。

3.3 抗菌肽對(duì)海蘭褐仔公雞小腸杯狀細(xì)胞數(shù)量的影響

杯狀細(xì)胞能分泌黏液，對(duì)腸黏膜上皮可起到潤(rùn)滑保護(hù)和清除廢物的作用，杯狀細(xì)胞還可合成三葉狀蛋白，通過(guò)聚合黏性糖蛋白來(lái)保護(hù)上皮細(xì)胞免受外部損害，以此加強(qiáng)宿主的防御能力，是構(gòu)成腸道機(jī)械屏障的結(jié)構(gòu)之一。馬衛(wèi)明[8]試驗(yàn)結(jié)果表明豬小腸抗菌肽可以顯著提高雞腸道組織杯狀細(xì)胞的數(shù)量，增強(qiáng)雞腸道黏膜機(jī)械屏障功能，提高雞的腸道黏膜免疫能力。本試驗(yàn)結(jié)果表明，與對(duì)照組相比，抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組可顯著提高海蘭褐仔公雞十二指腸、空腸及回腸各腸段杯狀細(xì)胞數(shù)量，這與上述研究結(jié)果是一致的，表明天蠶素抗菌肽有效增強(qiáng)了宿主的防御能力。

4 結(jié)論

①除十二指腸隱窩深度、空腸肌層厚度各處理之間無(wú)顯著性差異外，各抗菌肽組各腸段(十二指腸、空腸、回腸)絨毛高度、黏膜厚度、肌層厚度均得到了不同程度的提高，隱窩深度得到了不同程度的降低。抗菌肽Ⅴ組空腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著升高。抗菌肽Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組十二指腸、空腸及回腸杯狀細(xì)胞數(shù)量顯著升高。

②綜合各指標(biāo)來(lái)看，以抗菌肽Ⅴ組添加效果最好，天蠶素抗菌肽添加量為350 mg/kg。

[1]羅克.家禽解剖學(xué)與組織學(xué)[M].福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社，1983:139-145.

[2]倪耀娣，李睿文，魯改如，等.微生態(tài)制劑對(duì)肉仔雞小腸結(jié)構(gòu)的影響[J].江西畜牧獸醫(yī)雜志，2004(4):7-8.

[3]劉惠.中草藥復(fù)合粗多糖對(duì)斷奶仔豬腸道消化生理影響的研究[D].碩士學(xué)位論文.長(zhǎng)沙:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007:44-46.

[4]韓正康.家畜生理學(xué)[M].北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1996.

[5]CASPARY W F.Physiology and pathophysiology of intestinal absorption[J].The American Journal of Clinical Nutrition，1992(55):299-308.

[6]康靜靜，楊玉榮，焦喜蘭，等.非洲鴕鳥皮膚抗菌肽對(duì)雛雞腸道黏膜結(jié)構(gòu)的影響[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，44(1):57-59.

[7]BAO H，SHE R，LIU T，et al.Effects of pig antibacterial peptides on growth performance and intestine mu-cosal immune of broiler chickens[J].Poultry Science，2009，88(2):291-297.

[8]馬衛(wèi)明.豬小腸抗菌肽分離鑒定及其生物活性研究[D].博士學(xué)位論文.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)，2004:92-94.