黃駱鐮 龔凌霄 劉 聰 吳曉琴 張 英

(浙江大學生物系統(tǒng)工程與食品科學學院，杭州 310058)

竹子是禾本科竹亞科多年生常綠植物，種植面積廣，是中國傳統(tǒng)的藥食同源的植物之一。竹青素(green bamboo extract，GBE)是由竹葉、竹茹、竹筍提取物復配而成的一種新型飼料添加劑，是一種卓越的生物抗氧化劑、脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)劑和免疫功能增強劑。GBE內(nèi)含豐富的竹子次生代謝產(chǎn)物，主要包括黃酮類化合物、酚酸類化合物、生物活性多糖、氨基酸肽類、萜類內(nèi)酯、蒽醌類以及礦物質(zhì)元素等，目前已在加州鱸魚、大黃魚的養(yǎng)殖上取得了良好的效果[1]。

雞肉是人們餐桌中受歡迎的菜肴之一，消費量巨大。體內(nèi)脂肪過多是肉雞養(yǎng)殖中普遍存在的問題。雞的腹脂和皮下脂肪沉積過多，影響了雞的胴體品質(zhì)，不受消費者歡迎;沉積單位脂肪比沉積單位瘦肉多消耗3倍的能量，體脂沉積過多會降低飼料利用率[2];體脂過多還嚴重影響雞肉的加工性能。目前，通過營養(yǎng)調(diào)控途徑減少家禽脂肪沉積、改善家禽胴體品質(zhì)已成為動物營養(yǎng)學研究的熱點。大量研究已證明，竹子提取物具有良好的調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的功能，Panee等[3]通過體外試驗研究證實竹子提取物具有抗脂毒功能;Sun等[4]研究表明竹葉中的黃酮類化合物可以阻礙脂肪的形成;Higa等[5]研究認為炎癥與肥胖密切相關，竹葉提取物可以通過降低單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的含量達到減少小鼠腹部脂肪的作用。結(jié)合竹子資源產(chǎn)量高、低成本等特點，GBE具有作為脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)劑應用于禽類生產(chǎn)的潛力。而目前，竹子提取物制品在禽類生產(chǎn)中的應用尚未見報道。石岐胡須雞(商品名:泰安雞)是優(yōu)質(zhì)肉雞品種，肉質(zhì)鮮嫩，深受消費者歡迎，而脂肪沉積嚴重成為影響其生產(chǎn)、加工的核心問題。本試驗通過在飼糧中添加一定比例的GBE飼喂石岐胡須雞，研究GBE對肉雞脂質(zhì)代謝的影響，旨在為竹子提取物在肉雞生產(chǎn)中的應用以及綠色無公害飼料添加劑的開發(fā)提供理論與實踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

GBE，由杭州尤美特科技有限公司提供，含總酚14.25%、多糖11.06%、總?cè)?.20%。

1.2 試驗設計

選取360只26日齡健康石岐胡須雞仔雞(由香港現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司提供)，初始體重為(375.12±8.30)g，隨機分成4組，每組3個重復，每個重復30只雞。對照組飼喂不添加GBE的基礎飼糧，基礎飼糧為粉狀配合飼料，參考美國NRC(1994)肉雞營養(yǎng)需要配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗組飼喂在基礎飼糧中分別添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE的試驗飼糧。試驗期49 d。

1.3 飼養(yǎng)管理

試驗在某養(yǎng)殖場進行，試驗前對雞舍、雞籠、料槽、喂水器等進行清洗消毒。實行籠養(yǎng)，每籠2只，籠大小為35 cm×35 cm ×35 cm。雞舍溫度為22～27℃，自然采光，保持雞舍通風、干燥、衛(wèi)生。肉仔雞自由采食，充足飲水，按正常免疫程序進行免疫接種。

1.4 樣品采集

試驗結(jié)束后禁食12 h(自由飲水)，每個重復隨機選取3只雞稱重，活體翅靜脈采血，離心收集血清，分裝至-20℃冰箱備用;宰殺后分離腹脂、肝臟，分別稱重，存于-20℃冰箱備用。

1.5 測定指標及方法

1.5.1 脂肪沉積指標測定

腹脂率:剝離腹部脂肪和肌胃周圍脂肪，稱重，計算公式如下:

腹脂率(%)=(腹脂重/體重)×100。

皮下脂肪厚度:測定部位在尾椎前端、背正中線切開的皮膚轉(zhuǎn)角處，用游標卡尺測量。

肝臟脂肪含量:按 GB/T 9695.7—2008[6]測定。

肝臟冷凍切片結(jié)合油紅“O”染色觀察:取肝臟冰凍切片(厚度8 μm)固定后水化，置60%異丙醇中漂洗30 s，油紅“O”儲備液與蒸餾水按6∶4比例混合，靜止10 min，切片染色10 min，用60%異丙醇稍微洗去多余染液，再用蒸餾水漂洗，Mayer蘇木素復染1 min，0.5%鹽酸酒精分化5 s，流水沖洗1 min，0.5%稀氨水藍化20 s，流水沖洗1 min，甘油明膠封固。每個肝臟樣本切2套冰凍切片，以減少病理染色因素對試驗的影響。顯微鏡400倍下觀察、拍照。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

1.5.2 血清生化指標測定

測定時取血清，流水解凍?？偰懝檀?TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、瘦素、脂聯(lián)素、丙二醛(MDA)含量，超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、過氧化氫酶(CAT)活性均由南京建成生物工程研究所提供的試劑盒測定。

1.6 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果用平均值±標準差表示，顯著性檢驗采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，采用LSD方法進行多重比較，以P＜0.05時為差異顯著，以P＜0.01時為差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 飼糧中添加GBE對肉雞脂肪沉積的影響

由表2可知，與對照組相比，飼糧中添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE肉雞體重均略有下降，但影響不顯著(P＞0.05);飼糧中添加1.5和3.0 g/kg GBE顯著降低了肉雞腹脂率(P＜0.05)，而添加6.0 g/kg GBE則對腹脂率無顯著影響(P＞0.05);飼糧中添加GBE可降低肉雞皮下脂肪厚度，其中1.5和6.0 g/kg組達極顯著水平(P＜0.01)，3.0 g/kg組達顯著水平(P＜0.05);飼糧中添加1.5 g/kg GBE對肉雞肝臟脂肪含量無顯著影響(P＞0.05)，添加3.0和6.0 g/kg GBE顯著降低了肝臟脂肪含量(P＜0.05)。

表2 飼糧中添加GBE對肉雞脂肪沉積的影響Table2 Effects of dietary GBE on fat deposition of broilers

由圖1可知，飼糧中添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE，肉雞肝臟脂肪滴(紅色部分)的分布面積隨著GBE添加水平的增加而逐漸降低。

圖1 肉雞肝臟冷凍切片結(jié)合油紅“O”染色Fig.1 Frozen sections of liver in broilers by oil red-O staining(400×)

2.2 飼糧中添加GBE對肉雞血脂的影響

由表3可知，與對照組相比，飼糧中添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE對肉雞血清TC含量均無顯著影響(P＞0.05);飼糧中添加GBE可降低肉雞血清TG含量，其中1.5和6.0 g/kg組達顯著水平(P＜0.05)，3.0 g/kg組達極顯著水平(P＜0.01);飼糧中添加1.5和6.0 g/kg GBE對肉雞血清HDL-C含量無顯著影響(P＞0.05)，添加3.0 g/kg GBE顯著提高了血清HDL-C含量(P＜0.05);飼糧中添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE對肉雞血清LDL-C含量均無顯著影響(P＞0.05)。

表3 飼糧中添加GBE對肉雞血脂的影響Table3 Effects of dietary GBE on blood lipids of broilers mg/dL

2.3 飼糧中添加GBE對肉雞血清瘦素和脂聯(lián)素含量的影響及其與脂肪沉積指標之間的皮爾遜相關系數(shù)

由表4可知，與對照組相比，飼糧中添加1.5和3.0 g/kg GBE均顯著提高了肉雞血清中瘦素含量(P＜0.05)，添加6.0 g/kg GBE肉雞血清中瘦素含量也有所提高，但差異不顯著(P＞0.05);飼糧中添加1.5和6.0 g/kg GBE對肉雞血清中脂聯(lián)素含量無顯著影響(P＞0.05)，添加3.0 g/kg GBE顯著提高了血清中脂聯(lián)素含量(P＜0.05)。

表4 飼糧中添加GBE對肉雞血清瘦素和脂聯(lián)素含量的影響Table4 Effects of dietary GBE on leptin and adiponectin contents in serum of broilers

由表5可知，肉雞血清中瘦素含量與腹脂率、皮下脂肪厚度呈極強負相關;脂聯(lián)素與肝臟脂肪含量呈極強負相關;血清瘦素含量與脂聯(lián)素含量兩者呈強正相關。

表5 瘦素和脂聯(lián)素含量與脂肪沉積指標之間的皮爾遜相關系數(shù)Table5 Pearson correlation coefficients between leptin or adiponectin contents and fat deposition indices

2.4 飼糧中添加GBE對肉雞內(nèi)源性抗氧化酶系的促進及其對脂質(zhì)過氧化的抑制作用

由表6可知，與對照組相比，飼糧中添加1.5和3.0 g/kg GBE極顯著提高了肉雞血清SOD活性(P＜0.01)，添加6.0 g/kg GBE顯著降低了肉雞血清SOD活性(P＜0.05);飼糧中添加1.5和6.0 g/kg GBE對肉雞血清中GSH-Px活性無顯著影響(P＞0.05)，添加3.0 g/kg GBE極顯著提高了肉雞血清中GSH-Px活性(P＜0.01);飼糧中添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE對肉雞血清CAT活性均無顯著影響(P＞0.05);飼糧中添加1.5和3.0 g/kg GBE極顯著降低了肉雞血清MDA含量(P＜0.01)，添加6.0 g/kg GBE對血清MDA含量無顯著影響(P＞0.05)。

表6 飼糧中添加GBE對肉雞內(nèi)源性抗氧化酶系及脂質(zhì)過氧化的影響Table6 Effects of dietary GBE on endogenous antioxidant enzyme system and lipid peroxidation of broilers

3 討論

3.1 飼糧中添加GBE對肉雞脂肪沉積的影響

腹部是雞體內(nèi)蓄積脂肪的主要部位，腹脂和胴體脂肪呈中等程度以上的表型相關和遺傳相關，因此，腹脂率和皮下脂肪厚度在一定程度上反映了動物體內(nèi)脂肪代謝狀況[7]。在本試驗中，隨著飼糧中GBE添加水平的提高，肉雞的腹脂率呈現(xiàn)先降低后提高的趨勢，其中以3.0 g/kg組的腹脂率最低，達顯著水平，說明GBE對肉雞腹脂率的影響存在雙向調(diào)節(jié)的作用。飼糧中添加GBE均能顯著降低肉雞的皮下脂肪厚度，其中1.5和6.0 g/kg組達極顯著水平，該結(jié)果與GBE對腹脂率的影響趨勢不完全一致，可能是肉雞的腹腔脂肪沉積與皮下脂肪沉積過程是相對獨立的過程。GBE 3個添加水平對肉雞的體重均無顯著影響。由此可見，飼糧中添加一定比例的GBE，可降低石岐胡須雞的體脂沉積，但并不影響雞的生長性能，本試驗很好地解決了石岐胡須雞脂肪沉積嚴重的問題。GBE降低肉雞脂肪含量的作用可能與其含豐富的黃酮類化合物有關，李莉等[8]在飼糧中添加山楂葉總黃酮喂養(yǎng)黃羽肉雞，發(fā)現(xiàn)腹脂率和皮下脂肪率均顯著降低，與本試驗結(jié)果一致。

雞的脂肪代謝及其調(diào)控特點與哺乳類動物不同，雞脂肪酸合成的主要場所是肝臟[9]，雞體脂沉積所需的脂肪酸大多來自于肝臟合成的脂肪酸[10]，因此，雞肝臟脂肪含量也是反映雞脂肪代謝狀況的重要指標。飼糧中添加1.5 g/kg GBE對肉雞肝臟脂肪含量無顯著影響，而添加水平達3.0和6.0 g/kg時肝臟脂肪含量顯著降低。通過雞肝臟冷凍切片結(jié)合油紅“O”染色400倍拍攝圖片可知，肝臟脂肪滴(紅色部分)的分布面積隨著GBE添加水平的增加而逐漸降低，與其肝臟脂肪含量檢測結(jié)果相對應。由此可見，飼糧中添加GBE可以明顯降低石岐胡須雞的肝臟脂肪含量，并呈一定的劑量效應，說明竹青素要起到降低肝臟脂肪沉積的作用必須達到一定的水平。

3.2 飼糧中添加GBE對肉雞血脂的影響

脂肪沉積及代謝是一個復雜的生理生化過程，受飲食、內(nèi)分泌、神經(jīng)及脂肪組織自身等多因素的調(diào)控。動物體內(nèi)脂肪代謝始終處于動態(tài)平衡之中，在動物體內(nèi)脂類代謝中，肝臟、脂肪組織和血漿中的脂質(zhì)水平是相互聯(lián)系、相互影響的[8]。研究表明，植物提取物對動物的血脂具有調(diào)節(jié)作用，謝棒祥等[11]研究發(fā)現(xiàn)山楂葉總黃酮和大豆黃酮可顯著降低愛拔益加(AA)肉雞血清中TC、TG含量;Kirk等[12]報道，大豆黃酮可能通過增加低密度脂蛋白受體活性來降低血漿中的TC含量。在本試驗中，飼糧中添加1.5、3.0和6.0 g/kg GBE能顯著降低肉雞血清中TG含量，其中3.0g/kg組達極顯著水平。家禽脂肪組織發(fā)育、脂肪沉積取決于血漿中TG的含量[13]，因此，TG含量降低可一定程度上減少肉雞的體脂沉積。HDL-C主要功能是轉(zhuǎn)移細胞膜中的膽固醇，有利于保護心腦血管，添加3.0 g/kg GBE可顯著提高血清HDL-C含量。

3.3 瘦素和脂聯(lián)素對肉雞脂質(zhì)代謝的調(diào)控

瘦素是由脂肪細胞合成并分泌的具有多種功能的肽類激素，可通過特異性受體及多重神經(jīng)肽通路作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，抑制食欲，增加能量消耗，降低脂肪沉積，對肥胖過程起拮抗和抑制的作用。瘦素作為負反饋調(diào)節(jié)信號，參與體脂的負調(diào)節(jié)，它在穩(wěn)定能量平衡方面發(fā)揮基礎性作用[14]。天然植物提取物可通過提高禽類動物的瘦素含量來參與脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)，李莉等[8]研究認為，山楂葉總黃酮可顯著提高黃羽肉雞血清中的瘦素含量，從而降低皮下脂肪率和腹脂率。脂聯(lián)素是一種由脂肪細胞特異性分泌的蛋白質(zhì)，在血漿中表達濃度相對較高。脂聯(lián)素在脂肪細胞分化過程中形成，并經(jīng)胰島素刺激而分泌，與特定受體中的類膠原功能區(qū)結(jié)合而影響脂質(zhì)合成、儲運及機體代謝[15]。研究表明，脂聯(lián)素在調(diào)節(jié)糖代謝、脂代謝、抗炎等方面起著重要的生理作用[16]。本試驗中，飼糧中添加GBE可提高肉雞血清中的瘦素含量，并且隨著添加水平的提高，瘦素含量先提高后降低，其中以3.0 g/kg組的瘦素含量最高，達顯著水平，說明GBE對肉雞血清中瘦素含量的影響存在雙向調(diào)節(jié)的作用。飼糧中添加GBE對肉雞血清中脂聯(lián)素的影響趨勢與瘦素一致，添加水平為3.0 g/kg時達顯著水平。

由瘦素、脂聯(lián)素含量與脂肪沉積指標的相關性分析可知，血清中瘦素含量與腹脂率、皮下脂肪厚度呈極強負相關;血清脂聯(lián)素含量與肝臟脂肪含量呈極強負相關;血清瘦素含量與脂聯(lián)素含量兩者呈強正相關。由此可見，瘦素、脂聯(lián)素含量與脂肪沉積指標呈較高的相關度。

3.4 飼糧中添加GBE對肉雞內(nèi)源性抗氧化酶系的促進及其對脂質(zhì)過氧化的抑制作用

在生物體中自由基為細胞代謝過程中連續(xù)不斷產(chǎn)生的具有高度活性的物質(zhì)，一旦機體內(nèi)清除氧自由基的能力下降，氧自由基濃度升高，便可以對生物膜的不飽和脂質(zhì)酸誘發(fā)產(chǎn)生氧化反應，導致細胞膜、核酸、蛋白質(zhì)和酶類等發(fā)生不可逆的損傷[17]。氧自由基攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應，形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA，因此，MDA的含量常?？煞从硻C體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的程度，間接地反映出細胞損傷的程度。研究表明，脂質(zhì)代謝紊亂與抗氧化應激存在密切的關系[18]。在肥胖動物模型中，已發(fā)現(xiàn)抗氧化物質(zhì)防御機制的改變，Beltowski等[19]證實肥胖大鼠伴隨著SOD活性的降低;Capel等[20]在肥胖小鼠中發(fā)現(xiàn)GSH-Px活性下降。臨床觀察中也有類似的發(fā)現(xiàn)，Ozata等[21]研究表明，肥胖者的銅鋅超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和GSH-Px活性極顯著低于正常者。目前認為SOD與GSH-Px共同組成消除自由基的酶系防御體系。本試驗中，飼糧中添加1.5和3.0 g/kg GBE極顯著提高了肉雞血清SOD活性，而添加水平達6.0 g/kg時，SOD活性反而顯著降低，說明GBE對SOD活性影響是雙向調(diào)節(jié)的過程，當添加水平較高時，反而對SOD活性產(chǎn)生抑制作用。3個添加水平均能不同程度地提高血清GSH-Px活性并降低MDA的含量。由此可見，GBE可顯著提高肉雞血清中主要抗氧化酶的活性，減輕體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應，從而改善脂質(zhì)代謝紊亂。

4 結(jié)論

①飼糧中添加不同水平的GBE，可顯著降低肉雞的體脂沉積，但不影響雞的體重，其中以3.0 g/kg添加水平效果最佳。

②飼糧中添加GBE，肉雞血清中瘦素、脂聯(lián)素含量和抗氧化酶活性均顯著提高，并與脂肪沉積指標呈較高相關度，結(jié)合其生物學作用提示瘦素、脂聯(lián)素和抗氧化酶可能參與肉雞脂質(zhì)代謝的調(diào)控。

致謝:

感謝香港現(xiàn)代農(nóng)業(yè)有限公司對本研究提供條件支持以及技術(shù)指導。

[1]干鋼，金成，張高立，等.強化尤美肝泰的人工配合飼料對加州鱸生長及品質(zhì)的影響[C]//中國環(huán)境科學學會2010年學術(shù)年會論文集.上海:中國環(huán)境科學學會，2010:4312-4317.

[2]CHAMBERS J R，GAVORA J S，F(xiàn)ORTIN A.Genetic changes in meat-type chickens in the last twenty years[J].Canadian Journal of Animal Science，1981，61(3):555-563.

[3]PANEE J，LIU W Y，LIN Y L，et al.A novel function of bamboo extract in relieving lipotoxicity[J].Phytotherapy Research，2008，22(5):675-680.

[4]SUN J，YUE Y，TANG F，et al.Simultaneous HPTLC analysis of flavonoids in the leaves of three different species of bamboo[J].Journal of Planar Chromatography，2010，23(1):40-45.

[5]HIGA J K，LIU W Y，BERRY M J，et al.Supplement of bamboo extract lowers serum monocyte chemoattractant protein-1 concentration in mice fed a diet containing a high level of saturated fat[J].British Journal of Nutrition，2011，106(12):1810-1813.

[6]中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局.GB/T 9695.7—2008肉與肉制品總脂肪含量測定[S].北京:中國標準出版社，2008.

[7]CAHANER A，NITSAN Z，NIR I.Weight and fat content of adipose and nonadipose tissues in broilers selected for or against abdominal adipose tissue[J].Poultry Science，1986，65(2):215-222.

[8]李莉，朱曉彤，束剛，等.日糧中添加山楂葉總黃酮對黃羽肉雞脂肪代謝的影響[J].江西農(nóng)業(yè)大學學報，2009，31(4):610-615.

[9]GOODRIDGE A G.Citrate-cleavage enzyme，malic enzyme and certain dehydrogenases in embryonic and growing chicks[J].Biochemical Journal，1968，108(4):663-666.

[10]SMITH S，WITKOWSKI A，JOSHI A K.Structural and functional organization of the animal fatty acid synthase[J].Progress in Lipid Research，2003，42(4):289-317.

[11]謝棒祥，張敏紅，杜榮，等.類黃酮對肉仔雞生產(chǎn)性能及脂質(zhì)代謝的影響[J].動物營養(yǎng)學報，2002，14(4):49-53.

[12]KIRK E A，SUTHERLAND P，WANG S A，et al.Dietary isoflavones reduce plasma cholesterol and atheroclerosis in C57BL/6 mice but not LDL receptor-deficient mice[J].The Journal of Nutrition，1998，128(6):954-959.

[13]尹靖東，齊廣海，霍啟光.家禽脂類代謝調(diào)控機理的研究進展[J].動物營養(yǎng)學報，2000，12(2):1-7.

[14]BI S，LADENHEIM E E，SCHWARTZ G J，et al.A role for NPY overexpression in the dorsomedial hypothalamus in hyperphagia and obesity of OLETF rats[J].American Journal of Physiology:Regulatory，Integrative and Comparative Physiology，2001，281(1):254-260.

[15]HUG C，WANG J，AHMAD N S，et al.T-cadherin is a receptor for hexameric and high-molecular-weight forms of Acrp30/adiponectin[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America，2004，101(28):10308-10313.

[16]KHARROUBI I，RASSCHAERT J，EIZIRIK D L，et al.Expression of adiponectin receptors in pancreatic β cells[J].Biochemical and Biophysical Research Communications，2003，312(4):1118-1122.

[17]劉耕陶.氧自由基損傷與抗氧化劑[J].生理科學，1988(2):83-84.

[18]OHARA Y，PETERSON T E，HARRISON D G.Hypercholesterolemia increasesendothelialsuperoxide anion production[J].The Journal of Clinical Investigation，1993，96(6):2546-2551.

[19]BELTOWSKI J，WOJCICKA G，GORNY D，et al.The effect of dietary-induced obesity on lipid peroxidation，antioxidant enzymes and total plasma antioxidant capacity[J].Journal of Physiology and Pharmacology，2000，51:883-896.

[20]CAPEL I D，DORRELL H M.Abnormal antioxidant defence in some tissues of congenitally obese mice[J].Biochemical Journal，1984，219(1):41-49.

[21]OZATA M，MERGEN M，OKTENLI C，et al.Increased oxidative stress and hypozincemia in male obesity[J].Clinical Biochemistry，2002，35(8):627-631.