王 晶 張海軍 武書庚 岳洪源 齊廣海* 魏傳玉 于長青 仝寶生

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開放試驗(yàn)室，北京 100081;2.內(nèi)蒙古永業(yè)農(nóng)豐生物科技有限責(zé)任公司北京分公司，北京 100083)

黃腐酸(fulvic acid，F(xiàn)A)為腐殖酸組分之一，系植物遺骸經(jīng)微生物分解和轉(zhuǎn)化而來[1]，主要存在于低熱值的煤炭，如泥炭、褐煤中。在腐殖酸的各組分中，F(xiàn)A分子質(zhì)量較小，可溶于水，生物活性較高，不含重金屬及其他有害金屬離子。FA無完整結(jié)構(gòu)和固定化學(xué)構(gòu)型，被認(rèn)為是土壤特殊微區(qū)系里瞬時(shí)可得到的酚類單元隨即聚集的多縮物質(zhì)，帶有羧基、醌基等多個(gè)活性基團(tuán)[2]，可參與氧化還原反應(yīng)，保持機(jī)體旺盛的新陳代謝[3]。FA可促進(jìn)植物種子萌發(fā)和幼苗生長，提高植物的免疫和抗逆性能，改善土地鹽堿化程度等[4-6]。因其綠色、安全、有效等特點(diǎn)，F(xiàn)A被認(rèn)為是可開發(fā)的抗生素替代品[7]，目前逐漸被開發(fā)用于畜牧生產(chǎn)。FA等能維持腸道菌群穩(wěn)定，促進(jìn)營養(yǎng)物質(zhì)的分解、吸收和轉(zhuǎn)化，改善飼料效率和日增重[8];作為一種含芳香結(jié)構(gòu)的有機(jī)弱酸，F(xiàn)A可維持腸道適宜pH，有利于營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用[8];從風(fēng)化煤中提取的FA，還具有抗炎、止痛、脫敏、去腐生肌和調(diào)節(jié)免疫功能等醫(yī)學(xué)作用[9];生物發(fā)酵 FA能改善蛋雞[10]、肉雞[11]的生產(chǎn)性能，提高奶牛免疫力、防治急性乳房炎[12]，提高對(duì)蝦成活率[13]等。近年來，由風(fēng)化煤和褐煤中提取的天然FA，具有調(diào)節(jié)畜禽免疫機(jī)能、促進(jìn)生長的作用，逐漸引起了畜牧工作者的興趣。但是作為新型添加劑產(chǎn)品，關(guān)于天然FA對(duì)靶動(dòng)物有效劑量的研究較少。本試驗(yàn)以快速生長的肉仔雞為對(duì)象，旨在研究實(shí)際生產(chǎn)條件下，不同劑量FA和金霉素對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)和抗氧化指標(biāo)的影響，以期為FA在肉仔雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

天然FA由內(nèi)蒙古永業(yè)農(nóng)豐生物科技有限責(zé)任公司提供，提取自風(fēng)化煤和褐煤，含量12.05%。金霉素(chlortetracyclin，CTC)購自金河生物科技股份有限公司，有效含量15%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與試驗(yàn)飼糧

試驗(yàn)選用840只1日齡健康愛拔益加(AA)雛雞(公母各占1/2)，隨機(jī)分為7組，每組設(shè)6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，各組間試雞體重?zé)o顯著差異(P＞0.05)。試驗(yàn)期42 d，分為前期(1～21日齡)和后期(22～42日齡)2個(gè)階段。

在參照 NRC(1994)和 NY/T 33—2004的基礎(chǔ)上，結(jié)合AA肉仔雞飼養(yǎng)手冊(cè)配制玉米-豆粕型基礎(chǔ)飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。設(shè)計(jì)添加0、0.012%、0.024%、0.048%、0.120%、0.240%FA及50 mg/kg CTC的7種飼糧。

1.3 飼養(yǎng)管理

4層籠養(yǎng)，自然光照加人工補(bǔ)光，光照強(qiáng)度為30 lx，1～7日齡每天光照24 h，8日齡后光照制度為23 h∶1 h(L∶D)。雞舍溫度第1周33～35℃，之后每周下降2℃。飼養(yǎng)管理按《AA肉雞飼養(yǎng)管理手冊(cè)》進(jìn)行，自由采食和飲水，常規(guī)免疫。

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

生產(chǎn)性能:每天觀察雞的生長發(fā)育、發(fā)病及死亡情況，記錄死淘數(shù)。分別于20日齡和41日齡的22:00禁食，次日08:00稱重，期間自由飲水，準(zhǔn)確記錄各重復(fù)采食量，計(jì)算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和飼料/增重。

血液生化指標(biāo):分別于21日齡和42日齡，以重復(fù)為單位隨機(jī)選擇公母各1只肉仔雞，翅靜脈采血3 mL，抗凝管存放，3 000 r/min離心10 min，取上清液分裝，置-20℃冰箱保存待用。血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)活性和總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)含量采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定，試劑盒購自上海科華生物工程股份有限公司。

抗氧化指標(biāo):血漿超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物活性(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測(cè)定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0軟件的one-way ANOVA程序進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，Duncan氏法進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。測(cè)定結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

2 結(jié)果

2.1 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

由表2可知，1～21日齡，0.240%FA組較對(duì)照組和0.012%FA組顯著增加了肉仔雞ADG(P＜0.05);22～42日齡，各組間ADG無顯著差異(P＞0.05);從全期(1～42日齡)看，0.024%和0.240%FA組ADG顯著高于0.012%FA組(P＜0.05)，CTC組與 FA各組無顯著性差別(P＞0.05)。1～21日齡，0.048%FA組ADFI最低，顯著低于其他各組(P＜0.05)，CTC組ADFI最高，顯著高于0.012% ～0.120%FA組(P＜0.05);22～42日齡和1～42日齡，各組間ADFI無顯著差異(P＞0.05)。關(guān)于飼料/增重，1～21日齡，對(duì)照組最高，顯著高于0.048%和0.240%FA組(P＜0.05)，0.048%FA組最低，顯著低于對(duì)照組、CTC組和0.012%FA組(P＜0.05);22～42日齡，各組間無顯著差異(P＞0.05);從全期看，對(duì)照組和0.012%組最高，顯著高于0.024%和0.240%FA組(P＜0.05)。可知，F(xiàn)A對(duì)1～21日齡肉仔雞作用更加明顯，0.024% ～0.240%FA可在一定程度上增加1～21日齡肉仔雞ADG、降低ADFI和飼料/增重。

表2 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響Table2 Effects of dietary fulvic acid on performance of broilers

2.2 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血液抗氧化指標(biāo)的影響

由表3可知，21日齡，各組血漿SOD活性差異不顯著(P＞0.05);42日齡，0.048%FA組血漿SOD活性最高，顯著高于對(duì)照組和CTC組(P＜0.05)。關(guān)于血漿MDA含量，42日齡，0.048%和0.120%FA組較對(duì)照組顯著降低(P＜0.05)。關(guān)于血漿GSH-Px活性，21日齡和42日齡，各FA組有增加的趨勢(shì)，但各組之間無顯著差異(P＞0.05)?？芍?.048%FA組的血液抗氧化指標(biāo)較好。

表3 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿抗氧化酶活性和丙二醛含量的影響Table3 Effects of dietary fulvic acid on plasma antioxidant enzyme activities and MDA content in broilers

2.3 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血液生化指標(biāo)的影響

飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿肝臟功能指標(biāo)的影響見表4。各組21日齡和42日齡肉仔雞血漿AST活性差異均不顯著(P＞0.05)。21日齡，所有FA組肉仔雞血漿ALT活性均低于對(duì)照組和金霉素組(P＜0.05)，0.240%FA組ALP活性顯著低于0.048%FA組(P＜0.05);42日齡，各組血漿ALT和ALP活性差異不顯著(P＞0.05)。42日齡，0.240%FA組血漿LDH活性顯著高于其他各組(P＜0.05);0.120%FA組顯著高于0.012%、0.024%、0.048%FA組和CTC組(P＜0.05)。21日齡，與對(duì)照組和0.120%FA組相比，0.240%FA升高了肉仔雞血漿ALB含量(P＜0.05);42日齡，0.120%FA組顯著高于0.012%FA組(P＜0.05)。21日齡，0.240%FA組血漿TBIL含量最高，顯著高于對(duì)照組和CTC組(P＜0.05);42日齡，各組無顯著差異(P＞0.05)。可知，飼糧添加0.240%FA對(duì)21日齡和42日齡肉仔雞肝臟功能指標(biāo)均有不良影響。

飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿腎臟功能指標(biāo)的影響見表5。21日齡，各組肉仔雞血漿CRE含量差異不顯著(P＞0.05);42日齡，0.240%FA組血漿CRE含量顯著高于CTC組(P＜0.05)。FA對(duì)血漿UA含量無顯著性影響(P＞0.05)。

3 討論

3.1 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞生產(chǎn)性能的影響

研究表明，腐殖酸可促進(jìn)肉雞[11，14]和肉鴨[15]增重、提高肉仔雞弱雛成活率[11]、減少產(chǎn)蛋雞死亡率[10，16]，改善肉雞[17]和蛋雞[10]的飼料效率。本試驗(yàn)中，F(xiàn)A的促生長作用主要體現(xiàn)在肉仔雞生長前期，0.024% ～0.240%FA可在一定程度上增加ADG、降低ADFI和飼料/增重。飼料/增重隨FA添加量增加而降低，與Yoruk等[16]在蛋雞上的試驗(yàn)結(jié)果相類似。有研究報(bào)道認(rèn)為，產(chǎn)蛋雞飼糧中FA最佳添加劑量為2‰[18]，從本試驗(yàn)生產(chǎn)性能結(jié)果看，肉仔雞飼糧中FA的適宜劑量在0.024%～0.240%。

3.2 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血液抗氧化指標(biāo)的影響

正常機(jī)體的氧化損傷和抗氧化體系處于動(dòng)態(tài)平衡，機(jī)體代謝產(chǎn)生的活性氧能不斷地被抗氧化體系清除，以維持細(xì)胞氧化和還原穩(wěn)態(tài)。研究表明，在低溫脅迫或干旱條件下，F(xiàn)A能提高油菜或冬小麥SOD等抗氧化酶活性，促進(jìn)植物生長，提高植物抗逆能力[19-20]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧添加0.012%～0.048%FA在一定程度上提高了肉仔雞血漿SOD和GSH-Px活性，其中0.048%FA組顯著增加了42日齡肉仔雞血漿SOD活性，顯著降低了MDA含量。因FA結(jié)構(gòu)復(fù)雜，其提高抗氧 化作用的分子機(jī)理尚待進(jìn)一步研究。

表4 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿肝臟功能指標(biāo)的影響Table4 Effects of dietary fulvic acid on plasma hepatic function parameters in broilers

3.3 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血液生化指標(biāo)的影響

3.3.1 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿肝臟功能指標(biāo)的影響

肝臟和腎臟分別是異源物質(zhì)在機(jī)體進(jìn)行轉(zhuǎn)化和代謝的主要場(chǎng)所。血漿AST、ALT、ALP和LDH等酶類活性能反映肝臟細(xì)胞受損情況及嚴(yán)重程度。ALT和AST主要位于肝細(xì)胞胞漿水溶性部分或線粒體中，活性增高常提示肝細(xì)胞破壞、細(xì)胞膜通透性增強(qiáng)或線粒體損傷。本試驗(yàn)中，21日齡所有FA組肉仔雞血漿ALT活性均顯著降低，但AST活性無相同變化趨勢(shì)，說明FA并非通過降低肝細(xì)胞膜的通透性減少ALT的漏出，而可能是通過加速血漿ALT的清除或抑制肝臟ALT活性和合成，降低血漿ALT活性，具體原因還有待進(jìn)一步研究。LDH是一種糖酵解酶，廣泛分布于機(jī)體各組織，肝臟中活性最大。本試驗(yàn)表明，0.240%FA顯著升高了42日齡肉仔雞血漿LDH活性，說明該劑量對(duì)42日齡肉仔雞肝臟功能產(chǎn)生了不良影響。血漿ALB和TBIL含量分別是反映肝臟合成及排泄功能的指標(biāo)，本試驗(yàn)中，0.240%FA組，21日齡肉仔雞血漿ALB和TBIL含量顯著升高，提示肝臟蛋白質(zhì)合成能力及排泄功能受到影響。

表5 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿腎臟功能指標(biāo)的影響Table5 Effects of dietary fulvic acid on plasma kidney function parameters in broilers

3.3.2 飼糧中添加FA對(duì)肉仔雞血漿腎臟功能指標(biāo)的影響

CRE是肌肉中磷酸肌酸的終末代謝產(chǎn)物，不能被重吸收，經(jīng)腎小球過濾后排出體外。血漿CRE的濃度變化反映了腎小球的濾過能力。尿酸是嘌呤代謝的終產(chǎn)物，主要通過腎臟排出。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，F(xiàn)A對(duì)肉仔雞血漿CRE和UA含量無顯著影響，說明飼糧添加0.012%～0.240%的FA對(duì)肉仔雞腎臟功能無顯著影響。與CTC組相比，0.240%FA顯著升高了42日齡肉仔雞血漿CRE含量，但UA含量無顯著差異，說明二者可能對(duì)內(nèi)源CRE生成的影響不同，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

① FA對(duì)1～21日齡肉仔雞作用較明顯;0.024%～0.240%FA可在一定程度上增加ADG、降低ADFI和飼料/增重。

②0.048%FA能顯著增強(qiáng)42日齡肉仔雞血漿SOD活性，降低MDA含量;0.240%FA添加劑量會(huì)對(duì)肝臟功能有不良影響，但生產(chǎn)性能和抗氧化指標(biāo)無顯著變化。

③綜上，建議FA在肉仔雞飼糧中添加量低于0.240%。

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