王 晶 張海軍 武書庚 岳洪源 齊廣海* 魏傳玉 于長青 仝寶生

(1.中國農業(yè)科學院飼料研究所，農業(yè)部飼料生物技術重點開放試驗室，北京 100081;2.內蒙古永業(yè)農豐生物科技有限責任公司北京分公司，北京 100083)

黃腐酸(fulvic acid，F(xiàn)A)為腐殖酸組分之一，系植物遺骸經微生物分解和轉化而來[1]，主要存在于低熱值的煤炭，如泥炭、褐煤中。在腐殖酸的各組分中，F(xiàn)A分子質量較小，可溶于水，生物活性較高，不含重金屬及其他有害金屬離子。FA無完整結構和固定化學構型，被認為是土壤特殊微區(qū)系里瞬時可得到的酚類單元隨即聚集的多縮物質，帶有羧基、醌基等多個活性基團[2]，可參與氧化還原反應，保持機體旺盛的新陳代謝[3]。FA可促進植物種子萌發(fā)和幼苗生長，提高植物的免疫和抗逆性能，改善土地鹽堿化程度等[4-6]。因其綠色、安全、有效等特點，F(xiàn)A被認為是可開發(fā)的抗生素替代品[7]，目前逐漸被開發(fā)用于畜牧生產。FA等能維持腸道菌群穩(wěn)定，促進營養(yǎng)物質的分解、吸收和轉化，改善飼料效率和日增重[8];作為一種含芳香結構的有機弱酸，F(xiàn)A可維持腸道適宜pH，有利于營養(yǎng)物質的吸收利用[8];從風化煤中提取的FA，還具有抗炎、止痛、脫敏、去腐生肌和調節(jié)免疫功能等醫(yī)學作用[9];生物發(fā)酵 FA能改善蛋雞[10]、肉雞[11]的生產性能，提高奶牛免疫力、防治急性乳房炎[12]，提高對蝦成活率[13]等。近年來，由風化煤和褐煤中提取的天然FA，具有調節(jié)畜禽免疫機能、促進生長的作用，逐漸引起了畜牧工作者的興趣。但是作為新型添加劑產品，關于天然FA對靶動物有效劑量的研究較少。本試驗以快速生長的肉仔雞為對象，旨在研究實際生產條件下，不同劑量FA和金霉素對肉仔雞生產性能、血液生化指標和抗氧化指標的影響，以期為FA在肉仔雞生產中的應用提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

天然FA由內蒙古永業(yè)農豐生物科技有限責任公司提供，提取自風化煤和褐煤，含量12.05%。金霉素(chlortetracyclin，CTC)購自金河生物科技股份有限公司，有效含量15%。

1.2 試驗設計與試驗飼糧

試驗選用840只1日齡健康愛拔益加(AA)雛雞(公母各占1/2)，隨機分為7組，每組設6個重復，每個重復20只。經統(tǒng)計，各組間試雞體重無顯著差異(P＞0.05)。試驗期42 d，分為前期(1～21日齡)和后期(22～42日齡)2個階段。

在參照 NRC(1994)和 NY/T 33—2004的基礎上，結合AA肉仔雞飼養(yǎng)手冊配制玉米-豆粕型基礎飼糧，其組成及營養(yǎng)水平見表1。設計添加0、0.012%、0.024%、0.048%、0.120%、0.240%FA及50 mg/kg CTC的7種飼糧。

1.3 飼養(yǎng)管理

4層籠養(yǎng)，自然光照加人工補光，光照強度為30 lx，1～7日齡每天光照24 h，8日齡后光照制度為23 h∶1 h(L∶D)。雞舍溫度第1周33～35℃，之后每周下降2℃。飼養(yǎng)管理按《AA肉雞飼養(yǎng)管理手冊》進行，自由采食和飲水，常規(guī)免疫。

1.4 指標測定與方法

生產性能:每天觀察雞的生長發(fā)育、發(fā)病及死亡情況，記錄死淘數(shù)。分別于20日齡和41日齡的22:00禁食，次日08:00稱重，期間自由飲水，準確記錄各重復采食量，計算平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)和飼料/增重。

血液生化指標:分別于21日齡和42日齡，以重復為單位隨機選擇公母各1只肉仔雞，翅靜脈采血3 mL，抗凝管存放，3 000 r/min離心10 min，取上清液分裝，置-20℃冰箱保存待用。血漿谷草轉氨酶(AST)、谷丙轉氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)活性和總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL)、肌酐(CRE)、尿酸(UA)含量采用全自動生化分析儀測定，試劑盒購自上?？迫A生物工程股份有限公司。

抗氧化指標:血漿超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物活性(GSH-Px)和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0軟件的one-way ANOVA程序進行統(tǒng)計分析，Duncan氏法進行差異顯著性檢驗，以P＜0.05為差異顯著性標準。測定結果以“平均值±標準差”表示。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

2 結果

2.1 飼糧中添加FA對肉仔雞生產性能的影響

由表2可知，1～21日齡，0.240%FA組較對照組和0.012%FA組顯著增加了肉仔雞ADG(P＜0.05);22～42日齡，各組間ADG無顯著差異(P＞0.05);從全期(1～42日齡)看，0.024%和0.240%FA組ADG顯著高于0.012%FA組(P＜0.05)，CTC組與 FA各組無顯著性差別(P＞0.05)。1～21日齡，0.048%FA組ADFI最低，顯著低于其他各組(P＜0.05)，CTC組ADFI最高，顯著高于0.012% ～0.120%FA組(P＜0.05);22～42日齡和1～42日齡，各組間ADFI無顯著差異(P＞0.05)。關于飼料/增重，1～21日齡，對照組最高，顯著高于0.048%和0.240%FA組(P＜0.05)，0.048%FA組最低，顯著低于對照組、CTC組和0.012%FA組(P＜0.05);22～42日齡，各組間無顯著差異(P＞0.05);從全期看，對照組和0.012%組最高，顯著高于0.024%和0.240%FA組(P＜0.05)?？芍現(xiàn)A對1～21日齡肉仔雞作用更加明顯，0.024% ～0.240%FA可在一定程度上增加1～21日齡肉仔雞ADG、降低ADFI和飼料/增重。

表2 飼糧中添加FA對肉仔雞生產性能的影響Table2 Effects of dietary fulvic acid on performance of broilers

2.2 飼糧中添加FA對肉仔雞血液抗氧化指標的影響

由表3可知，21日齡，各組血漿SOD活性差異不顯著(P＞0.05);42日齡，0.048%FA組血漿SOD活性最高，顯著高于對照組和CTC組(P＜0.05)。關于血漿MDA含量，42日齡，0.048%和0.120%FA組較對照組顯著降低(P＜0.05)。關于血漿GSH-Px活性，21日齡和42日齡，各FA組有增加的趨勢，但各組之間無顯著差異(P＞0.05)。可知，0.048%FA組的血液抗氧化指標較好。

表3 飼糧中添加FA對肉仔雞血漿抗氧化酶活性和丙二醛含量的影響Table3 Effects of dietary fulvic acid on plasma antioxidant enzyme activities and MDA content in broilers

2.3 飼糧中添加FA對肉仔雞血液生化指標的影響

飼糧中添加FA對肉仔雞血漿肝臟功能指標的影響見表4。各組21日齡和42日齡肉仔雞血漿AST活性差異均不顯著(P＞0.05)。21日齡，所有FA組肉仔雞血漿ALT活性均低于對照組和金霉素組(P＜0.05)，0.240%FA組ALP活性顯著低于0.048%FA組(P＜0.05);42日齡，各組血漿ALT和ALP活性差異不顯著(P＞0.05)。42日齡，0.240%FA組血漿LDH活性顯著高于其他各組(P＜0.05);0.120%FA組顯著高于0.012%、0.024%、0.048%FA組和CTC組(P＜0.05)。21日齡，與對照組和0.120%FA組相比，0.240%FA升高了肉仔雞血漿ALB含量(P＜0.05);42日齡，0.120%FA組顯著高于0.012%FA組(P＜0.05)。21日齡，0.240%FA組血漿TBIL含量最高，顯著高于對照組和CTC組(P＜0.05);42日齡，各組無顯著差異(P＞0.05)?？芍暭Z添加0.240%FA對21日齡和42日齡肉仔雞肝臟功能指標均有不良影響。

飼糧中添加FA對肉仔雞血漿腎臟功能指標的影響見表5。21日齡，各組肉仔雞血漿CRE含量差異不顯著(P＞0.05);42日齡，0.240%FA組血漿CRE含量顯著高于CTC組(P＜0.05)。FA對血漿UA含量無顯著性影響(P＞0.05)。

3 討論

3.1 飼糧中添加FA對肉仔雞生產性能的影響

研究表明，腐殖酸可促進肉雞[11，14]和肉鴨[15]增重、提高肉仔雞弱雛成活率[11]、減少產蛋雞死亡率[10，16]，改善肉雞[17]和蛋雞[10]的飼料效率。本試驗中，F(xiàn)A的促生長作用主要體現(xiàn)在肉仔雞生長前期，0.024% ～0.240%FA可在一定程度上增加ADG、降低ADFI和飼料/增重。飼料/增重隨FA添加量增加而降低，與Yoruk等[16]在蛋雞上的試驗結果相類似。有研究報道認為，產蛋雞飼糧中FA最佳添加劑量為2‰[18]，從本試驗生產性能結果看，肉仔雞飼糧中FA的適宜劑量在0.024%～0.240%。

3.2 飼糧中添加FA對肉仔雞血液抗氧化指標的影響

正常機體的氧化損傷和抗氧化體系處于動態(tài)平衡，機體代謝產生的活性氧能不斷地被抗氧化體系清除，以維持細胞氧化和還原穩(wěn)態(tài)。研究表明，在低溫脅迫或干旱條件下，F(xiàn)A能提高油菜或冬小麥SOD等抗氧化酶活性，促進植物生長，提高植物抗逆能力[19-20]。本試驗結果表明，飼糧添加0.012%～0.048%FA在一定程度上提高了肉仔雞血漿SOD和GSH-Px活性，其中0.048%FA組顯著增加了42日齡肉仔雞血漿SOD活性，顯著降低了MDA含量。因FA結構復雜，其提高抗氧 化作用的分子機理尚待進一步研究。

表4 飼糧中添加FA對肉仔雞血漿肝臟功能指標的影響Table4 Effects of dietary fulvic acid on plasma hepatic function parameters in broilers

3.3 飼糧中添加FA對肉仔雞血液生化指標的影響

3.3.1 飼糧中添加FA對肉仔雞血漿肝臟功能指標的影響

肝臟和腎臟分別是異源物質在機體進行轉化和代謝的主要場所。血漿AST、ALT、ALP和LDH等酶類活性能反映肝臟細胞受損情況及嚴重程度。ALT和AST主要位于肝細胞胞漿水溶性部分或線粒體中，活性增高常提示肝細胞破壞、細胞膜通透性增強或線粒體損傷。本試驗中，21日齡所有FA組肉仔雞血漿ALT活性均顯著降低，但AST活性無相同變化趨勢，說明FA并非通過降低肝細胞膜的通透性減少ALT的漏出，而可能是通過加速血漿ALT的清除或抑制肝臟ALT活性和合成，降低血漿ALT活性，具體原因還有待進一步研究。LDH是一種糖酵解酶，廣泛分布于機體各組織，肝臟中活性最大。本試驗表明，0.240%FA顯著升高了42日齡肉仔雞血漿LDH活性，說明該劑量對42日齡肉仔雞肝臟功能產生了不良影響。血漿ALB和TBIL含量分別是反映肝臟合成及排泄功能的指標，本試驗中，0.240%FA組，21日齡肉仔雞血漿ALB和TBIL含量顯著升高，提示肝臟蛋白質合成能力及排泄功能受到影響。

表5 飼糧中添加FA對肉仔雞血漿腎臟功能指標的影響Table5 Effects of dietary fulvic acid on plasma kidney function parameters in broilers

3.3.2 飼糧中添加FA對肉仔雞血漿腎臟功能指標的影響

CRE是肌肉中磷酸肌酸的終末代謝產物，不能被重吸收，經腎小球過濾后排出體外。血漿CRE的濃度變化反映了腎小球的濾過能力。尿酸是嘌呤代謝的終產物，主要通過腎臟排出。本試驗中，與對照組相比，F(xiàn)A對肉仔雞血漿CRE和UA含量無顯著影響，說明飼糧添加0.012%～0.240%的FA對肉仔雞腎臟功能無顯著影響。與CTC組相比，0.240%FA顯著升高了42日齡肉仔雞血漿CRE含量，但UA含量無顯著差異，說明二者可能對內源CRE生成的影響不同，具體機制有待進一步研究。

4 結論

① FA對1～21日齡肉仔雞作用較明顯;0.024%～0.240%FA可在一定程度上增加ADG、降低ADFI和飼料/增重。

②0.048%FA能顯著增強42日齡肉仔雞血漿SOD活性，降低MDA含量;0.240%FA添加劑量會對肝臟功能有不良影響，但生產性能和抗氧化指標無顯著變化。

③綜上，建議FA在肉仔雞飼糧中添加量低于0.240%。

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