黃學(xué)斌 劉庭科

（廣東溫氏食品集團有限公司研究院，廣東省浮市 527400）

目前，多數(shù)豬場對接種豬瘟疫苗十分重視，但豬瘟免疫失敗的臨床現(xiàn)象還是比較普遍。具體表現(xiàn)為抗體水平參差不齊、離散度高、總體抗體滴度偏低、免疫豬群時有非典型豬瘟疫情發(fā)生，這說明豬瘟疫苗免疫沒有產(chǎn)生有效的保護作用。據(jù)何啟蓋教授對多個省市44個規(guī)?；i場進行豬瘟抗體水平監(jiān)測的結(jié)果 （豬群的免疫合格率僅有55.72%，母豬、育肥豬和仔豬的免疫合格率分別為67%、38%和22%）表明各豬場豬瘟疫苗的免疫質(zhì)量參差不齊，合格率偏低。豬瘟疫苗免疫是豬場防制豬瘟的重要途徑，疫苗質(zhì)量的監(jiān)控不到位和盲目性選擇是免疫失敗的重要原因之一。目前市場上豬瘟疫苗種類繁多，且夸大效果，質(zhì)量不一，導(dǎo)致臨床使用過程中，免疫效果差異顯著。因此評價來自不同廠家疫苗的免疫效果，對豬瘟的防治具有重大意義。

1 試驗材料

1.1 疫苗

試驗所用的疫苗分別為：A廠、B廠、C廠的豬瘟活疫苗 （均為細(xì)胞源），每頭份含細(xì)胞毒≥7 500個家兔感染量。

1.2 診斷試劑

豬瘟抗體診斷試劑盒 （IDEXX公司）。

1.3 試驗動物

試驗兔為新西蘭SPF級長白兔，購自華南醫(yī)科大學(xué)實驗動物研究所，均為雌性，未免疫過任何疫苗，每只重約1.6～2.0 kg； 豬體試驗于 2012 年 1～4 月在廣東新興某豬場進行，選擇同期分娩的健康原種母豬所產(chǎn)的仔豬40頭，試驗期間按照豬場正常生產(chǎn)流程管理，所有仔豬所處試驗條件和飼養(yǎng)管理條件相同。

2 試驗方法

2.1 兔體試驗

免疫安排：按照瓶簽標(biāo)示用生理鹽水將每頭份疫苗稀釋7 500倍，各接種家兔2只 （即A廠疫苗接種試驗兔1和2，B廠疫苗接種試驗兔3和4，C廠疫苗接種試驗兔5和6），每只兔耳靜脈注射1 mL，兔7注射1 mL生理鹽水作為對照。家兔接種后，每隔6小時測體溫1次，連續(xù)測5天。接種疫苗后，兔的體溫反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)如下。定型熱反應(yīng) （++）：潛伏期48～96小時，體溫上升呈明顯曲線，至少有3個溫次超過常溫1℃以上，并稽留18～36小時。輕熱反應(yīng) （+）：潛伏期48～96小時，體溫上升呈明顯曲線，至少有2個溫次超過常溫0.5℃以上，并稽留12～36小時?？梢煞磻?yīng) （±）：潛伏期48～96小時，體溫曲線起伏不定，稽留不到12小時；或潛伏期在24小時以上，不足48小時及超過96小時至120小時出現(xiàn)熱反應(yīng)。無反應(yīng) （-）：體溫正常。如果兩只兔均為定型熱反應(yīng)或一只為定型熱另一只為輕熱反應(yīng)，說明疫苗合格，如果2只兔均為輕熱反應(yīng)，說明疫苗可疑。

2.2 仔豬免疫試驗

無豬瘟中和抗體 （40～50日齡）保育豬40頭，分為4組 （每組10頭），即每種疫苗設(shè)1組和生理鹽水空白對照組，共計4組；采用一次性免疫，疫苗組每頭豬按1頭份接種疫苗，對照組按1 mL/頭接種生理鹽水；分別在免疫前、免疫后15、30、45和60天采血。

豬瘟抗體的檢測采用阻斷ELISA方法，試驗操作參照試劑盒說明進行，抗體滴度用阻斷率表示，阻斷率通過450 nm波長樣本吸光度與陰性對照吸光度的比值。如果樣品的阻斷率大于或等于40%，該樣本就可以判為陽性 （有豬瘟抗體存在）；如果樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣本就可以判為陰性（無豬瘟抗體存在），如果樣品的阻斷率在30%～40%之間，該樣本就可以判為可疑。試驗數(shù)據(jù)采用專門的軟件分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 兔體熱反應(yīng)結(jié)果

圖1為兔免疫不同廠家的豬瘟疫苗后，不同時間的體溫變化曲線。從圖中可以看出，兔1、2、3、4體溫上升呈明顯曲線，在接種后48小時超過3溫次超出對照組兔體溫1℃以上，并稽留時間超過18小時?？梢娒庖逜廠和B廠的豬瘟疫苗兔子的體溫變化曲線均表現(xiàn)為定型熱，說明這兩個廠的疫苗合格。免疫C廠的豬瘟疫苗的兔5的體溫與兔7相比無明顯變化，表現(xiàn)為無反應(yīng)，免疫C廠的豬瘟疫苗的兔6體溫反應(yīng)為輕熱，說明C廠的疫苗質(zhì)量不合格。

3.2 仔豬免疫結(jié)果

由于試驗過程中部分仔豬不符合選用標(biāo)準(zhǔn)被淘汰以及采血過程中造成的操作誤差，本研究僅對已經(jīng)檢測的結(jié)果進行分析，結(jié)果見表1。從表中可以看出，C廠的豬瘟疫苗免疫30天豬瘟抗體檢測為陰性。A廠的疫苗在免疫后30天后抗體全部為陽性 （抗體100%大于40%）；B廠的豬瘟在免疫后15天后抗體全部為陽性，抗體離散度低于B廠最低，A廠次之，說明B廠疫苗免疫后群體抗體整齊度較好。

4 討論

兔體熱反應(yīng)是篩選豬瘟疫苗的先決條件，也是第一步。從兔體熱反應(yīng)來看，A廠和B廠的疫苗在注射兔體后，兔體體溫都有所升高，但程度不同，從總體的體溫反應(yīng)曲線來看，A廠和B廠的疫苗質(zhì)量較好，C廠較差。進一步利用豬體試驗對疫苗免疫效果進行評價，從豬體免疫前后離散度變化、免疫前后抗體阻斷率大于40%的變化以及免疫前后抗體平均值變化來看，B廠的疫苗抗體產(chǎn)生的最快，群體的抗體整齊度最好，A廠的疫苗次之，C廠的疫苗免疫失敗，可能是疫苗在保存和運輸環(huán)節(jié)出現(xiàn)失誤?？梢夿廠的疫苗值得在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

圖2 不同廠家的豬瘟疫苗兔體反應(yīng)熱圖

表1 豬瘟抗體檢測結(jié)果