趙 越，詹志鵬，袁 媛，王博涵，鄭曉南，任亞浩

(中國醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室，遼寧沈陽 110001)

白藜蘆醇對高脂喂養(yǎng)C57BL/6J小鼠肝臟脂代謝的影響

趙 越，詹志鵬，袁 媛，王博涵，鄭曉南，任亞浩

(中國醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院營養(yǎng)與食品衛(wèi)生教研室，遼寧沈陽 110001)

目的 探討白藜蘆醇對高脂飼料喂養(yǎng)的C57BL/6J小鼠肝臟脂代謝的影響。方法 雄性C57BL/6J小鼠30只，按體重分為對照組、高脂組和干預(yù)組，每組10只，對照組和高脂組分別喂飼基礎(chǔ)飼料和高脂飼料并給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，干預(yù)組在喂飼高脂飼料的同時(shí)給予0.5%羧甲基纖維素鈉溶液溶解的白藜蘆醇灌胃，第16周解剖分離小鼠肝臟，制作HE切片，測定肝臟甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)及游離脂肪酸(FFA)含量。結(jié)果 肝臟HE切片可見高脂組肝細(xì)胞有大量脂肪空泡形成，而干預(yù)組與對照組相似，肝細(xì)胞未見脂肪變性改變;肝臟TG和TC含量，高脂組(TG 為5.78±1.69 mmol/L，TC為2.69±1.20 mmol/L)均明顯高于對照組(TG 為4.22 ±1.41 mmol/L，TC 為0.96 ±0.35 mmol/L)和干預(yù)組(TG 為4.63 ±1.70 mmol/L，TC 為 1.65 ±0.89 mmol/L)(P＜0.05)，而干預(yù)組和對照組相比，差異均無顯著性意義(P＞0.05);肝臟FFA含量，各組間差異無顯著性意義(P＞0.05)。結(jié)論 白藜蘆醇可降低高脂喂養(yǎng)C57BL/6J小鼠肝臟TG、TC含量。

白藜蘆醇;C57BL/6J小鼠;甘油三酯;總膽固醇

近年來，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和居民生活水平的提高，中國的膳食結(jié)構(gòu)正在逐漸向西方化轉(zhuǎn)變，膳食高能量、高脂肪和體力活動(dòng)減少造成非酒精性脂肪肝病的發(fā)病率快速上升。白藜蘆醇是一種植物多酚類物質(zhì)，大量存在于葡萄皮和中藥虎杖中，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、延長壽命等多種生物活性［1-3］。本研究采用白藜蘆醇對高脂飼料喂養(yǎng)的C57BL/6J小鼠進(jìn)行預(yù)防性干預(yù)，通過觀察肝臟HE切片及測定肝臟脂代謝相關(guān)指標(biāo)，探討白藜蘆醇對肝臟脂代謝的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

30只雄性C57BL/6J小鼠，體重18～22 g，購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司。

1.2 主要儀器及試劑

ECOM-F6124半自動(dòng)生化分析儀(德國 Eppendorf);UV310紫外可見光分光光度計(jì)(英國PYE-UNICAM);甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)測定用試劑盒(北京中生北控生物科技有限公司);游離脂肪酸(FFA)測定用試劑盒(南京建成生物技術(shù)有限公司);白藜蘆醇(西安冠宇生物技術(shù)有限公司);膽固醇、膽鹽、羧甲基纖維素鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 動(dòng)物分組與干預(yù)

30只雄性C57BL/6J小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分為基礎(chǔ)對照組(對照組)、高脂飼料組(高脂組)、白藜蘆醇干預(yù)組(干預(yù)組)，每組10只。對照組和高脂組在每天分別喂飼基礎(chǔ)飼料(由中國醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部提供)和高脂飼料(含88.75%的基礎(chǔ)飼料、10%的豬油、1%的膽固醇和0.25%的膽鹽)的基礎(chǔ)上給予0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液灌胃，干預(yù)組在喂飼高脂飼料的同時(shí)每天給予0.5%的羧甲基纖維素鈉溶液溶解的濃度為22.5 mg/kg·bw·d的白藜蘆醇灌胃。實(shí)驗(yàn)期間小鼠自由攝食、飲水，室內(nèi)通風(fēng)良好，溫度(22±2)℃。干預(yù)時(shí)間為16周。

1.4 樣本采集與指標(biāo)測定

干預(yù)期末，將小鼠禁食12 h后，用乙醚麻醉，脫頸椎處死，迅速分離肝臟，于肝右葉中部取1塊1 cm×0.5 cm×0.3 cm大小的肝組織放入10%中性甲醛中固定制作HE切片，采用Olympus光學(xué)顯微鏡觀察肝臟病理改變。稱取150～200 mg肝組織，氯仿 - 甲醇法［4］測定肝臟 TG、TC 含量，另取50～100 mg肝組織，用0.9%生理鹽水制成10%組織勻漿，3000 r/min離心15 min，取上清液，按試劑盒說明用UV310紫外可見光分光光度計(jì)測定FFA含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用±s表示，用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn) α =0.05。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠肝臟病理學(xué)改變

干預(yù)結(jié)束時(shí)小鼠肝臟HE染色光鏡下觀察，高脂組小鼠肝組織呈彌漫性脂肪變，約有30% ～50%的肝細(xì)胞發(fā)生了脂肪變性;而干預(yù)組和對照組相似，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞形態(tài)正常，排列緊密，未見脂肪變性改變。見圖1。

2.2 各組小鼠肝臟TG、TC、FFA含量比較

小鼠肝臟TG和TC含量，高脂組均明顯高于對照組和干預(yù)組(P＜0.05)，而干預(yù)組和對照組相比，差異無顯著性意義(P＞0.05);小鼠肝臟FFA含量，以高脂組最高，干預(yù)組次之，對照組最低，但各組間差異無顯著性意義(P＞0.05)。見表1。

圖1 各組小鼠肝臟HE切片(×400)Fig 1 HE staining of mice in each group

表1 各組小鼠肝臟TG、TC、FFA含量比較Tab 1 The contrast of TG，TC and FFA content of mice live in each group (n=10，±s)

表1 各組小鼠肝臟TG、TC、FFA含量比較Tab 1 The contrast of TG，TC and FFA content of mice live in each group (n=10，±s)

1)與高脂組比較，P＜0.05

組別 TG(mmol/L) TC(mmol/L) FFA(μmol/L)對照組 4.22 ±1.411) 0.96 ±0.351)114.63 ±24.33 108.38 ±20.55高脂組 5.78 ±1.69 2.69 ±1.20 122.65 ±20.79干預(yù)組 4.63 ±1.701) 1.65 ±0.891)

3 討 論

目前，動(dòng)物脂肪肝造模方式主要分為先天型、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物、化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)和高脂飼料誘導(dǎo)這4種形式［5］。用高脂飼料誘導(dǎo)的動(dòng)物脂肪肝模型，病理特征接近人類、方法簡單、價(jià)格低廉，是誘導(dǎo)非酒精性脂肪肝的常用方法［6］。而雄性C57BL/6J小鼠對營養(yǎng)性肝臟損傷有顯著易感性，是該類研究的最佳受試對象。本次研究中高脂組和干預(yù)組C57BL/6J小鼠共喂飼高脂飼料16周，干預(yù)組在喂飼高脂飼料的同時(shí)采用白藜蘆醇進(jìn)行預(yù)防性干預(yù)。有研究顯示，白藜蘆醇干預(yù)劑量為22.5 mg/kg·bw·d時(shí)，降低小鼠血脂的作用最為明顯［7］，故本次研究中白藜蘆醇的干預(yù)劑量定為22.5mg/kg·bw·d。由各組小鼠肝臟HE切片可見，高脂組肝組織具有明顯的脂肪變性改變，而干預(yù)組肝組織形態(tài)正常，提示白藜蘆醇能夠預(yù)防高脂飲食下C57BL/6J小鼠肝臟脂肪變性的發(fā)生。但本研究未對小鼠肝臟病理學(xué)改變進(jìn)行半定量分析，即脂肪特殊染色蘇丹Ⅲ染色。由各組小鼠肝臟TG、TC和FFA水平可見，干預(yù)組TG、TC含量均明顯低于高脂組;而FFA含量干預(yù)組與高脂組比較雖無顯著性意義，但呈現(xiàn)一定的下降趨勢。這一結(jié)果提示白藜蘆醇對肝脂肪變性的預(yù)防保護(hù)作用可能主要是通過降低肝臟TG、TC含量實(shí)現(xiàn)的。以往研究認(rèn)為，白藜蘆醇可通過多種途徑調(diào)節(jié)肝臟脂代謝。尚敬等［8］采用白藜蘆醇對高脂飲食大鼠進(jìn)行干預(yù)，發(fā)現(xiàn)白藜蘆醇可通過磷酸腺苷活化蛋白激酶途徑同時(shí)改善胰島素抵抗和降低肝臟TG、TC含量。研究表明利用白藜蘆醇對軟脂酸鈉誘導(dǎo)的肝細(xì)胞脂肪變性進(jìn)行干預(yù)，風(fēng)險(xiǎn)白藜蘆醇可以激活沉默信息調(diào)節(jié)因子1(SIRT1)，抑制固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白的表達(dá)，進(jìn)而降低肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)的積累［9］。

:

［1］Baur JA，Sinclair DA.Therapeutic Potential of resveratrol:the in vivo evidence［J］.Nat Rev Drug Discov，2006，5(6):493-506.

［2］Das S，Das DK.Anti-inflammatory response of resveratrol［J］.Inflam Allergy Drug Targets，2007，6(3):168 -173.

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［4］曾濤，謝克勤，張翠麗，等.氯仿/甲醇勻漿測定肝臟甘油三酯含量［J］.衛(wèi)生研究，2008，37(5):550-551.

［5］倪鴻昌，李俊，金涌，等.大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究［J］.中國藥理學(xué)通報(bào)，2004，20(6):703-706.

［6］Anstee QM，Goldin RD.Mouse models in non-alcoholic fatty liver disease and steatohepatitis research［J］.Int J Exp Pathol，2006，87(1):1 -16.

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［8］尚敬，陳璐璐，肖方喜，等.白藜蘆醇對大鼠非酒精性脂肪肝的療效及機(jī)制［J］.中華肝臟病學(xué)雜志，2008，16:616-619.

［9］Wang GL，F(xiàn)u YC，Xu WC，et al.Resveratrol inhibits the expression of SREBP1 in cell model of steatosis via Sirt1-FOXO1 signaling pathway［J］.Biochemical and Biophysical Research Communications，2009，380(3):644 -649.

Effect of resveratrol on liver lipid metabolism in high-fat diet C57BL/6J mice

ZHAO Yue，ZHAN Zhi-peng，YUAN Yuan，WANG Bo-han，ZHENG Xiao-nan，REN Ya-hao
(Department of Nutrition and Food Hygiene，School of Public Health，China Medical University，Shenyang110001，China)

［Abstract］ObjectiveTo explore the effect of resveratrol on liver lipid metabolism in high - fat diet C57BL/6J mice.MethodsThe male C57BL/6J mice(n=30)were randomly divided into 3 groups(10 mice in each group)，including normal control group(NC)，high fat diet group(HFD)and resveratrol intervention group(RI).NC and HFD were fed a stock rodent diet and a high fat diet respectively，and meanwhile，both were given 0.5%CMC intragastric administration.RI was fed a high fat diet and given resveratrol intragastric administration.After 16 weeks，separated mice livers and made HE slices，determined liver triglyceride(TG)，total cholesterol(TC)and free fatty acid(FFA).ResultsObserved from the liver HE slices，there were many fat empty bubbles in the HFD.RI was the same as NC and no steatosis changes.Liver TG(5.78 ±1.69)mmol/L and TC(2.69 ±1.20)mmol/L content in HFD were both higher than RI(TG:4.22 ±1.41 mmol/L，TC:0.96 ±0.35 mmol/L)and NC(TG:4.63 ±1.70 mmol/L，TC:1.65 ±0.89 mmol/L)(P＜0.05)，but there were not significantly different between RI and NC(P＞0.05).Liver FFA content was not significantly different among 3 groups(P＞0.05).ConclusionResveratrol can reduce liver TG and TC content in high-fat diet C57BL/6J mice.

［Key words］resveratrol;C57BL/6J mice;triglyceride;total cholesterol

R 151.2

A

1671-7295(2013)02-0116-03

趙越，詹志鵬，袁媛，等.白藜蘆醇對高脂喂養(yǎng)C57BL/6J小鼠肝臟脂代謝的影響［J］.大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，35(2):116 -118.

10.11724/jdmu.2013.02.04

遼寧省教育廳高?？茖W(xué)基金(2009A720)

趙越(1968-)，男，遼寧沈陽人，主管技師。E-mail:feigo_dl@163.com

2012-11-26;

2013-03-04)