熊佰煉，張進(jìn)忠，2，* ，代 娟，邢 賾，徐衛(wèi)紅

(1.西南大學(xué)資源環(huán)境學(xué)院，三峽庫(kù)區(qū)生態(tài)環(huán)境教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400715;2.重慶市農(nóng)業(yè)資源與環(huán)境重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400716)

硫丹(endosulfan)是一種廣泛使用的有機(jī)氯農(nóng)藥，2011年被列入持久性有機(jī)污染物(POPs)控制清單［1］。我國(guó)從1994年開始生產(chǎn)和使用硫丹，多年的施用使得我國(guó)大部分地區(qū)土壤中都有不同程度的硫丹殘留和積累［2-3］。土壤酶是土壤生化反應(yīng)的重要催化劑，對(duì)土壤物質(zhì)代謝和養(yǎng)分轉(zhuǎn)化都有顯著影響［4-5］。土壤酶對(duì)環(huán)境變化非常敏感，可以作為預(yù)警土壤環(huán)境質(zhì)量變化和外源性化學(xué)污染物的生物指標(biāo)［6-7］。硫丹在土壤中的殘留勢(shì)必影響土壤酶活性，相關(guān)研究主要涉及的土壤酶有脫氫酶、熒光素二乙酸脂水解酶、酸性磷酸酶、堿性磷酸酶、固氮酶、芳基硫酸酯酶和β-d-葡萄糖苷酶等［8-9］。但是，關(guān)于硫丹及其主要代謝產(chǎn)物(硫丹硫酸鹽和硫丹二醇)對(duì)土壤脲酶、硝酸還原酶和多酚氧化酶活性的影響尚不清楚，且未見報(bào)道。

土壤脲酶催化尿素水解成CO2和NH3，常作為土壤響應(yīng)環(huán)境干擾的重要指標(biāo)［10-12］。硝酸還原酶催化硝態(tài)氮還原為亞硝態(tài)氮，是反硝化過(guò)程中的一種重要酶，參與土壤氮素循環(huán)［13-14］。土壤多酚氧化酶將木質(zhì)素分解產(chǎn)生的酚類物質(zhì)氧化為醌類物質(zhì)，隨后形成腐殖質(zhì)等有機(jī)物，其活性高低與土壤有機(jī)質(zhì)的形成和腐殖化程度密切相關(guān)［15-16］。紫色土是長(zhǎng)江上游最常見的土壤類型，分布區(qū)地形多為丘陵、低山，土壤有機(jī)質(zhì)含量普遍不高，水土流失較為嚴(yán)重［17］，該地區(qū)在防治農(nóng)作物蟲害時(shí)大量施用硫丹［2］，使得土壤中硫丹殘留較為嚴(yán)重［3］。為此，本研究采用室內(nèi)避光培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，模擬研究硫丹及其主要代謝產(chǎn)物(硫丹硫酸鹽和硫丹二醇)對(duì)紫色土中上述3種酶活性的影響，為探討硫丹對(duì)土壤環(huán)境質(zhì)量的影響和評(píng)估農(nóng)藥施用的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試土壤

供試紫色土采自西南大學(xué)實(shí)驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)0—20 cm土層，該農(nóng)場(chǎng)無(wú)使用硫丹類農(nóng)藥的歷史，且未檢出硫丹及其代謝產(chǎn)物。采集的土壤樣品經(jīng)自然風(fēng)干、研磨、分別過(guò)1 mm和0.25 mm篩后備用，其基本理化性質(zhì)見表1。

表1 供試土壤的基本理化性質(zhì)(0—20 cm土層)Table1 Basic physicochemical property of the tested soil(0—20 cm depth)

1.2 主要試劑和材料

α-硫丹(98%)、β-硫丹(98.7%)標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自美國(guó)Sigma公司;硫丹硫酸鹽(98.5%)、硫丹二醇(99.4%)標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司;

硫丹原藥購(gòu)自河南春光農(nóng)化有限公司，純度為96%，經(jīng)測(cè)定α、β-硫丹的質(zhì)量比為62.66∶37.34;

乙腈、甲醇均為色譜純(美國(guó)Thermo Fisher公司);其余試劑均為分析純;

Florisil固相萃取小柱(美國(guó)Welch公司):500 mg/6 mL，用前經(jīng)正己烷活化。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟和方法

1.3.1 土壤培養(yǎng)與酶活性測(cè)定

向過(guò)0.25 mm篩的土壤中加入溶于石油醚的硫丹原藥，充分?jǐn)嚢杌靹?，待石油醚完全揮發(fā)后，得到質(zhì)量濃度為1.00 g/kg的硫丹污染母土。在過(guò)1 mm篩的土壤中加入適量的污染母土，多級(jí)稀釋混勻，使土壤中原藥濃度分別為0、5、10、20和100 mg/kg，得到CK、T1—T4共5種處理。稱取制得的土樣300 g，調(diào)節(jié)含水量至田間最大持水量的60%，裝入廣口瓶中，蓋上棉塞，在(25±1)℃的生化培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)，每個(gè)處理做3次重復(fù)。培養(yǎng)過(guò)程中用高溫滅菌去離子水補(bǔ)水，維持土樣含水量的恒定。第5、10、15、20、30和60天時(shí)采集土樣，立即測(cè)定土壤酶活性。脲酶、硝酸還原酶和多酚氧化酶的活性分別用尿素殘留法、鄰苯三酚比色法和酚二磺酸比色法測(cè)定［18］，設(shè)置無(wú)土壤的底物和無(wú)底物的土壤為對(duì)照。上述方法測(cè)定脲酶、硝酸還原酶和多酚氧化酶活性的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為5.1%、4.2%和4.4%(n=5)。

1.3.2 土壤中硫丹及其代謝產(chǎn)物的提取與凈化

土壤中硫丹及其代謝產(chǎn)物的提取在馬輝等［19］和Kumar等［20］方法的基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。在培養(yǎng)0、5、10、15、20、30和60 d時(shí)稱取相當(dāng)于20 g干土的培養(yǎng)土樣，加入50 mL丙酮，超聲提取30 min，Whatman 42號(hào)定性濾紙過(guò)濾，用少量丙酮多次洗滌濾渣，全部濾液轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加入10%的NaCl溶液100 mL，分別用50、50和30 mL石油醚振蕩提取3次，每次振搖5 min以上，靜置分層，棄去下層丙酮水互溶相。提取液經(jīng)無(wú)水Na2SO4柱脫水后轉(zhuǎn)移至旋蒸瓶，40°C水浴減壓濃縮至近干，加入2 mL石油醚，旋渦振蕩溶解。將2 mL濃縮液轉(zhuǎn)移至預(yù)先活化的Florisil固相萃取小柱，用10 mL甲苯/正己烷(65∶35)淋洗，收集流出液，氮?dú)獯蹈桑瑴?zhǔn)確加入2 mL乙腈，渦旋振蕩溶解，供高效液相色譜(HPLC)分析。

1.3.3 硫丹及其代謝產(chǎn)物的測(cè)定與質(zhì)量控制

采用 HPLC(Shimadzu Sil-20A)分離、SPD-20A檢測(cè)器測(cè)定硫丹及其代謝產(chǎn)物的含量。色譜柱:DiamonsilTM(鉆石二代)C18液相色譜柱(4.5μm，250 mm ×4.6 mm);流動(dòng)相:乙腈∶水(70∶30體積分?jǐn)?shù))，等度洗脫，流速為1.0 mL/min;進(jìn)樣體積20μL;檢測(cè)波長(zhǎng)214 nm［21］;外標(biāo)法定量。α、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇的檢測(cè)限均為0.1 mg/L，4種化合物在6個(gè)加標(biāo)水平獲得的平均回收率分別為96.67%、95.17%、95.33%和97.50%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為6.91%、6.03%、6.81%和7.24%。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合、Pearson相關(guān)分析和偏相關(guān)分析，Origin 8.5軟件繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 硫丹在紫色土中的降解過(guò)程

α、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度隨時(shí)間的變化過(guò)程如圖1所示。從圖1可以看出，土壤中α、β-硫丹的濃度均隨培養(yǎng)時(shí)間的增加而逐漸減少;前20 d硫丹硫酸鹽濃度增加較快，30 d后基本趨于穩(wěn)定;硫丹二醇濃度呈現(xiàn)先增加后減小的趨勢(shì)，在15 d時(shí)達(dá)到最大。

圖1 土壤中硫丹及其代謝產(chǎn)物濃度隨時(shí)間的變化Fig．1 Variations of the concentrations of endosulfan and its metabolites in soil with time

采用一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型擬合土壤中硫丹隨培養(yǎng)時(shí)間的降解過(guò)程，獲得如表2所示的結(jié)果。一級(jí)降解反應(yīng)動(dòng)力學(xué)方程為:

土壤中硫丹的半衰期為:

式中，t為降解反應(yīng)時(shí)間(d);C0和Ct分別為土壤中硫丹的初始濃度和t時(shí)刻的濃度(mg/kg);k為反應(yīng)速率常數(shù)(d-1)。

從表2可以看出，可用一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)模型描述α-、β-硫丹在紫色土中的降解過(guò)程，獲得的決定系數(shù)在0.935—0.995之間。硫丹初始濃度對(duì)降解反應(yīng)速率常數(shù)有一定影響，T1—T3處理時(shí)α-硫丹的降解速率常數(shù)相差不大，T4處理的速率常數(shù)明顯變小;T2—T4處理的β-硫丹降解速率常數(shù)十分接近，明顯小于T1處理的0.01/d。獲得α-、β-硫丹的半衰期分別為32—99 d和69—116 d，高濃度的硫丹在紫色土中降解更慢。

2.2 硫丹處理對(duì)土壤酶活性的影響

硫丹處理對(duì)土壤酶活性的影響如圖2—圖4所示。從圖2可知，CK處理時(shí)脲酶活性為0.13—0.14 mg·g-1·24 h-1;添加硫丹的初始濃度越大，脲酶活性越低。第5天時(shí)，T1處理對(duì)脲酶起激活作用，較CK增加20.0%(n=3，P＜0.05)，T2處理對(duì)脲酶也表現(xiàn)出激活作用，但與CK差異不顯著;除此之外，硫丹處理對(duì)脲酶不再表現(xiàn)出激活作用。第5—20天時(shí)T1—T3處理脲酶活性隨時(shí)間發(fā)生波動(dòng)，且大部分與CK差異不顯著，僅T3處理在第10天時(shí)較CK下降16.2%(n=3，P＜0.05);第20—60天時(shí)T1—T3處理脲酶活性隨時(shí)間持續(xù)下降，第60天時(shí)受到明顯抑制，較CK分別下降19.2%、34.8%和46.9%(n=3，P＜0.01)。T4處理對(duì)脲酶活性有強(qiáng)烈的抑制作用，第5、10、15、20、30和60天時(shí)分別下降94.5%、85.0%、68.8%、90.1%、56.7%和71.9%(n=3，P ＜0.01)。

表2 土壤中α、β-硫丹降解的動(dòng)力學(xué)方程(n=7)Table 2 Dynamic equations of endosulfan degradation in soil

從圖3可知，CK處理時(shí)硝酸還原酶活性為0.950—1.161 mg·g-1·24 h-1。T1處理，第5天對(duì)硝酸還原酶起激活作用，較CK增加12.3%(n=3，P＜0.05);第20和60天，酶活性與CK差異不顯著。除此之外，硫丹處理對(duì)硝酸還原酶活性表現(xiàn)出明顯的抑制作用，抑制作用隨添加硫丹初始濃度的增加而逐漸增強(qiáng)。T1—T3處理酶活性變化的趨勢(shì)基本相同，說(shuō)明這3個(gè)處理對(duì)硝酸還原酶活性的作用機(jī)理可能相同;T4處理第5、10、15、20、30和60天時(shí)酶活性較CK分別下降54.8%、70.1%、72.8%、84.3%、88.8%和89.9%(n=3，P ＜0.01)，表明高濃度硫丹對(duì)酶活性的作用方式可能發(fā)生了變化。

圖2 硫丹對(duì)土壤脲酶活性的影響Fig．2 Effect of endosulfan on urease activity in soil圖中數(shù)據(jù)為ˉx±S

圖3 硫丹對(duì)土壤硝酸還原酶活性的影響Fig．3 Effect of endosulfan on nitrate reductase activity in soil

從圖4可知，CK處理時(shí)多酚氧化酶活性為0.57—0.72 mg·g-1·2 h-1，除T4處理的酶活性峰值出現(xiàn)在第15天，T1—T3處理均出現(xiàn)在第20天。T1處理對(duì)多酚氧化酶表現(xiàn)出一定的抑制作用，第10、15、30和60天時(shí)酶活性較CK分別下降12.6%、12.3%、25.3%和22.7%(n=3，P＜0.05)，但第5和20天時(shí)對(duì)酶活性影響不顯著。T2處理對(duì)多酚氧化酶活性的影響不大，僅第60天時(shí)表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，酶活性較CK下降14.2%(n=3，P＜0.01)。T3處理對(duì)多酚氧化酶活性的影響隨時(shí)間變化較大，表現(xiàn)為“無(wú)顯著影響(第5天)—激活(第10、15、20天)—無(wú)顯著影響(第30天)—抑制(第60天)”的變化趨勢(shì)。第 5、10、15、20和 30天，T4處理對(duì)多酚氧化酶起激活作用，酶活性較CK分別增加92.6%、93.6%、139.9%、83.8%和 31.3%(n=3，P＜0.01);第60天，多酚氧化酶活性恢復(fù)到CK水平?？傮w來(lái)說(shuō)，隨著添加硫丹初始濃度的增大，多酚氧化酶活性呈“抑制(T1處理)—無(wú)影響(T2處理)—激活(T3和T4處理)”的變化趨勢(shì)。

2.3 硫丹殘留與土壤酶活性的關(guān)系

硫丹在土壤中以多種途徑轉(zhuǎn)化，硫丹硫酸鹽和硫丹二醇是其主要代謝產(chǎn)物。將酶活性與硫丹及其主要代謝產(chǎn)物濃度進(jìn)行Pearson相關(guān)分析和偏相關(guān)分析，結(jié)果見表3。

圖4 硫丹對(duì)土壤多酚氧化酶活性的影響Fig 4 Effect of endosulfan on polyphenol oxidase activity in soil

表3 土壤酶活性與硫丹及其代謝產(chǎn)物濃度的相關(guān)關(guān)系Table 3 Correlations between the enzyme activity and the concentration of endosulfan and its metabolites in soil

從Pearson相關(guān)系數(shù)來(lái)看，土壤脲酶和硝酸還原酶活性與α-、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度均呈顯著負(fù)相關(guān)，多酚氧化酶活性與其呈顯著正相關(guān)?？梢姡寥乐羞@4種化合物對(duì)脲酶和硝酸還原酶活性均起抑制作用，對(duì)多酚氧化酶活性起激活作用。但是，當(dāng)多個(gè)影響因素同時(shí)存在時(shí)，Pearson相關(guān)分析不能真實(shí)反映變量間的相關(guān)關(guān)系。因此，在考察土壤酶活性與硫丹或其代謝產(chǎn)物濃度的相關(guān)關(guān)系時(shí)，需要控制其它變量的影響，進(jìn)行偏相關(guān)分析。

從表3的偏相關(guān)分析結(jié)果可以看出，脲酶活性與α-、β-硫丹和硫丹二醇濃度間的偏相關(guān)系數(shù)均未達(dá)到顯著水平，表明這3種化合物單獨(dú)作用時(shí)對(duì)脲酶活性的影響均不大;脲酶活性與硫丹硫酸鹽濃度間的偏相關(guān)系數(shù)為-0.522，呈顯著負(fù)相關(guān)，對(duì)脲酶活性起抑制作用。硝酸還原酶活性與α-、β-硫丹和硫丹二醇濃度的偏相關(guān)性不顯著，表明這3種化合物單獨(dú)作用時(shí)對(duì)其活性的影響較弱;硝酸還原酶活性與硫丹硫酸鹽間的偏相關(guān)系數(shù)為-0.691，呈顯著負(fù)相關(guān)，對(duì)硝酸還原酶活性起抑制作用。多酚氧化酶活性與α-、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度間的偏相關(guān)系數(shù)均未達(dá)到顯著水平，表明這4種化合物單獨(dú)作用時(shí)對(duì)多酚氧化酶活性的直接影響較小。

3 討論

在農(nóng)業(yè)土壤環(huán)境中，農(nóng)藥的遷移轉(zhuǎn)化主要有揮發(fā)、淋溶、水解、光解、微生物降解和生物吸收等途徑，其中許多過(guò)程不受農(nóng)藥初始濃度的影響，符合一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征，半衰期通常是一個(gè)常數(shù)［22］。但本研究中α-、β-硫丹的半衰期分別為32—99 d和69—116 d，隨硫丹初始濃度不同而發(fā)生改變。Awasthi等［23］的研究也表明，硫丹在土壤中的降解速率會(huì)隨其初始濃度的增加而減慢。其原因可能是在室內(nèi)培養(yǎng)條件下，土壤微生物和酶活性是影響硫丹降解的主要因素。硫丹具有生物毒性，高濃度硫丹處理對(duì)微生物和酶活性的毒害作用更大，抑制了微生物和酶對(duì)硫丹的降解。

脲酶活性與α-、β-硫丹和硫丹硫酸鹽濃度間的Pearson相關(guān)系數(shù)(-0.587、-0.661和-0.795)大于偏相關(guān)系數(shù)(0.098、-0.290和-0.522)，表明這3種化合物同時(shí)存在時(shí)對(duì)脲酶活性的影響比其單獨(dú)存在時(shí)強(qiáng)。Soto等［24］和Wan等［25］的研究表明，α-、β-硫丹和硫丹硫酸鹽對(duì)陸生和水生生物、人體的聯(lián)合毒性高于單一化合物，表現(xiàn)出毒性的協(xié)同作用。由此看來(lái)，α-、β-硫丹和硫丹硫酸鹽共存時(shí)對(duì)脲酶活性的抑制作用高于單一化合物，使得硫丹處理能顯著降低土壤脲酶的活性。但是，圖2中T1處理5 d時(shí)脲酶活性高于CK，表現(xiàn)出激活作用，與相關(guān)分析獲得的結(jié)論不符。這可能是因?yàn)橥寥乐写嬖趦煞N形式的脲酶［26］:一是吸附在土壤有機(jī)質(zhì)和土壤礦物中的胞外脲酶;二是以游離態(tài)存在于微生物細(xì)胞中的胞內(nèi)脲酶。有機(jī)氯農(nóng)藥對(duì)微生物具有毒性，可破壞甚至殺死土壤微生物細(xì)胞，使部分胞內(nèi)脲酶釋放出來(lái)，增大脲酶的濃度，進(jìn)而增強(qiáng)土壤中脲酶的活性［27］。T1處理5 d時(shí)，硫丹及其代謝產(chǎn)物可能破壞微生物細(xì)胞，釋放出的胞內(nèi)脲酶增加了土壤中的酶濃度，導(dǎo)致脲酶活性比CK大。隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加，不適應(yīng)硫丹脅迫的微生物細(xì)胞被全部破壞，適應(yīng)硫丹脅迫的微生物不再釋放胞內(nèi)脲酶，硫丹處理對(duì)脲酶活性不再表現(xiàn)出激活作用。T2、T3和T4處理5 d時(shí)脲酶活性未表現(xiàn)激活作用，可能與硫丹的濃度較高有關(guān)。Nasreen等［28］的研究表明，硫丹施用量為1.0—7.5 kg/hm2(約為10—75 mg/kg［29］)時(shí)對(duì)黑粘土(Black clay soil)中脲酶起激活作用，本研究卻發(fā)現(xiàn)10—100 mg/kg硫丹處理可抑制紫色土中脲酶活性;當(dāng)硫丹濃度增大到10.0 kg/hm2(約為100 mg/kg［29］)時(shí)，對(duì)脲酶活性的影響由激活轉(zhuǎn)向抑制［28］，與本研究100 mg/kg硫丹抑制紫色土中脲酶活性的結(jié)果一致。Sannino等［30］發(fā)現(xiàn)，在同一種農(nóng)藥(草甘膦或百草枯)的作用下，不同類型土壤中脲酶活性出現(xiàn)被抑制和激活的兩種截然不同結(jié)果。由此看來(lái)，硫丹對(duì)土壤脲酶活性的影響可能與土壤類型有關(guān)。

硝酸還原酶活性與β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度間的Pearson相關(guān)系數(shù)(-0.743、-0.876和-0.639)大于偏相關(guān)系數(shù)(-0.170、-0.691和-0.177)，表明這3種化合物同時(shí)存在時(shí)對(duì)硝酸還原酶活性的抑制作用強(qiáng)于單一化合物，對(duì)酶活性的影響類似于毒物之間的協(xié)同作用。圖3中T1處理5 d時(shí)硝酸還原酶活性高于CK，其原因還有待進(jìn)一步研究。硫丹影響土壤酶活性可長(zhǎng)達(dá)數(shù)月，作用結(jié)果表現(xiàn)為持續(xù)抑制、持續(xù)激活、激活與抑制作用隨時(shí)間變化等3種形式［8-9，31-32］。Kalyani等［9］發(fā)現(xiàn)，硫丹在98 d內(nèi)可持續(xù)抑制土壤固氮菌產(chǎn)生的固氮酶。Buff等［33］認(rèn)為，硫丹可以吸附于固氮菌細(xì)胞膜，并進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部與胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，對(duì)固氮菌產(chǎn)生毒害作用，抑制固氮酶活性。圖2和圖3中60 d內(nèi)土壤脲酶和硝酸還原酶活性受到持續(xù)抑制，偏相關(guān)分析表明起抑制作用的主要是殘留期比母體化合物更長(zhǎng)的硫丹硫酸鹽，這兩種酶活性的抑制作用機(jī)理是否類似于硫丹持續(xù)抑制固氮酶活性，還需要進(jìn)一步研究。

Pearson相關(guān)分析表明，多酚氧化酶活性與α-、β-硫丹、硫丹硫酸鹽和硫丹二醇濃度間均呈顯著正相關(guān)，而偏相關(guān)分析顯示多酚氧化酶活性與它們均無(wú)顯著相關(guān)性，說(shuō)明這4種化合物單獨(dú)存在時(shí)對(duì)多酚氧化酶活性影響較小，對(duì)酶活性的影響可能是它們共同作用的結(jié)果。圖4中T2—T4處理，硫丹含量越高，多酚氧化酶的活性越強(qiáng)，其中T3和T4處理分別在培養(yǎng)5—20 d和30 d時(shí)顯著激活多酚氧化酶活性。Gianfreda等［34］和周禮愷［4］報(bào)道，含苯環(huán)的化合物能誘導(dǎo)和激活土壤中多酚氧化酶的活性，并促進(jìn)該類化合物的氧化分解。Chen等［35］進(jìn)一步證實(shí)，在一定條件下，土壤中多環(huán)化合物的濃度越大，多酚氧化酶的活性越強(qiáng)。李鈉等［36］研究表明，含雜環(huán)的尼古丁和煙焦油能誘導(dǎo)胞內(nèi)多酚氧化酶向胞外遷移，增加該酶的活性。硫丹的分子結(jié)構(gòu)中含有兩個(gè)五元碳環(huán)、一個(gè)六元碳環(huán)、一個(gè)七元雜環(huán)，這可能是T3和T4處理在培養(yǎng)初期可顯著激活多酚氧化酶活性的原因之一。Defo等［8］的研究顯示，硫丹可為某些微生物的生長(zhǎng)提供碳源，增加了土壤中酶的活性，使得硫丹處理初期多酚氧化酶被激活。圖4中T2—T4處理對(duì)多酚氧化酶活性最終都起抑制作用，可能與硫丹的高毒代謝產(chǎn)物硫丹硫酸鹽的積累有關(guān)，除第5天和20天外，T1處理顯著抑制多酚氧化酶活性的原因還有待進(jìn)一步研究。

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