張洪亮 譚 鵬 鄔瑞光 羅玲娟 韓 靜 王春國 鄧昕祺 劉永剛

(1北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京，100102;2新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)院，烏魯木齊，830028)

駱駝蓬為蒺藜科植物駱駝蓬(Peganum harmala L.)及多裂駱駝蓬［Peganum multisectum(Maxim.)Bobr.］的全草［1］。具有止咳平喘，祛風(fēng)濕，消腫毒之功效，其研究及臨床應(yīng)用已有20多年歷史［2］。駱駝蓬主要成分為生物堿類，而駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿為其主要生物堿［3－4］，它們屬于β－咔啉類生物堿，結(jié)構(gòu)式見圖1。ESI－MS作為一種軟電離方法，已成為研究物質(zhì)結(jié)構(gòu)與生物分子間弱相互作用的重要手段并得到廣泛的應(yīng)用［5－6］。我們采用電噴霧質(zhì)譜儀，優(yōu)化參數(shù)對去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的裂解機(jī)制進(jìn)行了研究，對其碎片進(jìn)行解析，總結(jié)其裂解規(guī)律，豐富去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的質(zhì)譜數(shù)據(jù)，以期為β－咔啉類生物堿的結(jié)構(gòu)鑒定提供可靠的依據(jù)。

圖1 去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的結(jié)構(gòu)式

1 試驗部分

1.1 主要儀器與裝置 美國Thermo公司生產(chǎn)的TSQ Quantum Access Max液相質(zhì)譜聯(lián)用儀，ESI源，三重四極桿分析器，Xcalibur工作站，駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿由實驗室自制(經(jīng)HPLC檢測，含量＞98%)，甲醇(色譜純，美國Fisher公司)，水為雙蒸水并經(jīng)0.45μm濾膜過濾。

1.2 HPLC色譜條件 流動相為0.1%的三乙胺溶液∶乙腈=(38∶62);以0.8 mL/min的流速進(jìn)行梯度洗脫。其色譜圖見圖2。

圖2 去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的HPLC圖

1.3 質(zhì)譜條件 對駱駝蓬堿的質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化處理。其質(zhì)譜條件如下。檢測方式:正;干燥氣流速:40 L·min－1;霧化室壓強(qiáng):40psi;霧化溫度:320℃。毛細(xì)管電壓:2 000eV;掃描范圍:100～1 000u。其總離子流圖見圖3，駱駝蓬堿的質(zhì)譜圖見圖4，去氫駱駝蓬堿的質(zhì)譜圖見圖5。

圖3 去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的總離子流圖

圖4 駱駝蓬堿質(zhì)譜及其碎片離子

圖5 去氫駱駝蓬堿質(zhì)譜及其碎片離子

2 方法與結(jié)果

2.1 正離子下的駱駝蓬堿裂解途徑 在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子為215.04，為［M+H］－的離子，選中母離子對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離(Collision Induced dissociation)分析，得到一系列碎片離子 200.02，174.07，143.16，118.14。通過分析其碎片離子。推測在正離子模式下，駱駝蓬堿可能的裂解途徑如圖6所示。

2.2 正離子下的去氫駱駝蓬堿裂解途徑 在正離子模式下，準(zhǔn)分子離子為213.01，為［M+H］+的離子，選中母離子對其進(jìn)行碰撞誘導(dǎo)解離(Collision Induced dissociation)分析，得到一系列碎片離子 198.01，171.07，143.15，118.14。該化合物的質(zhì)譜裂解途徑與駱駝蓬堿一致。

圖6 正離子模式下駱駝蓬堿的裂解機(jī)理

3 討論

雖然駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿是首次報道的β－咔啉類生物堿，但關(guān)于β－咔啉類生物堿的質(zhì)譜裂解機(jī)制的報道較少，以前文獻(xiàn)報道主要為電子轟擊源(electron ionization，EI)譜。而我們在實驗過程中發(fā)現(xiàn)，ESI－MS與EI－MS譜有較大的不同，因此，選擇用駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿為代表產(chǎn)物研究β－咔啉類生物堿的質(zhì)譜裂解機(jī)制具有較大的研究意義。

駱駝蓬堿和去氫駱駝蓬堿極性相近，我們在參考文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上［7］采用了新的流動相對兩者進(jìn)行了很好的分離，這為駱駝蓬藥材和含有駱駝蓬藥材的制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了數(shù)據(jù)支持。

［1］中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)維吾爾藥分冊［S］.烏魯木齊:新疆科技衛(wèi)生出版社，1998:801.

［2］李春杰，劉德璽，買買提依明，等.駱駝蓬抗癌化學(xué)成分的分離鑒定和藥理實驗研究［J］.新疆醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1987，10(1):27.

［3］The Merck Index［S］.USA，1977:601.

［4］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典［M］.下冊.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1977:1757.

［5］Scalbert，A.，Brennan，L.，F(xiàn)eihn，O.，et al.Mass － spectrometry － Based Metabolmics and Recommendations for Future Progress with Particular Focus on nutrition Research［J］.Metabolomics，2009，5:435 －458.

［6］BAO Yi，SONG Feng － rui，LIU Zhi－ qiang，LIU Shu － ying，YIN Jun.A-nalysis on Hydrolyzation of Aconitum Diester Diterpenoid Alkaloids by Electrospray Ionization Mass Spectrometry［J］.JOURNAL OF CHINESE MASS SPECTROMETRY SOCIETY，2009，30(1):5.

［7］王長虹，劉軍，林伊梅.反相高效液相色譜法測定駱駝蓬總堿片中去氫駱駝蓬堿和駱駝蓬堿的含量［J］.中國中醫(yī)院藥學(xué)雜志，2002，22(3):139－141.