齊 賀，黃竹青*，鄭劍玲，吳素琴，宮雁冰，王美惠，魏赤平

(1.遼寧衛(wèi)生技術(shù)職業(yè)學院，遼寧 沈陽 110101;2.北京大學首鋼醫(yī)院，北京 100144)

北蟲草是北冬蟲夏草的簡稱，也叫蛹蟲草，是國內(nèi)外公認的藥食兩用真菌。北蟲草真菌能夠產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)，如多糖、蟲草酸、蟲草素、超氧化物歧化酶(SOD)、B族維生素和多種氨基酸等，具有廣泛的藥理作用。以應(yīng)對免疫抑制和免疫衰老為中心的免疫調(diào)節(jié)是當前北蟲草免疫學研究中最為活躍和倍受關(guān)注的領(lǐng)域之一，特別是體液免疫和細胞免疫間調(diào)控的復雜性，它們之間往往組成免疫網(wǎng)絡(luò)多重的形式。通過反饋和負反饋的機理來完成調(diào)控作用，維持機體內(nèi)環(huán)境的平衡穩(wěn)定。有關(guān)中草藥提高免疫力的研究已有許多報道［1-2］，但有關(guān)復合北蟲草提取物的免疫調(diào)節(jié)功能的藥效作用尚未見相關(guān)報道。本文探討北蟲草復合制劑對免疫低下小鼠的胸腺指數(shù)、脾指數(shù)和綿羊紅細胞致小鼠溶血素抗體生成相關(guān)的免疫學指標變化，為了解其對機體的免疫調(diào)節(jié)功能提供實驗依據(jù)，以期合理開發(fā)利用北蟲草。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 昆明種小鼠，雌雄各半，體重為18～24 g近交系普通級小鼠，購自中國醫(yī)科大學實驗動物部(動物合格證號:SCXK［遼］2003-0009)。在本實驗室分籠飼養(yǎng)，自主進食，顆粒飼料，自動飲水，適應(yīng)1周后進行實驗，實驗室溫度(16±2)℃。

1.1.2 供試蟲草 天贏北蟲草(Cordyceps militaris)子實體由沈陽中天生物工程有限公司李春燕教授惠贈，子實體藥號:國家食品藥品監(jiān)督管理局審批的人工北蟲草藥材研究(批件號2003L01393、藥物臨床研究號2003L01394)。

1.1.3 試劑與儀器 北蟲草復合制劑(組成:北蟲草、人參、五味子，含蛋白質(zhì)、氨基酸、蟲草素、蟲草酸、多糖、超氧化物歧化酶和維生素E等成分，采用水提95%醇沉工藝)，含量5 mg/mL，綿羊紅細胞懸液均由遼寧省基礎(chǔ)醫(yī)學研究所制備。都氏試劑(碳酸氫鈉 1.0 g/L，高鐵氰化鉀0.2 g/L，氰化鉀0.05 g/L)，HCI、NaOH 等均為分析純。J2-21低溫離心機(美國Beckman公司);BX41型熒光顯微鏡(美國Olympus公司);AL30107型分類血液細胞分析儀(美國Thremo公司);650-66熒光分光光度計(日本日立公司)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)測定 實驗用昆明種小鼠120只，隨機分為6組，即對照組、衰老模型組、白介素-2(IL-2)與北蟲草復合制劑高、中、低3個劑量組。采用灌胃給藥，空白對照組給生理鹽水。衰老模型組采用腹腔注射6%D-半乳糖(300 mg/kg/d)，1次/d，給藥6周后，小鼠脫椎處死，處死前稱重，處死后分別取出胸腺和脾臟，剝離脂肪組織，天平稱重，測定胸腺指數(shù)和脾指數(shù)指標。

1.2.2 小鼠溶血素抗體的檢測 將100只雄性小鼠分成10組:①對照組;②免疫抑制模型組(CPA);③IL-2組;④北蟲草復合制劑低劑量3.5 g/kg+CPA;⑤中劑量給藥組10 g/kg+CPA;⑥高劑量給藥組30 g/kg+CPA。各組小鼠均以5%綿羊紅細胞(SRBC)0.2 mL/只ip致敏。于致敏前4 d 2～9組灌服給藥，給藥7 d，每天1次。1組同時灌服相同體積的生理鹽水。模型組在致敏當天開始腹腔注射CPA 7.5 mg/kg，每天1次，連續(xù)5 d。于停藥后次日取血，分離血清，以生理鹽水稀釋500倍后，37℃水浴10 min，冰浴終止反應(yīng)，離心10 min，取上清液1 mL，加1∶10稀釋的豚鼠補體1 mL，加入都氏試劑4 mL，充分搖勻，放置10 min，利用紫外可見分光光度計，以對照管作空白于540 nm處測定吸收度，按下列公式計算半數(shù)溶血值(HC50)。樣品HC50=樣品的吸收度值/綿羊紅血球溶血的吸收度值×稀釋倍數(shù)

1.2.3 統(tǒng)計學處理方法 各組數(shù)據(jù)均數(shù)用平均數(shù)±標準差表示，組間比較采用t檢驗，顯著性以P＜0.05和P ＜0.01表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 北蟲草復合制劑對小鼠胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的影響

由表1可見，與衰老模型組比較，衰老實驗組小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)顯著降低，IL-2組明顯增加，而灌胃北蟲草復合制劑的3個劑量組中，小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)與之比較均有顯著提高，統(tǒng)計學分析，具有顯著性差異，P＜0.05，P＜0.01。

2.2 北蟲草復合制劑對小鼠溶血素抗體生成的影響

由表 2可見，北蟲草復合制劑 3.5、10、30 g/kg劑量對CPA所致免疫抑制小鼠有明顯的增強免疫功能的作用。中高劑量組抗體水平明顯高于CPA組，具有顯著性差異，P＜0.01。

表1 北蟲草復合制劑對小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響(n=12，單位:mg/10 g體重)Table 1 Extract production from Cordyceps Militaris on thymus index and spleen index influence(n=12，unit:mg/10 g body weight)

表2 北蟲草復合制劑對綿羊紅細胞所致小鼠溶血素抗體生成的影響(n=7～11;單位:mg;g/kg體重;給藥途徑:灌胃和腹腔)Table 2 Extract production from Cordyceps Militaris on sheep red blood cells caused by the impact of hemolysin antibody in mice(n=7～11;unit:Mg;g/kg body weight;route of administration:intragastric administration and intraperitoneal)

3 討論

蟲草復合制劑的有效成分對機體有補益強壯和增強免疫的功能［3］。蟲草和人參中的多糖及核苷類等有效成分具有增強免疫力、延緩衰老和抗腫瘤等藥理作用已有許多報道［4］;而北蟲草具有顯著提高免疫力的作用一直受到關(guān)注。實驗結(jié)果表明:與模型組比較，衰老實驗組小鼠的胸腺和脾臟指數(shù)顯著降低，而北蟲草復合制劑的3個劑量組的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)均有顯著提高，白細胞介素-2作為免疫增強劑亦表現(xiàn)出同樣的效果。本研究中的北蟲草復合制劑3.5、10、30 g/kg劑量對CPA所致免疫抑制小鼠也表現(xiàn)出具有明顯的增強免疫功能的作用，小鼠溶血素抗體水平高于CPA組。CPA具有抑制免疫功能的作用已被廣泛認知［5］，同時還具有使脾細胞IL-2活性降低的生物效應(yīng)，二者之間表現(xiàn)為負相關(guān)。CPA可通過淋巴細胞內(nèi)的相應(yīng)受體，抑制淋巴細胞增殖，減少IL-2表達［6］，本實驗中北蟲草復合制劑提高免疫功能低下小鼠的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)及溶血素抗體水平的結(jié)果表明與增加正常小鼠的免疫器官-脾臟和胸腺的重量相關(guān)，由于免疫器官的應(yīng)答，繼而使小鼠機體免疫功能加強，表現(xiàn)出溶血素抗體生成提高。機體的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)十分復雜，尚需更深入的研究，以解釋北蟲草復合制劑提高機體免疫力的機制和作用，為更科學地利用北方特色資源提供參考。

［1］ 林飛卿，余傳霖，何球藻.醫(yī)學基礎(chǔ)免疫學［M］.上海:上海醫(yī)科大學出版社，1992:1-90.

［2］ 邢安輝，王洪軍，谷鳳文，等.北蟲草提取物促進運動性疲勞血生化指標恢復的實驗研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2010，21(10):2481-2483.

［3］ 王洪軍，呂真麟，張博平，等.北蟲草提取物增強小鼠生理體能的研究［J］.解放軍預(yù)防醫(yī)學，2009，27(3):165-167.

［4］ 黃國鑫，嚴欽惠，張仲敏，等.北蟲草提取物延緩皮膚衰老的實驗研究［J］.中國美容醫(yī)學，2011，20(4):612-614.

［5］ 吳克楓，馮燕梅，俞紅，等.不同劑量環(huán)磷酰胺對小鼠的免疫毒性研究［J］.貴州醫(yī)藥，1999，23(2):91-92.

［6］ 王文蔚，方芳，李春明.環(huán)磷酰胺對小鼠骨髓細胞微核率的影響作用研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16(9):1127-1128.