王 娜 (邢臺(tái)市人民醫(yī)院急診科，河北 邢臺(tái) 054000)

研究表明環(huán)氧化酶-2(COX-2)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C(VEGF-C)，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體-3(VEGFR-3)，生存素(surviving)及 β-連環(huán)素(β-catenin)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，故目前許多實(shí)驗(yàn)室通過對(duì)上述指標(biāo)的監(jiān)測(cè)來判定抗腫瘤藥物的效果及腫瘤的發(fā)展情況〔1〕。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明COX-2抑制劑能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移，并增強(qiáng)化療藥物的效果〔2〕。本次觀察COX-2抑制劑聯(lián)合化療藥對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)和淋巴轉(zhuǎn)移的影響。

1 材料與方法

1.1 材料 選取30只BALB/c雄性裸小鼠，體重20～25 g，均購(gòu)自天津天垚生物科技有限公司，均在無特定病原體的IVC環(huán)境中飼養(yǎng)，所用飼料及飲用水均無菌。

1.2 方法 將人肺癌A549細(xì)胞置于DMEM培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含小牛血清、青霉素及鏈霉素，培養(yǎng)基放置于溫度恒定為37℃，CO2濃度為5%的溫箱內(nèi)。待70% ～80%細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)并融合時(shí)，使用胰蛋白酶進(jìn)行消化傳代。挑取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞再次進(jìn)行消化與洗滌，使用不含牛血清的培養(yǎng)基對(duì)其進(jìn)行稀釋，并將細(xì)胞密度調(diào)整至1×107/ml。將完成培養(yǎng)的細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，使用注射器裝載2 ml上述細(xì)胞懸液注射至裸鼠右側(cè)腋部皮下。待所有小鼠的移植瘤的平均直徑生長(zhǎng)至約4 mm后，將30只小鼠按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，兩組均為15只。實(shí)驗(yàn)組腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液，每次 10 ml/kg，同時(shí)采用尼美舒利灌胃給藥，劑量20 mg·kg－1·d－1。對(duì)照組僅接受腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液，劑量與實(shí)驗(yàn)組相同。每6 d測(cè)量1次小鼠移植瘤的體積，用游標(biāo)卡尺量出腫瘤的長(zhǎng)徑(a)、短徑(b)，用公式V=ab2/2計(jì)算體積，并繪制移植瘤的生長(zhǎng)曲線。30 d后，將所有小鼠處死，切除移植瘤，分別使用免疫組化法與實(shí)時(shí)定量PCR法測(cè)定裸鼠移植瘤組織中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及 βcatenin蛋白的積分吸光度值與mRNA的表達(dá)水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)資料以±s表示，組間比較使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 兩組腫瘤生長(zhǎng)情況對(duì)比 用藥30 d后，實(shí)驗(yàn)組移植瘤體積為(562.84±197.43)mm3，對(duì)照組為(812.35±105.74)mm3，兩組移植瘤體積的差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.315，P＜0.05)。見圖1。

2.2 兩組移植瘤中 COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，Survivin及β-catenin蛋白積分吸光度值及mRNA表達(dá)水平比較 見表1，表2。實(shí)驗(yàn)組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及βcatenin蛋白的積分吸光度值及mRNA表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P ＜0.05)。

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的積分吸光度值比較(±s，n=15)

表1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin蛋白的積分吸光度值比較(±s，n=15)

-catenin實(shí)驗(yàn)組 8 412±1 496 8 403±1 445 8 415±1 813 5 513±1 488 8 32組別 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 8±1 734對(duì)照組 16 205±2 195 15 392±2 189 14 397±2 317 9 825±1 791 10 227±2 031 t值 11.362 10.320 7.870 7.172 2.754 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.010

表2 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表達(dá)水平對(duì)比(±s，n=15)

表2 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植瘤中COX-2，VEGF-C，VEGFR-3，survivin及β-catenin mRNA表達(dá)水平對(duì)比(±s，n=15)

-catenin實(shí)驗(yàn)組 0.842±0.121 0.603±0.019 0.658±0.049 0.325±組別 COX-2 VEGF-C VEGFR-3 survivin β 0.075 0.394±0.029對(duì)照組 1.368±0.197 1.256±0.175 1.371±0.068 0.647±0.061 0.442±0.028 t值 8.812 14.363 32.947 12.900 4.612 P值0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

圖1 實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組移植瘤的生長(zhǎng)曲線

3 討論

流行病學(xué)調(diào)查的結(jié)果顯示全球每年的新發(fā)肺癌病例約為100萬例，其中我國(guó)每年的新發(fā)病例約為21萬例，且每年死于肺癌的國(guó)人約為60萬〔3～6〕。由于中晚期肺癌常發(fā)生轉(zhuǎn)移，故局部治療的效果不明顯，而化療或靶向治療等全身性的藥物治療在中晚期肺癌的治療中占據(jù)了絕對(duì)的位置。

肺癌最常見的轉(zhuǎn)移途徑是淋巴轉(zhuǎn)移，研究表明COX-2具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞及內(nèi)部血管的生成與增殖、加快腫瘤轉(zhuǎn)移與侵潤(rùn)的作用，并能夠?qū)⑶爸掳┪镔|(zhì)轉(zhuǎn)化為致癌物質(zhì)以此促進(jìn)腫瘤的進(jìn)一步惡化。大量研究表明長(zhǎng)時(shí)間使用非甾體類抗炎藥能夠降低惡性腫瘤的發(fā)病危險(xiǎn)，并能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)〔7〕。目前針對(duì)抑制COX-2的分子靶向治療在臨床逐漸被普及，尼美舒利作為一種選擇性較高的COX-2抑制劑被用于惡性腫瘤的預(yù)防與治療。相比于傳統(tǒng)的非甾體類抗炎藥，尼美舒利不會(huì)抑制胃腸道黏膜前列腺素的合成，故患者的胃腸道副反應(yīng)較少。奧沙利鉑是帶三代鉑類抗腫瘤藥，其毒性較卡鉑及順鉑大大降低，對(duì)部分耐受鉑類藥物的腫瘤也有較好的作用。本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相同〔8〕，提示COX-2抑制劑與化療藥物聯(lián)合使用在抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)中有協(xié)同作用。

VEGF-C與其受體VEGFR-3結(jié)合之后能夠?qū)C(jī)體內(nèi)成熟淋巴管的生成進(jìn)行調(diào)節(jié)，并介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的淋巴道轉(zhuǎn)移。研究表明COX-2能夠催化前列腺素E2與其受體結(jié)合并激活，繼而促進(jìn)人表皮生長(zhǎng)因子受體磷酸化，最后增強(qiáng)VEGF-C基因的表達(dá)與轉(zhuǎn)錄，造成腫瘤的淋巴道轉(zhuǎn)移〔9〕。survivin是目前為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子，能夠通過與caspase結(jié)合而使其活性受到抑制，起到抑制細(xì)胞凋亡的作用。survivin在正常組織中幾乎不表達(dá)，主要分布在惡性腫瘤組織中。研究表明COX-2的高表達(dá)使得survivin的泛素化得到抑制，并加強(qiáng)了survivin的穩(wěn)定性，而當(dāng)COX-2的活性受到抑制時(shí)，survivin的表達(dá)也隨之發(fā)生下降。但當(dāng)survivin受到RNA的干擾封閉后，COX-2的表達(dá)并不發(fā)生改變，故有學(xué)者推斷COX-2位于survivin的上游，并能夠調(diào)控survivin的表達(dá)〔10〕。β-catenin是一種在機(jī)體生長(zhǎng)發(fā)育過程中具有指導(dǎo)作用的細(xì)胞骨架成分，但在腫瘤細(xì)胞中，其能夠通過對(duì)下游靶基因c-myc與cyclinD1的調(diào)節(jié)來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。Noda等發(fā)現(xiàn)E-cadherin與β-catenin關(guān)系密切，而COX-2抑制劑可以對(duì)E-cadherin進(jìn)行上調(diào)來抑制β-catenin，進(jìn)而抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移〔11，12〕。綜上所述，COX-2抑制劑聯(lián)合化療藥具有協(xié)同抗腫瘤的作用，并抑制了腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與淋巴轉(zhuǎn)移，值得推廣。

1 錢桂生，余時(shí)滄.肺癌流行病學(xué)最新資料與啟示〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志，2012;35(2):86-9.

2 徐 馳，葉玉坤，汪 棟，等.微小RNA在非小細(xì)胞肺癌中的差異性表達(dá)和潛在應(yīng)用價(jià)值〔J〕.中華醫(yī)學(xué)雜志，2012;92(48):3451-3.

3 張秀芬，陳 剛.尼美舒利對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤的治療作用及其機(jī)制〔J〕.中華結(jié)核和呼吸雜志，2011;34(6):469-71.

4 張 清，陳 雨.老年肺癌與青年肺癌患者臨床對(duì)比分析〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2011;31(20):4062-3.

5 張 輝.老年初診肺癌住院患者生活質(zhì)量現(xiàn)狀調(diào)查〔J〕.中國(guó)老年學(xué)雜志，2012;32(5):1016-8.

6 昌 盛，代 敏，任建松，等.中國(guó)2008年肺癌發(fā)病、死亡和患病情況的估計(jì)及預(yù)測(cè)〔J〕.中華流行病學(xué)雜志，2012;33(4):391-4.

7 郎 哲，陳 剛，王東昌，等.尼美舒利聯(lián)合奧沙利鉑對(duì)人肺癌裸鼠移植瘤生長(zhǎng)及淋巴轉(zhuǎn)移的抑制作用〔J〕.中華腫瘤雜志，2012;34(10):739-44.

8 段光軍，吳曙華，胡華成，等.環(huán)氧化酶-2表達(dá)與老年人非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系〔J〕.中華老年醫(yī)學(xué)雜志，2009;28(2):133-5.

9 田 鋒，王天佑，龔 民，等.非小細(xì)胞肺癌環(huán)氧化酶-2的增強(qiáng)表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中華外科雜志，2003;41(6):407-10.

10 陳麗昆，何友兼，黃 河，等.選擇性COX-2抑制劑對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株毒性及分子機(jī)制的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2007;14(12):901-4.

11 Zhan P，Qian Q，Yu LK.Prognostic value of COX-2 expression in patients with non-small cell lung cancer:a systematic review and meta-analysis〔J〕.J Thorac Dis，2013;5(1):40-7.

12 Ramer R，Heinemann K，Merkord J，et al.COX-2 and PPAR-γ confer cannabidiol-induced apoptosis of human lung cancer cells〔J〕.Mol Cancer Ther，2013;12(1):69-82.