朱劍波，邱細(xì)敏，郭思維，張 為，楊小紅，王 瓊，李 威

(湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410006)

奧美沙坦酯是一種強(qiáng)效和特異性血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑，該藥對不同程度的高血壓病人均有很好的療效，其代謝產(chǎn)物奧美沙坦是生理活性的藥物[1]。奧 美 沙 坦 酯(Olmesartan Medoxomi I)由日本S a n k y o(三共公 司)和 美 國Fo r e s t La b o r a t o r i e s 開發(fā)，2002年5月以商品名Benicar在美國上市，同年8月在德國獲批準(zhǔn)并在10月初上市。多項(xiàng)臨床表明其降壓效果和預(yù)防靶向器官的損傷作用更為理想，該藥無論單獨(dú)使用或與其他藥物合用，均有較好的降壓效果，且耐受性良好，顯示出很好的應(yīng)用前景。2008年，奧美沙坦酯全球性銷售額已達(dá)到了21.57 億美元，同比上一年增長了14.01%，是一個快速增長的品種。其突出特點(diǎn)是半衰期較長，一天服用一次，即可以在一天內(nèi)有效控制血壓，因此服用較為方便。同時奧美沙坦酯與其他的血管緊張素II 受體拮抗劑類藥物相比，該藥的劑量小、起效快，服用方便，降壓作用更強(qiáng)而持久，不良反應(yīng)的發(fā)生率低(小于1%)，具有明顯的優(yōu)點(diǎn)[2-4]。本課題采用新的合成方法（正在申請專利）獲得的新的仿制藥奧美沙坦酯避開了日本三共公司的發(fā)明專利，將其國產(chǎn)化，必將大大降低廣大患者的治療成本。

新的合成工藝帶來了新的中間產(chǎn)物，該法引入了6 個中間雜質(zhì)，其結(jié)構(gòu)如圖1。為有效控制該奧美沙坦酯在生產(chǎn)及貯存中產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì),建立了奧美沙坦酯有關(guān)物質(zhì)及含量測定的高效液相色譜法。試驗(yàn)證明：本法使各有關(guān)物質(zhì)與主藥均能完全分離,方法專屬性強(qiáng),重復(fù)性好,靈敏度高,可用于生產(chǎn)質(zhì)量控制[5-7]。

圖1 奧美沙坦酯及其相關(guān)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)式

1 儀器與材料

島津高效液相色譜儀；紫外檢測器；超聲清洗器；電子分析天平XP205（梅特勒公司）；酸度計(jì)PHS-3C(上海鵬順科技有限公司)。

奧美沙坦酯化學(xué)對照品(中國藥品生物制品檢定所提供，含量為99.5%）；乙腈（色譜純）；其他試劑為分析純；水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：ODS-C8 柱(4 .6mm×150 mm，5μm）,紫外檢測器，檢測波長：256nm,檢測器溫度：25℃，流動相A；磷酸緩沖鹽 (1.36 g 磷酸二氫鉀，加人1000mL 水溶解，加入2mL 三乙胺，用磷酸緩沖液調(diào)節(jié)PH 至2.8)流動相B；乙腈，按表1 進(jìn)行梯度洗脫。

表1 梯度洗脫條件

2.2 專屬性實(shí)驗(yàn)

分別精密稱取奧美沙坦酯及其相關(guān)物質(zhì)適量，加80%乙腈水溶液溶解并稀釋制成1.0 mg/mL的混合溶液，精密進(jìn)樣10ul，記錄色譜圖，如圖1.其中3 為主成分峰。

圖1 奧美沙坦酯及其相關(guān)物質(zhì)的分離色譜圖

2.3 線性

精密稱取奧美沙坦酯標(biāo)準(zhǔn)品適量，加80%乙腈 水 逐 級 稀 釋 配 成0.2μg/mL，2μg/mL，20μg/mL,0.1mg/mL,0.2mg/mL,0.5mg/mL的 溶 液，分 別 進(jìn) 樣10μL，記錄色譜圖。結(jié)果如圖2.以奧美沙坦酯原料濃度為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其回歸方程為：y=21535x+49822；R2=0.9997。結(jié)果表明，奧美沙坦酯原料在濃度為0.2μg/ml～500μg/mL的范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

圖2 奧美沙坦酯的標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 降解產(chǎn)物的分離

取奧美沙坦酯對照品經(jīng)降解所得產(chǎn)物進(jìn)行HPLC 分離檢測(圖3)。結(jié)果表明經(jīng)酸、堿、氧化、高溫、高濕和光照破壞所產(chǎn)生的有關(guān)物質(zhì)與主藥峰達(dá)

到完全分離,本法專屬性良好，如圖3。

圖3 降解產(chǎn)物分解圖譜

2.5 檢測線的確定

取奧美沙坦酯對照溶液，加80%乙腈水逐級稀釋，按信噪比3：1 時的進(jìn)樣量為最低檢測線，結(jié)果奧美沙坦酯的檢測線為0.4ng

2.6 精密度試驗(yàn)

精密配置奧美沙坦酯溶液，精密連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算主峰面積的RSD。結(jié)果峰面積的RSD 為0.3%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號樣品6 份，在同一條件下，分別配置成同一濃度溶液，分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖。結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號樣品適量，加80%乙腈水溶解，配制成為0.2mg/mL，分別放置0,2,4,6,8 小時后，精密進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，結(jié)果主峰面積的RSD 為0.22%。

2.9 耐用性試驗(yàn)

分別考察流動相pH 值變化±0.2、柱溫變化±5℃、檢測波長變化±5nm、流速相對值變化±20%以及采用三根不同批號的色譜柱進(jìn)行測定時，儀器色譜行為的變化，每個條件下各測試兩次。結(jié)果表明各雜質(zhì)峰的拖尾因子不得大于2.0，雜質(zhì)峰與其他成分峰必須達(dá)到基線分離，各條件之間雜質(zhì)含量絕對值在±0.1%以內(nèi)。并分別在各條件下，平行配置6 份溶液，分別進(jìn)樣。結(jié)果表明各條件下的雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)（n=6）的RSD 不大于2.0%。

2.10 有關(guān)物質(zhì)的測定

2.10.1 質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%主成分自身對照法

取奧美沙坦酯適量，加乙腈超聲溶解并稀釋制1 mg/mL的溶液，作為供試品溶液；精密量取1 mL，置100 mL 量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，作為對照溶液；精密量取對照溶液10 L，注入液相色譜儀，按上述色譜條件測定，調(diào)節(jié)儀器靈敏度，使主峰的峰高為滿量程的25%；再精密量取供試品溶液10 L，注人液相色譜儀，記錄色譜圖，如有雜質(zhì)峰，除空白溶劑峰外，量取雜質(zhì)峰面積，與對照溶液主峰面積比較并計(jì)算（三批樣品平行進(jìn)行）。結(jié)果見表2。

表2 奧美沙坦酯中有關(guān)物質(zhì)的含量

2.10.2 奧美沙坦酯含量測定

取奧美沙坦酯原料藥適量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1mg的溶液,作為供試品溶液;另取奧美沙坦酯對照品適量,加80%乙腈水制成每1 mL中含1 mg的溶液,作為對照品溶液;取溶液10μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖按外標(biāo)法計(jì)算含量。結(jié)果見表3。

表三批樣品含量測定結(jié)果

3 討論

在選擇色譜條件時，首先參照了文獻(xiàn)[1]，在此基礎(chǔ)上再進(jìn)行的一系列的改變。第一，取混合對照溶液,用紫外檢測器檢測并分析紫外光譜圖。結(jié)果顯現(xiàn)奧美沙坦酯與其相關(guān)物質(zhì)均在波長256 nm 處有較大吸收,同時在該波長下,梯度洗脫時空白干擾小,因此選擇波長256 nm 作為檢測波長。第二，選擇流動相梯度洗脫條件時,在文獻(xiàn)參考的基礎(chǔ)上進(jìn)行了一系列的摸索。第三，在有關(guān)物質(zhì)檢測方面，目前一般文獻(xiàn)都是用的C18 柱，C8 柱用的較少，本課題通過比較C18和C8 柱發(fā)現(xiàn)，在能有效的分離的情況下用C8 柱可以大大縮短分析時間，提高分析效率，并且基線更平穩(wěn)。除此之外，在方法學(xué)考察方面，本課題對其方法進(jìn)行了耐用性試驗(yàn)，更完善的說明該方法的可靠性和實(shí)用性。

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