徐 菡 樂家新* 蘭亞婷 任 爽

BC-5300自動(dòng)血細(xì)胞分析儀是深圳邁瑞公司生產(chǎn)的白細(xì)胞五分類血細(xì)胞分析儀。該儀器利用電阻抗檢測(cè)法、流式細(xì)胞技術(shù)及細(xì)胞化學(xué)染色技術(shù)聯(lián)合進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC)、白細(xì)胞五分類(Neut、Lym、Mon、Eos、Baso)測(cè)量，可提供23項(xiàng)血液學(xué)參數(shù)，并給出白細(xì)胞分類散點(diǎn)圖、紅細(xì)胞和血小板的體積分布直方圖。為了解其全血細(xì)胞計(jì)數(shù)及白細(xì)胞分類的性能，以便納入到科室的ISO 15189質(zhì)量管理體系，更好地應(yīng)用于臨床工作。本研究參照國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)和美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)文件[1-2]的有關(guān)規(guī)定對(duì)該儀器血細(xì)胞參數(shù)進(jìn)行了初步測(cè)試及評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

(1)待測(cè)儀器：BC-5300自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、配套試劑、全血質(zhì)控物和校準(zhǔn)物均由深圳邁瑞公司提供。

(2)比對(duì)儀器：XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀、配套試劑、全血質(zhì)控物及校準(zhǔn)物均由日本SYSMEX公司提供。

1.2 血標(biāo)本

血標(biāo)本來自我院住院患者。受檢者早晨空腹，用真空抗凝管(BD公司生產(chǎn)，含EDTA-2K 3.6 mg)從肘靜脈采血2 ml，混勻后室溫(20～24 ℃)放置，于采血后1～4 h(總重復(fù)性5 h內(nèi))完成檢測(cè)。

1.3 檢測(cè)方法

BC-5300每日開機(jī)后預(yù)熱至少30 min，全血質(zhì)控物測(cè)試合格后檢測(cè)待測(cè)標(biāo)本。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)用Microsoft Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用x±s表示，比較兩種方法的相關(guān)性采用線性回歸分析。

1.5 質(zhì)量控制

BC-5300血細(xì)胞分析儀由廠家工程師安裝調(diào)試完畢，按照儀器操作程序，用配套的全血校準(zhǔn)物將全血細(xì)胞參數(shù)校準(zhǔn)。每次實(shí)驗(yàn)前，先測(cè)試全血質(zhì)控物，結(jié)果均在其靶值允許的范圍內(nèi)。比對(duì)儀器XE-2100(實(shí)驗(yàn)前已校準(zhǔn))每天測(cè)量全血質(zhì)控物，結(jié)果均在質(zhì)控物靶值允許的范圍內(nèi)。

2 評(píng)價(jià)指標(biāo)與結(jié)果

2.1 總重復(fù)性

隨機(jī)選取臨床新鮮抗凝靜脈血20份(其中異常標(biāo)本11份)，隨機(jī)排列，在BC-5300上按全血模式測(cè)定1次，該批樣本室溫放置2 h及4 h后，再按上述順序重復(fù)測(cè)定1次，檢測(cè)數(shù)據(jù)根據(jù)公式1計(jì)算得出各評(píng)價(jià)參數(shù)的總CV%。結(jié)果：除PLT為3.17%外，WBC、RBC、HGB和MCV均＜1.7%。

其中: SSQ(組內(nèi)離均差平方和)=∑(各測(cè)定值)2-∑(各樣本小計(jì))2/n。n：重復(fù)測(cè)定次數(shù)，u：樣本數(shù)。

2.2 精密度

包括批內(nèi)精密度和批間精密度。

(1)批內(nèi)精密度：選取高、中、低值質(zhì)控品，分別在全血及預(yù)稀釋模式下進(jìn)行測(cè)試，每種水平的質(zhì)控品均測(cè)試20次，計(jì)算CV%，CV均＜1/4CLIAA’88。見表1。

(2)批間精密度：選取高、中、低值質(zhì)控品，在全血模式下進(jìn)行測(cè)試，每種水平的質(zhì)控品每日測(cè)試1次，連續(xù)測(cè)量20 d，計(jì)算CV%。結(jié)果:3個(gè)水平質(zhì)控品的WBC、RBC、HGB、MCV、PLT的CV分別＜3.0%、1.7%、1.5%、0.8%和4.9%，CV均＜1/3CLIAA’88。

2.3 攜帶污染率

先取1份高值血細(xì)胞樣本連續(xù)測(cè)定3次，隨后立即取配套稀釋液作為低值血細(xì)胞樣本連續(xù)測(cè)定3次，根據(jù)公式2計(jì)算：

表1 兩種模式批內(nèi)精密度測(cè)定結(jié)果(%)

結(jié)果：2種檢測(cè)模式 WBC、RBC、HGB和PLT的攜帶污染率在-0.49%～0.80%之間，均符合＜1%的要求。

2.4 稀釋效應(yīng)

取1份高值血細(xì)胞抗凝血樣本離心除去部分血漿，WBC、RBC、HGB和PLT值分別為103.9×109/L、7.51×1012/L、267g/L和1113×109/L，以此樣本為100%。再用稀釋液將該血樣本按90%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10% 和0%進(jìn)行稀釋，然后從低到高測(cè)定不同稀釋度的血樣本，每份重復(fù)測(cè)定2次取均值，并與各稀釋度的期望值(期望值=原始數(shù)值×稀釋度)進(jìn)行相關(guān)分析。均符合線性回歸方程的斜率在1±0.05范圍內(nèi)和相關(guān)系數(shù)r≥0.975的檢測(cè)要求見表2。

表2 BC-5300稀釋效應(yīng)

2.5 可比性

(1)BC-5300模式間測(cè)定結(jié)果的可比性：隨機(jī)選取40份臨床新鮮抗凝靜脈血，每份樣本分別在BC-5300的全血及預(yù)稀釋模式各測(cè)定2次，取均值統(tǒng)計(jì)以觀察2種進(jìn)樣模式下CBC各參數(shù)的相關(guān)性，結(jié)果見表3。

表3 BC-5300模式間相關(guān)性和偏差比較

(2)BC-5300與XE-2100測(cè)定結(jié)果的可比性：隨機(jī)選取181份臨床新鮮抗凝靜脈血，每份樣本分別在BC-5300上以自動(dòng)進(jìn)樣模式連續(xù)檢測(cè)2次，然后立即在XE-2100上以自動(dòng)進(jìn)樣模式連續(xù)檢測(cè)2次，各取平均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表4。

表4 BC-5300與XE-2100相關(guān)性和偏差比較

2.6 白細(xì)胞分類

(1)精密度：取1份抗凝血(其中Neut 48.88%、Lym 43.63%、Mon 5.66%、Eos 1.46%和Baso 0.37%)在BC-5300儀器全血模式重復(fù)測(cè)定11次，取第2～11次的白細(xì)胞分類結(jié)果計(jì)算CV值。五類白細(xì)胞(Neut、Lym、Mon、Eos和Baso)重復(fù)測(cè)定的CV值分別為1.47%、1.08%、7.60%、11.73% 和51.04%。

(2)可靠性：取202例臨床新鮮抗凝靜脈血在BC-5300儀器上測(cè)定，每份樣本重復(fù)測(cè)2次取均值。同時(shí)每份血推3張符合質(zhì)控要求的血片，瑞氏染色后其中2張血片(另1張備用)由2位有經(jīng)驗(yàn)的技師在體尾交界處按“白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法”[3]進(jìn)行白細(xì)胞分類，分為Neut、Lym、Mon、Eos、Baso及各類異常細(xì)胞，每張血片油鏡分類計(jì)數(shù)200個(gè)白細(xì)胞，共計(jì)400個(gè)白細(xì)胞取均值，再與BC-5300儀器的白細(xì)胞分類值進(jìn)行比較。其中136例人工鏡檢白細(xì)胞形態(tài)正常的樣本，BC-5300儀器與人工鏡檢白細(xì)胞分類的結(jié)果比較見表5。其余66例人工白細(xì)胞分類異常的血樣本中，大部分為血液系統(tǒng)疾病、腫瘤放化療、嚴(yán)重感染和外科大手術(shù)后出現(xiàn)異常細(xì)胞的病例。這些樣本在BC-5300儀器上測(cè)定，53例白細(xì)胞散點(diǎn)圖有較明顯變化或報(bào)警提示。剩下的13例中，異常細(xì)胞的比例較低，其白細(xì)胞散點(diǎn)圖變化不太明顯，儀器也未報(bào)警。在202份血樣中發(fā)現(xiàn)11例儀器假陽性報(bào)警(核左移和幼稚粒細(xì)胞)，人工白細(xì)胞分類未見幼稚粒細(xì)胞，但可見中性粒細(xì)胞有中毒顆粒、空泡變性或Dohle小體等中毒性改變及核固縮和碎裂等退行性變化。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)所得到的數(shù)據(jù)顯示：BC-5300儀器全血和預(yù)稀釋模式測(cè)定各參數(shù)的批內(nèi)和批間精密度良好，除低值血小板CV值在3.98%～4.84%外，其他CBC參數(shù)的CV值均＜3%?？傊貜?fù)性CV值在要求范圍內(nèi)，除血小板＜3.2%，其它CBC參數(shù)均＜1.7%。攜帶污染率低，2種模式測(cè)定的CBC參數(shù)的攜帶污染率均＜1%，符合檢測(cè)要求。在常見的正常及病理范圍線性良好，所測(cè)CBC參數(shù)各稀釋度的實(shí)測(cè)值與期望值之間密切相關(guān)(r＞0.998)。兩種進(jìn)樣模式間檢測(cè)的結(jié)果相關(guān)性好，參數(shù)r2值均＞0.98；與XE-2100(自動(dòng)進(jìn)樣)檢測(cè)的血細(xì)胞結(jié)果對(duì)比分析，兩者具有高度相關(guān)性，CBC各參數(shù)r2值均＞0.99，顯示該儀器CBC計(jì)數(shù)性能良好。

表5 BC-5300與人工白細(xì)胞分類相關(guān)性測(cè)試結(jié)果(n=136)

白細(xì)胞分類：Neut、Lym、Mon、Eos和Baso重復(fù)測(cè)定的CV值分別為1.47%、1.08%、7.60%、11.73%和51.04%。136份人工鏡檢白細(xì)胞形態(tài)正常的樣本，BC-5300儀器與人工鏡檢白細(xì)胞分類的結(jié)果比較(r值)，Neut、Lym和Eos分類結(jié)果的一致性良好(r=0.9663，r=0.9595，r=0.9178)，Mon次之(r=0.9014)，Baso的分類結(jié)果相關(guān)性欠佳(r=0.5065)。出現(xiàn)上述現(xiàn)象的主要原因可能與外周血中Baso數(shù)量少、且在血片中分布不均有關(guān)[4]。對(duì)血液病樣本出現(xiàn)一定比例的原幼細(xì)胞、中或晚幼粒細(xì)胞和異型淋巴細(xì)胞，BC-5300儀器上白細(xì)胞散點(diǎn)圖可有較明顯變化或報(bào)警提示。對(duì)血樣中僅有少量的異常細(xì)胞或中性粒細(xì)胞出現(xiàn)中毒性改變時(shí)，該儀器可出現(xiàn)假陰性或假陽性報(bào)警。由于用于研究的病理標(biāo)本的數(shù)量和種類有限，有些臨床病理標(biāo)本尚未涉及到，有待下一步繼續(xù)研究。

盡管血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類的檢測(cè)已由過去單純的電阻抗原理發(fā)展到光散射、細(xì)胞化學(xué)染色、熒光染色、高頻傳導(dǎo)和鞘流技術(shù)等聯(lián)合應(yīng)用，有些儀器還能夠?qū)Ψ治鰳?biāo)本中的原始細(xì)胞、未成熟粒細(xì)胞、核左移和異型淋巴細(xì)胞等進(jìn)行報(bào)警提示，極大提高了工作效率。但迄今為止，血細(xì)胞分析儀在形態(tài)學(xué)檢查仍只能作為一種過篩手段，當(dāng)遇到可疑情況，尤其是病理標(biāo)本的檢測(cè)，仍需進(jìn)行人工顯微鏡復(fù)查[5-7]。因此，這類儀器的白細(xì)胞分類也只能起“過篩”作用。不僅當(dāng)白細(xì)胞數(shù)量異常、散點(diǎn)圖或直方圖異常；有異常細(xì)胞報(bào)警提示；分類結(jié)果明顯異?；虿环诸惣澳承┨厥鈽?biāo)本，而且當(dāng)紅細(xì)胞和血小板的直方圖異?；蛴挟惓?bào)

警提示等情況時(shí)，都應(yīng)進(jìn)行人工鏡檢復(fù)核，以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性[8-9]。同時(shí)還要注意標(biāo)本保存條件和儀器工作狀態(tài)對(duì)血細(xì)胞檢測(cè)結(jié)果的影響[9-10]。因此，各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)所用的血細(xì)胞分析儀性能特點(diǎn)、醫(yī)院規(guī)模、病種差異和常規(guī)工作的質(zhì)量管理要求等，制定適用的“血細(xì)胞分析后血涂片復(fù)檢規(guī)則”，對(duì)異常標(biāo)本進(jìn)行血涂片染色人工復(fù)檢，使之既能防止漏掉異常細(xì)胞，又能適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室常規(guī)工作的需要[10-11]。這是目前血細(xì)胞分析儀合理使用需要研究的重要課題之一。

通過對(duì)BC-5300自動(dòng)血細(xì)胞分析儀的系統(tǒng)評(píng)價(jià)，表明其檢測(cè)速度較快，提供的參數(shù)較多，與其他血細(xì)胞分析儀的檢測(cè)結(jié)果可比性較強(qiáng)、相關(guān)性較好。該儀器操作簡便，具有較高的數(shù)據(jù)處理和儲(chǔ)存能力；而且有雙向傳輸?shù)裙δ?。因此，該儀器不僅適用中小基層醫(yī)院的檢驗(yàn)科室，也能滿足較大醫(yī)院檢驗(yàn)科室的需求，是一款較理想的自動(dòng)五分類血細(xì)胞分析儀。

[1][No authors listed].Guidelines for the evaluation of blood cell analysers including those used for differential leucocyte and reticulocyte counting and cell marker applications. International Council for Standardization in Haematology:prepared by the ICSH Expert Panel on Cytometry[J].ICSH,1994,16(2):157-174.

[2]National Committee for Clinical Laboratory Standards.Methed comparison and bias estimation using patient sample[S].Approved Guideline—Second Edition(Interim Revision)EP9-A2.Pennsylvania:NCCLS,2010:1-20.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn).WS/T246-2005白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)參考方法[S].中華人民共和國衛(wèi)生部,2005-06-08.

[4]Vives-Corrons JL,Besson I,Jou JM,et al.Evalution of the Abbott Cell-DYN 3500 hematology analyzer in university hospital[J].Am J Clin Pathol,1996,105(5):553-559.

[5]叢玉隆,樂家新.現(xiàn)代血細(xì)胞分析技術(shù)與臨床[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2005:64-220.

[6]樂家新,王成彬,徐菡,等.XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞分類的可靠性研究[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備,2010,31(7):73-75.

[7]樂家新,徐菡,蘭亞婷,等.Sysmex XS-800i血細(xì)胞分析儀性能評(píng)價(jià)與白細(xì)胞分類探討[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備,2008,29(12):86-88.

[8]韋仕瑜,樂家新,徐菡,等.抗凝血保存溫度和時(shí)間對(duì)血液分析儀測(cè)定結(jié)果的影響[J].中國醫(yī)學(xué)裝備,2011,8(4):33-35.

[9]陳琪明,葛閩霞.Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀工作原理和故障維修思路[J].中國醫(yī)學(xué)裝備,2012,9(3):87-89.

[10]叢玉隆,王昌富,樂家新.血細(xì)胞自動(dòng)化分析后血涂片復(fù)審標(biāo)準(zhǔn)制定的原則與步驟[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2008,31(7):729-732.

[11]XE-2100血細(xì)胞分析復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)制定協(xié)作組(叢玉隆,樂家新執(zhí)筆).Sysmex XE-2100自動(dòng)血細(xì)胞分析和白細(xì)胞分類的復(fù)檢規(guī)則探討[J].中華醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志,2008,31(7):752-757.